喷施赤霉素对葡萄果实抗氧化能力的影响

□ 刘 斌 江西新瑞丰生化股份有限公司

葡萄是较古老的果树品种之一，其植物化石最早被发现于第三纪地层中，葡萄不仅美味可口，还有超高的营养价值、药用价值和经济价值。葡萄中含有多种维生素以及人体所需氨基酸，可以有效预防心脑血管疾病，葡萄中的多种果酸还有助于消化，而且葡萄性平，有补气血、强筋骨的功效，另外葡萄也是重要的生产原料，葡萄酒、葡萄干、葡萄籽饮料都是以葡萄为原料生产的，是现代比较流行的餐饮食品。

1 实验方案设计

类黄酮是一种植物次级代谢产物，也被称为维生素P，因多呈黄色而被称为生物类黄酮，在自然界中分布广泛，苔藓植物、被子植物、椰菜、葡萄与木瓜茶叶中都含有一定量的类黄酮[1]。而且类黄酮具有清除自由基、抗氧化作用，还可以调节免疫力、具有抗菌、抗病毒作用[2]。现阶段类黄酮常用于治疗静脉疾病、胃溃病、糖尿病和预防癌症。而且葡萄、蜂胶等富含类黄酮的植物也被广泛开发，用于制作抗氧化食品。此实验秉持“单一变量原则”，即在其他条件不变的情况下，以不同浓度的赤霉素为变量元素，探究其对葡萄果实抗氧化能力的影响。

2 试验方法

2.1 实验流程

实验前，准备好质量浓度分别为50、100、150 mg/L的赤霉素，然后根据葡萄成熟期选定喷施日期，喷施时间在成熟期前一个月，选用不同浓度的赤霉素，使用压力喷壶对植株上的果实进行喷施，一个月后分别从植株上、中、下部均匀采摘无病虫害果实10颗，用于实验研究。

2.2 实验过程

2.2.1 制备提取液

首先将采摘的无病虫害果实取出，切除其中的1/4，然后切碎，并在液氮环境中将果实研磨成粉末，然后称取0.60 g鲜样粉末置于10 mL离心管中，加入6 mL提取液（40%的酸化甲醇，其中包含0.1%盐酸），旋涡震荡混匀，在不高于40 ℃的温度下超声提取30 min（40 kHz），后离心15 min，重复上述步骤提取3次，将滤液合并放置，待测定。

2.2.2 测定类黄酮含量

NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 比色 法是应用最为广泛的测定植物和药材中总黄酮类物质的方法，本次试验亦采用此方法测定类黄酮含量。向待测样品溶液中分别加入亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液，然后再在500 nm或510 nm处测定吸光值。

2.2.3 测定抗氧化能力

2.2.3.1 DPPH法测定抗氧化能力

DPPH是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，向其中加入类黄酮等自由基清除剂时，其在517 nm处的吸光度会变小，且添加量与吸光度呈线性关系，因此可以用来测定抗氧化能力。为了更直观的体现出抗氧化能力的变化趋势，在测定抗氧化能力时，可以利用提取液作为样品，用40%的甲醇稀释液作为空白组进行对照。样品组：吸取0.2 mL样品稀释液，加入2.8 mL浓度为0.1 mmol/L的DPPH溶液，室温避光反应30 min。DPPH自由基清除率=[（空白组-样品组）/空白组]×100%。

2.2.3.2 ABTS法测定抗氧化能力

ABTS+溶液由ABTS和过二硫酸钾的混合液经无水乙醇稀释而成，其在734 nm处有最大吸光值，可以利用这一特性来测定抗氧化能力。样品组：吸取0.1 mL样品稀释液，加入3.9 mL ABTS+溶液，室温避光反应10 min，于734 nm处测定吸光值。

ABTS自由基清除率=[（空白组-样品组）/空白组]×100%。

2.2.3.3 FRAP法测定抗氧化能力

该测试法原理是酸性条件下，抗氧化物可以还原产生蓝色物质，随后在593nm处测定吸光值，即可得知样品抗氧化能力。FRAP溶液为0.1 mol/L的醋酸钠缓冲液（pH=3.6）、10 mmol/L的TPTZ、20 mmol/L的三氯化铁的混合液，体积比10∶1∶1。样品组：吸取0.1 mL样品稀释液，加入4.9 mL FRAP溶液，室温避光反应10 min，593 nm处测定吸光值。

3 结果分析

图1即为不同质量浓度赤霉素下葡萄果实类黄酮含量，横坐标是不同浓度的赤霉素，纵坐标是葡萄果实中类黄酮含量的质量分数，图2为不同质量浓度赤霉素下葡萄果实抗氧化能力。

从图1中可以看出喷施赤霉素使果实中类黄酮含量降低，并且随着赤霉素浓度的升高，类黄酮含量均呈现出先升下降的趋势。

横坐标为赤霉素质量浓度，纵坐标是三个抗氧化指标，通过对3种测定指标的分析可知，在不同质量浓度赤霉素的处理下，ABTS的变化率最低，受赤霉素的影响较小，而FRAP和DPPH受赤霉素的影响较大，但是差别不大。从图中还可以看出喷施3种浓度的赤霉素均会使使葡萄果实的抗氧化能力降低，并且随着赤霉素浓度的升高，在50～150 mg/L范围内，抗氧化能力同样也出现先升后降的趋势，但相比于对照组吸光值的判定可知，喷施赤霉素后，葡萄果实的抗氧化能力均有不同程度的减小。

图1 不同质量浓度赤霉素下葡萄果实类黄酮含量

图2 不同质量浓度赤霉素下葡萄果实抗氧化能力

4 结论

由本次试验数据可知：喷施赤霉素可以在一定程度上降低葡萄果实中类黄酮的含量，同时其抗氧化能力也随之降低。但是喷施不同浓度的赤霉素对葡萄果实抗氧化能力的影响并不规律，以本次试验为例，其中质量浓度为50、150 mg/g的赤霉素对葡萄果实抗氧化作用的降低效果比质量浓度为100 mg/g时的效果更好，同时由图1和图2可知，喷施3种浓度的赤霉素，葡萄果实的抗氧化能力均有一定程度的降低，但是随着浓度的升高，抗氧化能力也呈现出先升后降的趋势，也可以得出，赤霉素对于葡萄果实中类黄酮的合成有抑制作用，可以有效降低葡萄果实的抗氧化能力，且随着赤霉素浓度的不同，抑制作用的强弱也不同。