通痹活络汤煮散工艺研究

朱卫星 张敏 甘国兴 龙国斌 余文新

[摘要]目的 探讨通痹活络汤煮散的煎煮工艺。方法 采用高效液相色谱法（HPLC），选用XBridge C18色谱柱，以乙腈-水（49：51）为流动相，检测波长为330、230 nm，柱温为室温25℃测定通痹活络汤中蛇床子素和芍药苷的含量。以总固体和指标性成分的含量作为评价指标，采用正交试验筛选其最佳煎煮工艺。通过与传统饮片药液质量比较，筛选其煮散剂量。结果 蛇床子素在0.1224～4.0800 μg范围内，线性关系良好（r=0.9999），平均加样回收率为101.14%，RSD为1.42%;芍药苷在0.8194～16.3880 μg范围内，线性关系良好（r=0.9999），平均加样回收率为99.55%，RSD为1.79%。最佳煎煮工艺是加12倍水，浸泡5 min，每次煎煮20 min，煎煮1次。通过筛选煮散临床推荐剂量试验，选用相当于通痹活络汤传统饮片35%的煮散剂量作为临床推荐剂量。结论 优选的煎煮工艺简单快速，稳定可行，筛选的剂量可为临床应用提供指导。

[关键词]煮散;通痹活络汤;煎煮工艺;总固体;蛇床子素;芍药苷

[中图分类号] R283          [文献标识码] A          [文章編号] 1674-4721（2019）9（c）-0007-05

[Abstract] Objective To explore the decoction technology of Tongbi Huoluo Decoction. Methods The content of osthole and paeoniflorin in Tongbi Huoluo Decoction were determined by high performance liquid chromatography （HPLC） with XBridge C18 column， acetonitrile-water （49：51） as mobile phase， detection wavelength at 330， 230 nm and column temperature at room temperature of 25℃. The contents of total solids and index components were used as evaluation indexes， and orthogonal test was used to screen the decoction process. By comparing the quality of decoction with that of traditional decoction pieces， the dosage of decoction was screened. Results Ostholewas in the range of 0.1224-4.0800 μg， with a good linear relationship （r=0.9999）， the average recovery rate was 101.14%， RSD was 1.42%. Paeoniflorin has a good linear relationship in the range of 0.8194-16.3880 μg （r=0.9999）， with an average recovery of 99.55% and RSD of 1.79%. The best decocting process was to add 12 times of water， soak for 5 min， decocting for 20 min each time， and decocting once. Through screening the clinical recommended dose test of decoction， the decoction dose equivalent to 35% of the traditional decoction pieces of Tongbi Huoluo Decoction was selected as the clinical recommended dose. Conclusion The optimized decocting process is simple， rapid， stable and feasible， and the selected dosage can provide guidance for clinical application.

[Key words] Boiling and dispersing; Tongbi Huoluo Decoction; Decocting process; Total solids; Osthole; Paeoniflorin

煮散是汤剂的一种，是将中药饮片经粉碎加工为粗粉后与水共煮去渣取汁而成[1]。通过将药材粉碎，制成煮散，具有省材、省时的特点[2-4]。通过查阅文献[5-14]可知，煮散剂具有较高的煎煮效率，不仅能够节省药材，简化煎煮程序，提高效率，同时还方便患者使用，大大缓解了医院中药代煎等候时间长、中药饮片费用较高等问题。

通痹活络汤是本院康复科名老中医熊同学主任中医师经过多年的实践研究而创立的协定处方，具有散寒除湿通络、补益肝肾的功效，对寒湿型腰痛、腰椎间盘突出症等病具有独特效果。该方由中医传统治疗痹证经典名方之一的独活寄生汤化裁而成，能够补肝肾，祛风湿，标本兼治，主要用于治疗痹证日久正虚邪实者[15-17]。本研究通过测定通痹活络汤中蛇床子素和芍药苷的含量，对通痹活络煮散剂的煎煮工艺进行筛选优化，为寻找医院煮散代煎工艺新模式提供参考，以便临床推广使用。

1仪器与试药

1.1仪器

Thermo高效液相色谱（HPLC）仪（美国赛默飞世尔科技有限公司）;四元泵;二极管阵列检测器;自动进样器;Chromelen色谱工作站;XBridge C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）;梅特勒万分之一分析天平;超声波发生器（昆山超声仪器有限公司，型号：KQ-700DE，40 kHz，280 W）。

1.2试药与试剂

通痹活络汤中药饮片均购自广东本草医药药材有限公司，并经清远市中医院药学部黄玉明副主任中药师鉴定均为正品中药饮片。对照品蛇床子素（批号：110822-201308）、芍药苷（批号：110736-201438）均购自中国药品生物制品检定所，均为分析纯试剂。色谱纯乙腈（德国Merk公司），屈臣氏蒸馏水。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1色谱条件及系统适应性  采用HPLC法，选用XBridge C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-水（49：51）为流动相，流速为1.0 ml/min，柱温为室温（25℃），蛇床子素的检测波长为330 nm，芍药苷的检测波长为230 nm，进样体积10 μl，芍药苷理论板数均>3000，蛇床子素理论板数均>1000，阴性供试品溶液对主峰没有干扰，分离度均>1.5。

2.1.2对照品溶液的制备  精密称取芍药苷对照品适量，采用甲醇溶液制成1.6388 mg/ml的对照品溶液储备液备用。精密称量蛇床子素对照品适量，加芍药苷储备液10 ml制成含有蛇床子素和芍药苷0.4080、1.6388 mg/ml的混合对照品溶液。

2.1.3供试品溶液的制备  取通痹活络汤样品10 ml，加入硅藻土1 g，置蒸发皿中蒸干，加甲醇30 ml，振摇，过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 ml的容量瓶中，加甲醇至刻度處，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4阴性样品溶液的制备  按照“2.1.3”中供试品溶液制备方法，制备不含有独活、白芍的阴性对照溶液。

2.2方法学考察

2.2.1线性关系考察  精密吸取“2.1.2”项下的混合对照品溶液1、1.5、2、3、4、5 ml，加甲醇溶液稀释并配置成梯度浓度的混合对照品溶液，采用“2.1.1”项下的方法进行测定，记录峰面积。以进样量为横坐标（X，C），色谱峰面积为纵坐标（Y，A），绘制标准曲线，分别得出蛇床子素的回归方程为：Y=3.65×106X-2.07×104（r=0.9999）;芍药苷的回归方程为：A=1.47×106C-1.44×105（r=0.9999）。结果表明，蛇床子素在0.1224～4.0800 μg、芍药苷在0.8194～16.3880 μg范围内与峰面积呈良好线性关系（图1、2）。

2.2.2精密度试验  精密吸取“2.1.2”项下的混合对照品溶液，重复进样6次，采用“2.1.1”项下的方法进行测定，记录色谱峰面积。对照品蛇床子素、芍药苷的RSD值分别为0.26%、0.37%，表明仪器精密度良好。

2.2.3稳定性试验  精密吸取“2.1.2”项下的混合对照品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h按“2.1.1”项下方法测定，记录峰面积，蛇床子素、芍药苷的RSD值分别1.80%、1.22%，表明供试品溶液在24 h内的稳定性良好。

2.2.4重复性试验  取通痹活络汤煮散各6份，按“2.1.3”项下的方法制备供试品溶液，采用“2.1.1”项下的方法依次测定，计算各成分含量。结果得出蛇床子素、芍药苷的RSD值分别为0.27%、0.34%，表明本研究方法的重复性良好。

2.2.5加样回收率试验  称取已知含量的通痹活络汤煮散6份，分别加入对照品适量，按“2.1.3”项下方法制备样品，采用“2.1.1”项下的方法依次测定，计算平均加样回收率。结果提示，蛇床子素的平均加样回收率为101.14%，RSD值为1.42%，芍药苷的平均加样回收率为99.55%，RSD值为1.79%，表明本法具有较好的回收率（表1）。

2.2.6空白试验  分别精密吸取“2.1.2”对照品溶液、“2.1.3”供试品溶液、“2.1.4”阴性样品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，采用“2.1.1”项下的方法进行测定。结果显示，供试品中蛇床子素、芍药苷色谱峰保留时间与对照品一致，阴性对照溶液在相对应对照品溶液相同保留时间处无干扰峰（图3～7）。

1：芍药苷

1：芍药苷

2：蛇床子素

2：蛇床子素

2.3正交试验

2.3.1因素水平的确定  选择加水量、浸泡时间、煎煮时间为主要的3个考察因素，制定每个因素下面的3个水平，选择蛇床子素、芍药苷和总固体为评价指标，并进行综合加权评分。以蛇床子素含量（权重30%）、芍药苷含量（权重20%）及总固体量（权重50%）进行综合评分。按L9（34）进行正交试验，以筛选出通痹活络汤煮散的最佳煎煮工艺，因素水平设计见表2。

2.3.2正交试验设计与结果  根据通痹活络汤煮散正交试验结果，进行综合加权评分。评分标准为蛇床子素含量（权重30%）、芍药苷含量（权重20%）和总固体（权重50%）进行综合评分[综合评分[18]=（X/Xmax×0.3+Y/Ymax×0.2+Z/Zmax×0.5）×100%]。正交分析和直观分析结果分别见表3、4。综合评分后的结果影响因素大小顺序为加水量>煎煮时间>浸泡时间，优选工艺为A3B2C1。根据正交试验得出优选煎煮工艺为A3B2C1，即加12倍量水，浸泡5 min，煎煮20 min。

2.3.3验证试验  为考察所选因素水平中最佳工艺的稳定性及可行性，按照最佳工艺条件进行3次验证试验。试验结果显示，3批通痹活络汤煮散中的蛇床子素浓度、芍药苷浓度和总固体的RSD均<3.00%（表5）。

2.4筛选煮散临床推荐剂量试验

通痹活络汤传统饮片处方量为136 g，为确定其煮散临床推荐剂量，以蛇床子素含量（权重30%）、芍药苷含量（权重20%）和总固体（权重50%）为评价指标，比较不同剂量煮散与传统饮片汤剂质量，从而筛选出煮散临床推荐剂量。

传统饮片汤剂制备工艺[19-20]：以原药材加10倍量水浸30 min，煎煮并保持微沸30 min，趁热过滤，滤渣加8倍量水煎煮并保持微沸30 min，趁热过滤，合并滤液，浓缩，冷却定容至100 ml。煮散制备工艺：按照“2.3.2”项下筛选出的优选工艺煎煮，即加12倍量水，浸泡5 min，煎煮20 min，煎煮1次，测定蛇床子素、芍药苷和总固体含量。

试验结果表明，30%剂量煮散时，其与饮片煎煮的分数更接近，但总固体和芍药苷的浓度含量均低于传统饮片;35%剂量煮散时，所含芍药苷与传统饮片组含量接近，总固体比传统饮片高约10%，而所含蛇床子素含量约为饮片组的5倍左右。因此，以相当于通痹活络汤传统饮片35%的煮散剂量为临床推荐剂量（表6）。

饮片煎煮剂量为136 g;煮散煎煮1剂量为饮片20%;煮散煎煮2剂量为饮片25%;煮散煎煮3剂量为饮片30%;煮散煎煮4剂量为饮片35%

3讨论

通痹活络汤有独活、桑寄生、牛膝、杜仲、当归、白芍、川芎等13味中药组成，成分较多。随意选一成分为试验指标，其结果缺乏说服力，因此，本课题通过前期对通痹活络汤煮散处方文献资料的充分研究，分析该处方中独活既为君药又为引经药，有祛风除湿，养血和营，活络通痹之功，蛇床子素是其主要活性成分。白芍养血调经，散瘀止痛，是为臣药，芍药苷是其主要活性成分。在液相条件摸索过程中，发现蛇床子素和芍药苷在甲醇中较稳定，无杂质干扰，提取效果较好。因此，蛇床子素和芍药苷被选为通痹活络汤的质量控制指标。本研究将通痹活络汤粉碎成适宜粒度，制成煮散剂，以总固体和指标性成分的含量为评价指标，采用HPLC测定通痹活络汤中蛇床子素和芍药苷的含量，对其主要影响因素（粉碎度、浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数）进行考察。通过正交试验筛选出其最佳煎煮工艺为加12倍水，浸泡5 min，煎煮20 min，煎煮1次。课题所建立的通痹活络汤煮散主要有效成分含量HPLC测定方法稳定，准确度高，重复性好，可为后期建立通痹活络汤煮散制剂的质量标准提供参考依据。

[参考文献]

[1]张子龙，谢月，梁奇，等.煮散与饮片、散剂和中药配方颗粒的比较及其现代化研究进展[J].中药材，2018，41（10）：2225-2229.

[2]范佳佳，刘阳，刘旎，等.《太平惠民和剂局方》中煮散剂的使用特点[J].中医杂志，2019，60（4）：291-294.

[3]周欣欣，罗贤强，张俊清，等.中药散剂研究的现状[J].海南医学，2019，30（3）：392-394.

[4]袁联华，原嘉文，邝小红，等.浅谈中药煮散煎煮技术研究[J].内蒙古中医药，2018，37（11）：103-104.

[5]张靖，雷迪，丘小惠，等.三七精准煮散饮片的研制——质量均一性分析[J].中国实验方剂学杂志，2017，23（11）：13-17.

[6]黄娟，丘小惠，白俊其，等.根茎类药材丹参精准煮散饮片的质量评价[J].中国实验方剂学杂志，2017，23（11）：18-22.

[7]徐文，雷迪，张靖，等.鸡血藤精准煮散饮片与原饮片质量的对比性研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2017，19（1）：83-88.

[8]任之尧，徐文，张靖，等.花类药材金银花精准煮散饮片的质量评价[J].世界科学技术-中医药现代化，2017，19（1）：89-94.

[9]白俊其，黄志海，黄娟，等.根茎类中药精准煮散饮片探索实例——制何首乌[J].世界科学技术-中医药现代化，2017， 19（1）：95-100.

[10]张靖，徐文，宫璐，等.叶类药材淫羊藿精准煮散饮片的质量研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2017，19（1）：101-107.

[11]宫璐，白俊其，苏贺，等.侧柏叶煮散饮片煎煮质量评价[J].世界科学技术-中医药现代化，2017，19（1）：108-113.

[12]白俊其，苏贺，黄娟，等.肉桂精准煮散饮片与原饮片的煎煮质量[J].世界中医药，2018，13（2）：468-471，478.

[13]莫結丽，张靖，宫璐，等.陈皮精准煮散饮片与市售饮片的质量[J].世界中医药，2017，12（11）：2786-2790.

[14]黄娟，张靖，宫璐，等.枳壳精准煮散饮片质量的均一性[J].世界中医药，2017，12（11）：2791-2794，2798.

[15]裴璠，沈姗怡，刘保红.超短波联合独活寄生汤治疗公安民警膝关节骨性关节炎的临床研究[J].中国慢性病预防与控制，2019，27（2）：126-129.

[16]赵林灿，李薇薇，吴毅明，等.独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠PERK/Bip信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志：2019，4（25）：18.

[17]刘锡军，左力.独活寄生汤内服联合热通汤熏洗对风寒湿痹型膝骨关节炎疗效观察[J].辽宁中医药大学学报，2019，21（2）：195-198.

[18]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[19]卫生部，国家中医药管理局.《医疗机构中药煎药管理规范》[S].国中医药发[2009]3号.

[20]陈士林，黄志海，丘小惠，等.中药精准煮散饮片[J].世界科学技术-中医药现代化，2016，18（9）：1430-1440.

（收稿日期：2019-02-18   本文编辑：孟庆卿）