两头尖红外光谱指纹图谱

赵丽茹，赵利利，蔡广知∗，曲 帅，李金花，王 晶

（1.吉林省生物研究所，吉林 长春130012；2.长春中医药大学，吉林 长春130017；3.长春中医药大学附属医院，吉林 长春130012）

两头尖药材为毛茛科植物多被银莲花Anemone raddeanaRegel 的干燥根茎，性辛、热；有毒。归脾经。具有祛风湿、消痈肿的功效［1］。研究表明其具有显著的抗肿瘤、抑菌、抗炎镇痛等作用［2-8］。临床上被广泛应用，如被患者熟知的中成药活络丹、再造丸，其主要成分就是两头尖［3］。

近年来，红外光谱检测技术广泛的应用于各个领域［9］，包括中药材、中药炮制、中成药的质量控制等方面［10-13］。它不但具有操作简单、速度快等特点，还能够提供药材的综合信息，从而反应中药材内在的质量。本研究利用红外光谱技术对不同产地的两头尖中药材进行分析，图谱比对，首次建立了两头尖药材的红外光谱指纹图谱的共有模式，以期为更好、更快速的评价其质量提供依据。

1 材料

Vector 33型傅立叶变换红外光谱仪（德国Bruker 公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；AB-135-S 型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；FZ102微型植物试样粉碎机（北京市永光明医疗仪器厂）。溴化钾（光谱纯）。两头尖药材经长春中医药大学肖寄平教授鉴定均为毛莨科银莲花属多被银莲花Anemone raddeanaRegel 的干燥根茎，信息见表1。3个混淆品为天葵子、九节菖蒲、香附。

2 方法

2.1 样品处理 采用溴化钾压片法［14］。取两头尖药材，粉碎，过200目筛，在115 ℃干燥至恒定质量，备用。精密称取样品粉末2 mg，KBr 100 mg，置玛瑙研钵中混合研磨，均匀放入模具内，12.5 MPa 下作用10 min，压片，所压出来的片子应为透明的薄片，作为样品片。同法制得KBr 空白片。

2.2 光谱条件［15］中红外检测器（德国Bruker 公司）；数据处理系统OPUS 5.0；分辨率4 cm-1；扫描次数32次；扫描范围4 000～400 cm-1。

2.3 数据预处理 每个样品测定3次，所有图谱进行基线矫正，归一化处理，然后将各次测得的光谱曲线做平均处理，得到平均图谱，再对图谱作13点平滑，即得。

2.4 方法学验证［16］

2.4.1 精密度试验 取同一产地的两头尖药材，按“2.1”项下方法处理，连续测定6次，测得样品红外图谱间相关系数的平均值为0.999 9，RSD 为0.008 4%（n=6）。表明仪器精密度良好。

2.4.2 稳定性试验 取同一产地的两头尖药材，按“2.1”项下方法处理，置干燥器内保存，分别于0、1、2、4、6、8、12 h 进样，测得各样品红外谱图间相关系数的平均值为0.999 0，RSD 为0.094 17%（n=7）。表明样品在12 h 内稳定性良好。

2.4.3 重复性试验 取同一产地的两头尖药材6份，按“2.1”项下方法处理，用红外光谱仪测定。测得各样品红外谱图间相关系数的平均值为0.998 9。RSD 为0.123 8%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.5 红外光谱指纹图谱建立

2.5.1 两头尖药材测定 取不同产地的两头尖样品和混淆品，按“2.1”项下方法处理，用红外光谱仪测定，结果见图1。

图1 不同产地样品及混淆品红外光谱图

2.5.2 相似度分析 利用OPUS 处理软件对不同产地两头尖样品的红外图谱以及平均图谱进行基线校正、归一化、一阶导、矢量归一化处理，并对其进行相似度分析，结果见表2。

表2 样品红外谱图相似度值

结果表明，18批不同产地样品图谱与平均图谱的相似度均大于0.97，不同产地样品红外图谱与平均图谱的相似度较高，而3个混淆品与平均图谱的相似度分别为0.432 6、0.576 1、0.567 7。

3 讨论

本研究将18批两头尖药材和3个混淆品，采用溴化钾压片法进行红外光谱测定。将所得图谱处理后，加以分析。从而确定共有峰，计算相似度，结果显示，样品之间的相似度均值为0.991 7，相似度比较高，同比之下烟台和济南样品的相似度相对比较低。表明这2种样品和其他产地样品相比较，成分略有差异，但相似度也在0.97以上。而3个混淆品的相似度值较低，表明混淆品的成分和正品相比较差别较大。通过相似度分析表明，两头尖药材的红外光谱指纹图谱的共有模式可以与混淆品种相区别，具有鉴别药材真伪的作用，表明用红外光谱法建立的两头尖药材的指纹图谱，可以作为其质量评价的一种手段。

两头尖药材在质量研究方面的文献研究报道甚少。除张彦飞等［17-18］对两头尖进行了液相指纹图谱研究和竹节香附素A 的含有量测定外，尚未见关于两头尖药材光谱鉴别的研究报道。液相鉴别方法虽具有准确度、灵敏度高等特点。却不及红外光谱鉴别方法简单、方便。故本研究采用红外光谱鉴别法，为两头尖药材提供了一种更简便快捷的鉴别方法。