阿克苏地区牛环形泰勒虫病分子流行病学调查

李佳　段真真　杨世忠　何宗霖

摘要    为研究阿克苏地区牛感染环形泰勒虫情况，采用实时荧光PCR方法对519份牛血液样品进行了检测。结果表明，牛感染环形泰勒虫病发生率为14.6%，其中舍饲和散养牛感染率分别为12.6%和15.0%，二者差异无统计学意义（χ2=0.17，p>0.05）。由此表明，阿克苏地区是牛环形泰勒虫流行地区，有关部门应采取相应的措施，降低发生牛环形泰勒虫病疫情的风险。

关键词    环形泰勒虫;实时荧光PCR;流行病学;调查;新疆阿克苏

中图分类号    S855.9         文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2019）19-0219-01                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒属的环形泰勒虫（Theileria annulata）寄生于牛红细胞、巨噬细胞和淋巴细胞内的血液原虫病，病原主要通过媒介蜱虫传播，临床上主要表现为稽留热、黄疸、贫血及体表淋巴结肿大等症状[1-2]，严重时可导致死亡，给养牛业造成严重危害。我国自1960年首次发现环形泰勒虫病以来，相继在宁夏、河北、甘肃、新疆、内蒙古等地报道了该病的存在[3-4]。牛环形泰勒虫病长期危害养牛业的发展，感染环形泰勒虫的牛多呈带虫免疫，少有发病。沙塔尔等[5]报道的吐鲁番地区牛环形泰勒虫病感染率为51.6%。养牛業是阿克苏地区农牧民实现致富增收的重要途径之一，为了解阿克苏地区牛感染环形泰勒虫病情况，为掌握该病的流行状况及为防治提供数据支持，本试验对该地区随机采取的519份抗凝血进行了分子生物学检测。

1    材料与方法

1.1    主要试剂

全血DNA提取试剂盒、Premix Ex Taq、聚合酶等均购自大连宝生物工程有限公司;引物探针由生工生物工程（上海）股份有限公司合成;实时荧光定量7 500 PCR仪购自ABI。

1.2    试验方法

1.2.1    样品采集。2017—2018年，从阿克苏地区辖内9个县（市）随机采样，无菌采集519头牛抗凝血，提取全血基因组DNA，-20 ℃保存待检。

1.2.2    实时荧光PCR检测。利用已报道的牛环形泰勒虫的特异性引物和探针[6]，序列如下。TAF：5′-AATTTCTGCTGC-ATTGCTTG-3′。TAR：5′-GTAAACATTCAGACAAAGAAACT-CC-3′。TAP：5′-FAM-CCTCTGGGGTCTGTGCATGTGG-TA-MRA-3′。以提取的519份牛核酸样品为模板进行实时荧光PCR扩增，扩增体系均为25 μL：Premix Ex Taq 12.5 μL，上、下游引物（10 μmoL）各1 μL，探针（10 μmoL）0.75 μL，模板1 μL，ROX Ⅱ 0.5 μL，ddH2O补至25 μL。反应条件95 ℃预变性2 min;95 ℃变性15 s、57 ℃变性45 s，40个循环，反应最后一步检测荧光信号。

1.3    统计学分析

应用SPSS 22.0分析软件对调查数据进行分析，计算牛感染环形泰勒虫病情况，采用χ2检验比较检测数据的差异。检验水准为α=0.05。

2    结果与分析

2.1    实时荧光PCR检测结果

对提取的519份核酸样品经实时荧光PCR检测发现，感染率为14.6%（76/519）（图1）。

2.2    不同地区牛感染环形泰勒虫病情况

对阿克苏地区9个县（市）随机采集的519份样品实时荧光PCR检测，9个县（市）检测结果见表1。可以看出，各县（市）牛均有感染环形泰勒虫病情况，各县（市）间牛感染环形泰勒虫病情况差异具有统计学意义（χ2=0.12～41.77，p<0.05）。

2.3    不同饲养方式牛感染环形泰勒虫病情况

519份核酸样品经PCR检测，不同饲养方式的牛感染环形泰勒虫病的情况见表2。可以看出，舍饲和散养条件下的牛均可感染环形泰勒虫病，二者差异无统计学意义（χ2=0.17，p>0.05）。

3    讨论

目前，基层兽医部门检测环形泰勒虫病主要还是以血液涂片染色镜检为主，很少用到分子生物学和免疫学方法，血液涂片染色镜检受制于操作人员操作技能、专业知识储备和染色技术，漏检、误检情况较普遍。分子生物学方法比血液涂片染色镜检更灵敏、特异，适合应用于高通量检测[7]。牛在自然感染下，往往是带虫免疫，一旦感染将很难根除[8]。

本次调查结果发现，阿克苏地区9个县（市）的牛均有感染牛环形泰勒虫病的情况，县（市）之间感染情况差异具有统计学意义（χ2=0.12～41.77，p<0.05），可能是由于各县（市）地理环境、海拔、气候不同，导致当地蜱虫种群数量存在差异所致[9]。不同饲养条件下牛感染环形泰勒虫病情况差异无统计学意义（χ2=0.17，p>0.05），导致这种结果的原因可能有以下3种：一是舍饲牛场周围常有放牧羊出没，牛场圈舍是不完全封闭的，放牧羊身上的蜱虫掉落后进入牛场圈舍内叮咬舍饲牛;二是牛场圈舍针对性消毒措施不够完善，散养牛羊混合饲养情况十分普遍，交叉感染情况普遍;三是牛场购入饲草料时将附着在饲草料上的蜱虫一并带回。

调查结果表明，阿克苏地区是牛环形泰勒虫病的流行地区，对当地养牛业造成了一定的影响，有关部门应采取相应的措施，降低发生牛环形泰勒虫病疫情的风险。

4    参考文献

[1] 胡诗悦，钱年超，王轶男，等.延边地区牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查[J].中国兽医科学，2012，42（6）：647-650.

[2] 王真.新疆部分革蜱种属鉴定、遗传进化分析及其携带牛巴贝斯虫的血清学检测[D].乌鲁木齐：新疆农业大学，2014.

[3] 姜东续，李娟，吕敏娜，等.广东省牛体寄生蜱种及携带病原情况调查[J].畜牧与兽医，2015，47（2）：95-98.

[4] 海尼木古力·艾合买提，谢小婉，米热古丽·塔西铁木尔，等.新疆托克逊部分地区牛环形泰勒虫感染情况调查[J].畜牧与兽医，2017，49（6）：117-118.

[5] 沙塔尔·卡哈尔，曹雯丽，张扬，等.吐鲁番部分疫区牛环形泰勒虫病流行病学调查[J].新疆农业科学，2013，50（6）：1161-1164.

[6] 郭庆勇，王振宝，何晓杰，等.牛环形泰勒虫病实时荧光PCR诊断方法的建立及初步应用[J].中国兽医学报，2013，33（9）：1369-1372.

[7] 陈秋语，罗金，陈泽，等.新疆伊犁哈萨克自治州蜱及牛羊蜱传病分子流行病学调查[J].中国动物传染病学报，2016，24（3）：72-77.

[8] 李佳，段真真，白正辉，等.阿克苏地区羊感染泰勒虫病流行病学调查及分类鉴定[J].黑龙江畜牧兽医，2016（11）：165-167.

[9] 图尔荪·萨迪尔，李佳，王振宝，等.新疆昭苏县马梨形虫的检测及传播媒介蜱的鉴定[J].动物医学进展，2016，37（7）：44-48.