复方巴旦仁颗粒中甘草酸的含量测定

王晓敏 赵如月 周凡

【摘 要】 目的：建立复方巴旦仁颗粒中甘草酸的测定方法。 方法：采用高效液相色谱法，使用Agilent TC-C18色谱柱（4.6mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-1%冰乙酸溶液（39∶61），检测波长为250 nm，流速1.0 mL/min，柱温40 ℃，进样量10 μL。结果：该方法的线性范围为19.92～199.17 μg/mL，R2=0.9996（n=7），平均回收率102.49%（n=9，RSD=2.05%）。結论：本方法操作简便，结果准确，可用于测定复方巴旦仁颗粒中甘草酸的含量。

【关键词】 甘草酸;高效液相色谱;含量测定

【中图分类号】R29 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2019）17-0039-03

Abstract： Objective To establish a method for the determination of glycyrrhizic acid in compound Badanren granules. Methonds High performance liquid chromatography was used with Agilent TC-C18 column（4.6mm×250 mm， 5 μm）， mobile phase was acetonitrile-1% glacial acetic acid solution（39∶61）， detection wavelength was 250 nm， flow rate was 1.0 mL/min， column temperature was 40 ℃， injection volume was 10 μL. Results The linear range of the method was 19.92 μg/mL to 199.17 μg/mL， R2=0.9996（n=7）， and the average recovery was 102.49% （n=9， RSD=2.05%）. Conclusion The method is simple， accurate and can be used to determine the content of glycyrrhizic acid in Compound Badanren Granules.

Key words：Glycyrrhizic Acid;High Performance Liquid Chromatography; Determination of Content

复方巴旦仁颗粒由巴旦仁、蜀葵子、睡莲花、甘草浸膏等六味药材组成，是维吾尔名医经验方，在临床上主要用于寒性感冒、咳嗽痰多、气喘、咽喉肿痛、鼻塞流涕、支气管炎干咳、哮喘等症的治疗。维吾尔医认为复方巴旦仁颗粒具有生湿生热，祛除风寒，调节异常气质，止咳化痰，温肺止喘的功效[1]。该处方中含有的甘草浸膏，既是我国传统中医药的重要组成，也是维吾尔医药中的常用药味，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、调和诸药等作用[2]。目前关于甘草及其提取物的化学成分和药理作用研究相对比较充分，现代药理学表明，甘草和甘草提取物在呼吸系统方面具有止咳、化痰、定喘以及抗呼吸道感染等作用，特别是甘草中的黄酮类成分以及甘草酸、甘草次酸在呼吸系统方面作用显著[3-4]。复方巴旦仁颗粒为在研的中药复方制剂，为有效控制其质量，本研究在质量标准的建立过程中选择甘草酸作为质量控制指标之一，建立复方巴旦仁颗粒中甘草酸的含量测定方法。

1 仪器与试药

仪器：岛津LC-20AD高效液相色谱仪，FA1004分析天平（上海恒平科学仪器有限公司），CPA225D分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

试药：甘草酸铵对照品（中国食品药品检定研究院，批号110731-201619，含量93.0%），复方巴旦仁颗粒（新疆华世丹药业股份有限公司生产，批号1902160101、1902160201、1902160301;新疆华世丹药物研究有限责任公司自制，批号20180202），乙腈、冰乙酸均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent TC-C18（4.6×250 mm，5 μm）;流动相：乙腈-1%冰乙酸溶液（39∶61）;检测波长：250 nm;流速：1.0 mL/min;柱温：40 ℃;进样量：10 μL。理论塔板数按甘草酸峰计算应不低于5000。

2.2 溶液配制

2.2.1 甘草酸铵对照品溶液 精密称取甘草酸铵对照品26.77 mg，用50%乙腈溶解并定容至50 mL容量瓶中，摇匀，即得甘草酸铵对照品储备液。精密量取上述溶液2 mL至10 mL容量瓶中，用50%乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，即得甘草酸铵对照品溶液（每1 mL含甘草酸铵约0.1 mg，折合甘草酸约为0.098 mg）。

2.2.2 复方巴旦仁颗粒供试品溶液 取本品约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50 mL，超声处理20 min，取出，放冷，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性对照颗粒供试品溶液 按处方比例称取除甘草浸膏以外的其他药味，按照复方巴旦仁颗粒的生产工艺制成阴性对照颗粒，再按2.2.2项下的方法制成缺甘草浸膏的阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性 精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液、甘草酸铵对照品溶液各10μL进样分析，记录色谱图（见图1）。结果阴性对照溶液在甘草酸铵色谱峰相应位置上无干扰，可在此条件下进行样品中甘草酸的含量测定。

2.3.2 线性关系考察 分别精密量取甘草酸铵对照品储备液0.4 mL、1.0 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL、3.0 mL、4.0 mL至10 mL容量瓶中，用50%乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，即得线性系列溶液。取上述对照品溶液各10 μL，注入色谱仪分析测定，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得回归方程Y=8873.9X-25182（R2=0.9996，n=7），見图2。即甘草酸铵浓度范围在19.92～199.17 μg/mL时，线性关系良好。

2.3.3 精密度 精密吸取甘草酸铵对照品溶液10 μL，重复进样6次，结果甘草酸铵峰面积的RSD=0.05%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 加样回收率试验 取已知含量的复方巴旦仁颗粒（批号20180202）适量，加入低、中、高（50%、100%、150%）系列浓度的对照品，按拟定的色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率102.49%（n=9，RSD=2.05%），见表1，表明方法回收率较好。

2.3.5 重复性 分别称取同一批号复方巴旦仁颗粒（20180202）5份，按照2.2.2项下的方法制备成供试品溶液，进样测定。结果样品中甘草酸的平均含量为1.257%，RSD=1.49%，表明方法重复性较好。

2.3.6 溶液稳定性 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样测定，结果甘草酸铵峰面积的RSD=0.08%，表明复方巴旦仁颗粒供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4 样品测定 分别称取3批（1902160101、1902160201、1902160301）复方巴旦仁颗粒样品，按照2.2.2项下的方法制成供试品溶液，并按2.1项下的色谱条件进行测定，计算含量。结果见表2。从该测定结果可以看出中试车间连续生产的3批样品质量稳定，批间差异不大。

3 讨论

3.1 流动相的选择 本实验曾用《中国药典》2015版中甘草浸膏和甘草流浸膏的方法进行试测，结果均不理想，因此查阅相关资料进行了流动相调整[5-9]。实验先后考察了乙腈-磷酸体系、乙腈-冰乙酸体系和甲醇-冰乙酸体系，发现乙腈-冰乙酸体系可以获得较好的峰形且分析时柱压更低，在保留时间相当时分离效果更好。通过调整有机相-水相比例和酸浓度，最终发现流动相为乙腈-1%冰乙酸溶液（39∶61）时，所得峰形对称性好，样品主峰和杂质峰可以有效分离，理论塔板数较高。

3.2 检测波长的选择 取甘草酸铵对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果发现甘草酸铵在250.6 nm处有最大吸收，最终选择250 nm作为液相色谱含量测定的检测波长。

3.3 耐用性 实验表明，当流速变化为（1.0±0.1）mL/min、检测波长变化为（250±5）nm时，对含量测定的结果几乎没有影响。柱温的改变会影响甘草酸铵主峰与周围杂质峰的分离，经测试，柱温40 ℃下能达到较好的分离效果。

3.4 提取条件 本实验考察了不同超声时间制得的样品含量，结果显示超声提取20 min即可提取完全;还考察了使用不同提取溶剂配制的样品含量，结果用流动相提取时效率高且杂质干扰少。

甘草酸为甘草浸膏中的主要成分，止咳祛痰作用明确，也是复方巴旦仁颗粒中的重要药效成分。采用本法测定复方巴旦仁颗粒中的甘草酸含量，操作简便，结果准确、可靠，可用于控制复方巴旦仁颗粒的质量。同时，现代分析技术与传统民族药的结合有利于推进民族药的产业化和规范化，该方法的建立对完善民族药的质量标准提供了一定参考。

参考文献

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[8]刘淑华.反相高效液相色谱法测定复方甘草酸铵注射液中甘草酸铵含量[J].中国药业，2014，23（20）：65-66.

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（收稿日期：2019-06-25 编辑：刘 斌）