白细胞介素-17A 水平及基因多态性与宫颈癌相关性

赖 婷 朱 燕 陈 琳

贵州省贵阳市妇幼保健院妇科，贵州贵阳 550003

宫颈癌是严重威胁女性健康的常见疾病，我国宫颈癌发病率逐年上升，死亡率随年龄增加而增高[1]。研究认为宫颈癌是由多因素造成的，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染已被明确为宫颈癌的主要病因。但HPV 易感性受到参与免疫反应的细胞因子的基因多态性影响，而且在宫颈癌的发展过程有多种细胞因子的基因多态性发挥作用[2]。白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）是一种炎性细胞因子，在多种恶性肿瘤的发生发展中起重要作用[3-5]。IL-17 家族有多个细胞因子和受体，IL-17A 就是其家族的重要成员，rs2275913 基因位于IL-17A 的启动子区。本研究通过对宫颈癌患者血清IL-17A 含量及其启动子基因多态性的检测，探讨IL-17A 水平及其启动子的基因多态性与宫颈癌的相关性，旨在为治疗及预测宫颈癌临床预后提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012 年3 月～2016 年3 月在贵州省贵阳市妇幼保健院（以下简称“我院”）进行手术治疗的宫颈癌患者185 名作为研究组，同期于我院门诊体检的健康女性185 例作为对照组。研究组年龄23～68 岁，平均（43.45±5.12）岁，对照组年龄25～55 岁，平均（41.33±5.24）岁，两组年龄差异无统计学意义（P >0.05），具有可比性。两组均排除心、肾、肝、内分泌疾病，妊娠及其他恶性肿瘤等病史。本研究经我院医学伦理委员会批准，两组人群自愿参加本课题研究，均签署知情同意书。

1.2 方法

空腹采集外周血3 mL，离心后取血清放置于-80℃冰箱保存，集中检测两组血清中IL-17A 水平和启动子rs2275913 的基因多态性。酶联免疫吸附测定试剂盒（上海蓝基生物科技公司，批号：E01I0362）测定血清IL-17A 的含量；DNA 提取参照血基因组DNA 小量试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司，批号：D0063）。按说明书进行，测定DNA 样本浓度后置于-80℃冰箱保存。Taqman探针法分析两组IL-17A 基因启动子rs2275913（G/A）基因型，使用7500 荧光定量PCR 仪（美国ABI 公司）完成目的片段的扩增和基因型检测。IL-17A 基因rs2275913 引物序列为，F：5′-ATTTCTGCCCTTCCCATTTT-3′R：5′-CCCAGGAGTCATCGTTGTTT-3′。IL-17A rs2275913 分别将A 位点探针的5′端标记为VIC（fluorescent VIC dye），G 位点探针5′端标记为FAM（fluorescent FAM dye）从而检测A碱基和G 碱基。PCR 扩增程序包括95℃活化10 min，92℃变性15 s，65℃退火45 s，72℃延伸45 s，共循环40 次。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；多因素分析采用Logistic 回归分析。以P <0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清IL-17A 含量比较情况

研究组血清IL-17A 含量为（44.18±16.62）ng/L，对照组血清IL-17A 含量为（26.72±9.64）ng/L，两组比较差异有高度统计学意义（P=0.000）。

2.2 两组IL-17A 基因启动子rs2275913 频率分布情况

经Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检验，所有基因型在两组中均符合遗传平衡，具有群体代表性。结果显示，两组中基因型AG 出现的频率高；且研究组基因型AA 出现的频率高于基因型GG，对照组则相反；比较差异有有高度统计学意义（P=0.006）。同时与对照组比较，研究组A 等位基因出现的频率高于G 等位基因，差异有高度统计学意义（P=0.007）。见表1。

表1 IL-17A 基因启动子rs2275913 位点的基因频率分布[例（%）]

2.3 IL-17A 基因多态性与宫颈癌易感性的相关性分析

与基因型GG 人群比较，基因型AA 人群患宫颈癌的危险性显著增高（P=0.006，OR=2.31，95%CI：1.27～4.20），但是基因型AG 人群发生宫颈癌的危险性不显著。见表2。

表2 IL-17A 基因多态性与宫颈癌易感性的相关性分析（例）

2.4 IL-17A 基因多态性与宫颈癌临床病理特征的相关性分析

结果显示，IL-17A 等位基因频率与临床分期（P=0.001，OR=0.48，95%CI：0.32～0.73）、分化程度（P=0.000，OR=2.21，95%CI：1.46～3.36）、脉管侵润（P=0.040，OR=1.53，95%CI：1.01～2.31）、淋巴结转移（P=0.003，OR=0.52，95%CI：0.34～0.80）具有相关性；与年龄、宫颈间质浸润、宫旁侵润无关（P >0.05）。见表3。

2.5 血清IL-17A 含量及基因多态性与宫颈癌易感性的相关性分析

研究组和对照组血清IL-17A 含量平均为35 ng/L，在血清IL-17A 含量＜35 ng/L 的人群中，基因型AA 人群宫颈癌的发病风险为1.995 倍（95%CI：0.880～4.520），但在血清IL-17A 含量≥35 ng/L 的人群中，基因型AA 人群宫颈癌的发病风险上升至2.500 倍（P=0.049，95%CI：1.00～6.23）。见表4。

3 讨论

据我国国家癌症中心数据显示，2015 年我国新发宫颈癌9.89 万例，死亡3.05 万例[6]。宫颈癌严重威胁我国妇女的生命及身体健康，高危型HPV 持续感染是导致宫颈癌的主要原因，但是单独HPV 感染不足以致癌，有效细胞因子产生的免疫应答在促进或抵制HPV 感染中起关键作用。HPV 的易感性可能受到参与免疫反应的基因多态性的影响。个体基因组学突变是导致人群发生差异性、多样性的重要因素，也是肿瘤易感性差异化的重要原因之一[7]。基因突变，尤其是启动子区的多态性，影响基因转录的过程，致使对应基因异常表达，蛋白质功能发生变化，影响个体对癌症的易感性[8]。近年研究表明宫颈癌有遗传倾向，且与多种易感基因多态性紧密相关[2]。

表3 IL-17A 基因多态性与宫颈癌临床病理特征的相关性分析[例（%）]

表4 血清IL-17A 含量、基因多态性与宫颈癌易感性分析（例）

IL-17 是由初始CD4T 淋巴细胞分化的Th-17 效应细胞分泌，是具有多种生物学效应的重要炎症介质。IL-17 可作用于不同的靶细胞，诱导产生细胞因子和趋化因子，参与细胞因子的网络调节，可招募白细胞，促进多种细胞释放炎性因子，促进血管生成，促进细胞增殖，从而介导肿瘤、炎症等病理状态发生及发展。研究认为Th-17 细胞免疫应答及其效应因子IL-17可促进宫颈癌的发生、发展[9-14]。本研究发现宫颈癌患者血清IL-17A 含量较正常组明显升高；陈志芳等[11]研究发现宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者手术治疗后3 个月，Th-17/Treg 比率降低、血清IL-17 水平明显降低、HPV 明显转阴，提示IL-17 可能直接参与宫颈HPV感染的免疫逃避，并与宫颈癌发生发展相关。IL-17 基因多态性和一些疾病遗传易感性有关，如类风湿关节炎、溃疡性结肠炎、胃癌、乳腺癌等[15-18]。Quan 等[19]研究发现IL-17A 基因rs2275913 不仅与宫颈癌易感性、宫颈癌高风险相关，而且与高临床分期及脉管癌栓阳性相关。Cong 等[20]发现rs2275913 多态性影响宫颈癌的发展，提示IL-17A 可能参与宫颈癌的发生、发展。本研究也发现宫颈癌患者基因型AA 和A 等位基因出现的频率高于对照组，提示IL-17A 基因多态性与宫颈癌患病的风险性相关。但与刘素芹等[21]未发现rs2275913 基因型与患宫颈癌风险相关的研究结果不一致，可能与地域性遗传特质性及样本量不同有关。本研究还提示IL-17A 基因多态性与临床分期、组织分化、淋巴结转移、脉管侵润相关；高IL-17A 水平人群中，AA 基因型患宫颈癌的发病风险更高，认为IL-17A 水平及基因多态性与宫颈癌进展密切有关。赵子龙等[9]发现宫颈癌患者术前给予化疗，不仅可以缩小宫颈肿瘤体积，还可抑制宫颈癌组织中IL-17 的表达，减少宫颈癌复发。因此，这些研究结果显示，IL-17A基因及产生的细胞因子促进宫颈癌的进展。

综上所述，本研究提示IL-17A 水平及基因多态性与宫颈癌遗传易感性相关，且其在宫颈癌的发生、发展中扮演重要角色，其具体机制还需进一步深入探讨。