奶粉中沙门氏菌检测能力验证分析

摘 要： 文章结合验证奶粉中沙门氏菌检测能力项目进行研究，项目验证时遵循GB4789.4-2016标准及方法，选择2份奶粉验证，展开分离、生化鉴定、血清法鉴定一系列工作，采用VIDAS初筛，判别样品情况以后展开鉴定，保证生化结果一样。本次能力验证得到2个盲样，分别为18-W430和18-Q018，前者检验出沙门氏菌，后者未检验出沙门氏菌，与指定值相一致，检验能力通过验证。

关键词： 奶粉;沙门氏菌检;检测能力;验证

一、 引言

奶粉是常见的食品种类之一，需要进行奶粉病菌检测。沙门氏菌为检测的重要病菌之一，在检测过程中，必须严格按照相关要求做好样品的检测检验工作。基于此，文章主要以CNCA组织的某检验项目为例，针对奶粉中沙门氏菌检测能力验证进行探究。

二、测试项目

该检验项目由CNCA组织，中国检验检疫科学研究院测试评价中心负责实施，主要验证奶粉中沙门氏菌检测能力。项目发送2个样品，沙门氏菌检测项目的检验样品为W编号及Q编号。实验室检测人员收到样品后需要立即展开检测。样品呈现出白色冻干块状，存在一定的人工污染，采用真空西林瓶存储，检测人员收到样品后要立即检测包装状态，登录平台确认，后续通过网络提交检验结果。

三、 材料及方法

（一）检测材料

一是检测样品来源，由中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供本次检测的样品，编号为18-W430和 18-Q018。二是培养基和试剂材料，本次验证采用的培养基包括BPW、SC、TTB、BS、XLD等，准备生活鉴定试剂盒及沙门氏菌检测试剂盒。

（二）检验方法

1. 样品处理

检测人员收到西林瓶包装的样品，掺入100mL的稀释液，实现对样品的水化处理，样品处理操作步骤如下：首先采用4mL稀释液完成水化，等待一段时间后，冻干粉会充分溶解在稀释液内，这时候需要借助无菌吸管转移溶液，将所有溶液转至无菌瓶内，剩余稀释液负责清洗西林瓶的内壁，反复清洗后可以回收所有清洗液，这样就得到了待测样品原液，即为100mL待测乳品样品，完成对样品的处理。

2. 检验过程

一是沙门氏菌预增菌及增菌。将25mL样品转至缓冲蛋白胨水，恒温培养8～18h，重复上述步骤，完成预增菌和增菌处理，放入恒温培养箱内，持续培养18～24h。二是沙门氏菌快速筛选，本次选择全自动酶联免疫分析仪，取出增菌液样品，放入无菌试管内，将试管放入沸水中，持续加热15min，可以达到灭活的目的。灭活结束后取出500mL增菌液，放入试剂条测试孔内，采用分析仪器监测，等待45min就可以得到结果。三是选择性分离，在增菌液中取出1环菌液，接种到准备好的培养基平板上，采取恒温培养的方式，温度控制在36℃±1℃左右，持续培养40～48h，记录菌落生长情况。四是生化鉴定试验，将平板上的菌落挑下，放入琼脂平板上，持续培养24h，为了保证鉴定结果的准确性，同时还使用试剂盒和鉴定一起，在使用鉴定盒时，要注意按照说明书要求操作，挑选单个纯菌落，接种到生化管内，同时还要选择一些菌落放入生理验收，得到均匀的菌悬液，严格按照说明书要求操作，添加到生化反应孔内，将盒盖盖上，放入恒温环境下培养，如果24h以后仍然阴性，可以延长培养时间至48h。五是血清学鉴定，先在分离区域滴加生理盐水，将菌落放在拨片上，摇匀后可以滴入多家菌体抗血清，为了达到对照效果，另一组滴入生理盐水，摇动拨片对结果进行观察。

3. 注意事项

检测过程中应注意以下事项：一是去除样品后要等待一段时间，在样品温度达到室内温度以后，才能开启样品。二是从样品开启到检测结果的整个过程，都要遵循无菌操作原则。三是样品呈现出冻干块状，属于一个整体，要将整个样品用于验证，不能取出其中的一部分展开测试。

四、 检验结果与分析

检验结果如下：一是VIDAS初筛结果，奶粉样品增菌液灭活后利用分析仪展开初筛，发现两个样品筛查结果不一致，其中18-Q018检测为阴性，而18-W430检测为阳性。

二是选择性平板分离结果，本次将增菌液划入多个平板，实现分离培养，其中18-Q018在BS平板上呈现为黑色带金属光泽菌落，周边培养基没有出现变化;18-Q018在沙门氏菌显色培养基平板上呈现为蓝绿色菌落;在HE平板上呈现为浅棕色菌落;在XLD平板上显示为黄色及粉红色菌落，并且菌落边缘存在不规则的状态。18-W430则有所不同，在BS平板上呈现为灰绿色菌落、黑色带金属光泽菌落及绿色菌落;在沙门氏菌显色培养基平板显示为紫红色菌落及蓝绿色菌落;在HE平板上呈现为蓝绿色菌落、橘色菌种;在BS平板上呈现为黄色菌落、粉红色菌落。

三是生化鉴定结果。18-Q018在平板上没有出现典型菌落，这与初筛结果相吻合，接下来展开对18-Q018的生化鉴定，挑选BS平板及XLD平板上的菌落，分别编号处理展开鉴定，具体编号为18-Q018-1、18-Q018-2、18-Q018-3。18-W430存在典型菌落，这与初筛结果相吻合，为此挑选沙门氏菌显示培养基及BS平板上的菌落，编号后展开生化鉴定，具体编号为18-W430-1、18-W430-2、18-W430-3。其中18-Q018-1采用生化试剂盒鉴定，18-Q018-2选择全自动检定仪鉴定，前者鉴定为非沙门氏菌，后者鉴定为大肠杆菌，18-Q018-3鉴定为费沙门氏菌，完全符合初筛结果，可以得出鉴定结果：18-Q018没有检验出沙门氏菌。18-W430-1、18-W430-2、18-W430-3也展开生化鉴定，全部鉴定为沙门氏菌阳性，这也表明18-W430鉴定存在沙门氏菌。

四是血清学鉴定结果。结合上述鉴定结果，确定18-W430为沙門氏菌阳性，为了进一步确认检验结果，展开了血清学确认，挑选琼脂培养物展开鉴定，鉴定结果见表1。可以看出，血清学鉴定结果与生化鉴定结果相一致。

五、 结语

本次检验的18-Q018样品初筛结果为沙门氏菌阴性，后续检测过程中只分离出大肠杆菌。18-W430分离沙门氏菌菌群以后还存在一些其他的菌落，在条件允许的情况，可以持续分离菌种，一方面可以更了解牛奶样品的污染情况，另一方面可以提高检测能力。实验室通过参加能力验证活动，可以持续提高检验水平，达到国家要求的检验标准。

参考文献：

[1]游元丁，赵阳，徐孟怀，等.奶粉中沙门氏菌检测能力验证分析[J].安徽农业科学，2019，47（5）：201-203.

作者简介：  张婕，江苏华测品标检测认证技术有限公司。