UPLC测定健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的含量

王丹丹

摘要：目的  使用UPLC测定健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量。方法  采用Waters H-class 超高效液相色谱仪测定白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量，色谱柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱温：30℃，进样量：2 μl，检测波长：220 nm，流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱，流速：0.2 ml/min。结果  白术内酯Ⅰ线性方程为y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），线性范围2～160 μg/ml;白术内酯Ⅲ的线性方程为y=0.0786x（r=0.9998），线性范围3～140 μg/ml;白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ的精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求。结论  初步建立了健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量测定的高效、迅速的检测方法，为下一步质量标准的提高奠定基础。

关键词：UPLC;白术内酯Ⅰ;白术内酯Ⅲ

中图分类号：R284.1                                     文献标识码：A                             DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.053

文章编号：1006-1959（2019）21-0159-03

Abstract：Objective  To determine the content of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid by UPLC. Methods  The contents of atractylenolide I and atractylenolide III were determined by Waters H-class ultra performance liquid chromatography. Column： Waters BEH C18 （50 mm × 2.1 mm， 1.7 μm）， column temperature： 30°C， injection Amount： 2 μl， detection wavelength： 220 nm， mobile phase： acetonitrile （A）-water （B）， gradient elution， flow rate： 0.2 ml/min. Results  The linear equation of atractylenolide I was y=0.0528x+0.0241 （r=0.9998）， the linear range was 2～160 μg/ml; the linear equation of atractyl lactone III was y=0.0786x （r=0.9998）， linear range 3 ～140 μg/ml; the precision， repeatability， stability and recovery rate of atractylenolide I and atractylenolide III meet the requirements. Conclusion  The high-efficiency and rapid detection method for the determination of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid was established， which laid a foundation for the improvement of quality standards.

Key words：UPLC;Atractylenolide I;Atractylenolide III

健脾益肺口服液為我院的自制院内制剂，主要功效为益气，固表，止汗，健脾益肺。临床上用于表虚不固，咳喘，自汗恶风，脾虚便溏，或体虚易感风邪者;症见小儿哮喘、体质虚弱易感者，脾肺气虚证表现为慢性阻塞性肺病。组方主要药物包括有黄芪、党参、白术、山药、防风、扁豆、鸡内金等。白术在方中是主要组成药物之一，是为臣药，来源于菊科植物白术的干燥根茎[1]，是浙江的道地药材，使用历史悠久，全国均有栽培。目前在用的炮制品主要有土炒白术和麸炒白术，具有健脾益气、燥湿利水的作用，健脾益肺口服液中选用麸炒白术，取白术经麦麸炮制之后更能增强白术的健脾作用，同时对君药能起到协同增效的作用，并增强黄芪、党参补脾肺之气的作用。现代研究发现，白术中多含挥发油，其主要化学成分为白术内酯类成分、多糖、苷类等[2]，但其性质在常温下并不稳定，因此选择测定性质相对稳定且含量较高白术内酯类成分作为白术的指标性检测成分[3]。本文主要使用UPLC测定健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量，现报道如下。

1资料与方法

1.1仪器  Waters H-class超高效液相色谱仪;水蒸气蒸馏装置（自制）;高速万能粉碎机（常州毅康药化设备有限公司）;超纯水系统（edi，北京丰裕华环环保科技有限公司）。

1.2药品  白术内酯Ⅰ（青岛捷士康生物科技有限公司，批号：185266，纯度>98%），白术内酯Ⅲ（青岛捷士康生物科技有限公司，批号：173652，纯度>98%）;乙腈、甲醇（TEDIA色谱纯）;健脾益肺口服液（本院自制，批号：20180712;20181103;20190320），本品为棕褐色澄明的液体，味微苦、涩。相对密度、pH值、装量差异均符合《中华人民共和国药典》2015年版的规定。

1.3色谱条件  色谱柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱温：30℃，进样量：2 μl;检测波长：220 nm，流动相：（A）-水（B），梯度洗脱：0～2.5 min，40%B～20%B;2.5～4min，20%B～15%B;4～8 min，15%B～10%B;8～14 min，0%B，流速：0.2 ml/min，见图1。

1.4混合对照品溶液制备  精密称定对照品适量，制成1 m分别含白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ 0.113 mg、0.162 mg的混合溶液，用微孔滤膜滤过，取续滤液，摇匀放入冰箱中冷藏备用。

1.5供试品溶液制备  取不同3个批次健脾益肺口服液生产中采用超临界萃取中得到挥发油25 mg，分别加入25 ml容量瓶中，各加甲醇定容为1 mg/ml的溶液，避光保存，按批号编号放入冰箱中冷藏备用。

2结果

2.1线性关系考察  按4项下有关方法制备，并按色谱条件分析，并记录有关色谱峰面积，进行线性回归。白术内酯Ⅰ线性方程为y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），线性范围2～160 μg/ml;白术内酯Ⅲ的线性方程为y=0.0786x（r=0.9998），线性范围3～140 μg/ml，表明两者在线性范围内线性关系良好。

2.2精密度考察  选取同一批次供试品（批号：20181103），按5项下有关方法制备溶液，并按色谱分析条件连续进样6次，同时记录下色谱图，并以2号色谱峰作为参照峰，计算各主要色谱峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值均<2.3%，则表明该试验方法精密度较好，符合相关实验要求。

2.3重复性考察  选取同一批次供试品（批号：20181103），按5项下有关方法同时制备了6份供试品溶液备用，并按色谱分析的条件按顺序进样检测，同时记录下色谱图，并以2号色谱峰为参照峰，计算各主要色谱峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值均<2.1%，则表明该方法重现性较好，符合相关实验要求。

2.4稳定性考察  选取同一批次供试品（批号：20181103），按5项下方法制备出供试品溶液，并按色谱分析條件分别于0、2、4、8、12、18、24 h进样检测，同时记录下色谱图，以2号色谱峰为参照峰，计算各主要色谱峰相对峰面积和相对保留时间的RSD均<2.1%，则表明该批次供试品溶液中各种成分在24 h内稳定，符合相关实验要求。

2.5加样回收率考察  选取同一批次供试品（批号：20181103），置于25 ml锥形瓶中，加入白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的对照品各适量，按5项下方法制备样品，并注入色谱仪，按项下色谱分析条件按顺序检测，计算加样回收率，计算结果显示平均加样回收率均在101.23%～101.54%，RSD<4%，表明此方法可行，能用于健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的含量测定，见表1。

2.6含量测定结果  取3个批次的健脾益肺口服液，按方法和色谱测定含量，结果见表2。

3讨论

自古以来，中药在我国种植历史悠久，资源丰富，物种多样，并且使用了上千年，在实践中发现其毒副作用小，还可以增强和调节人体的免疫功能。特别是中国传统的中医药理论的指导下的中药，一直作为筛选开发新药的重要来源，扮演着特别重要的角色。白术作为中药处方中常用药物，具有减慢小肠细胞的蠕动、抗衰老、抗病毒、抗炎镇痛、利尿、调节免疫功能、明显抑制肿瘤细胞增殖、对老化小鼠的认识能力有明显提高等多种药理作用[4-7]，临床上应用广泛。

本文通过对健脾益肺口服液中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量测定方法的建立，可以作为方中白术药材的质控指标，同时采用UPLC的方法，采用乙腈-水梯度洗脱的方法，检测波长220 nm，白术内酯Ⅰ线性方程为y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），线性范围2～160 μg/ml;白术内酯Ⅲ的线性方程为y=0.0786x（r=0.9998），线性范围3～140 μg/ml，在线性范围内线性关系良好，同时精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，说明该色谱条件稳定可靠、检测时间迅速而且效率高，为挥发油类的检测提供了新的思路和方法，为下一步医院制剂的工艺提高提供一定的参考，同时也保证了临床用药安全有效。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：103.

[2]李滢，杨秀伟.麸炒白术化学成分的研究[J].中国现代中药，2018，20（9）：1074-1079.

[3]李尧，李伟，王琳，等.麸炒白术研究述要[J].山东中医药大学学报，2018，42（2）：182-185.

[4]周文慧.姚乃礼教授辨治脾虚证的诊疗思路及临床经验[D].北京中医药大学，2018.

[5]翁萍，王文凯，张晓婷.白术不同炮制品对脾虚小鼠胃肠功能的影响[J].江西中医药，2015，46（5）：30-32.

[6]张彩霞，江滨，张亚杰，等.国内外文献对白术内酯Ⅱ抑制肿瘤细胞作用的浓度差异原因分析[J].中医药导报，2017，23（20）：30-32.

[7]周若夏，宋丽军，施晓莹，等.白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ体内外抗轮状病毒作用研究[J].中草药，2019，50（1）：104-110.

收稿日期：2019-7-27;修回日期：2019-8-5

编辑/钱洪飞