不同品牌胶体金免疫层析法试剂检测原料乳中氟苯尼考的研究

赵媛 宋晓东 马文丽 林立民

氟苯尼考（Florfenicol），又名氟甲砜霉素，是一种新的兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，具有吸收性好、体内分布广、广谱抗菌、安全高效等特点，且对敏感菌所导致的畜禽细菌性疾病有显著的治疗效果，故其作为氯霉素的替代物被广泛用于治疗畜禽及水产品的细菌性疾病。研究表明，氟苯尼考具有胚胎毒性和耐药性，在畜禽生产中的大量应用将导致其在畜禽产品中有所残留，进而危害人体健康。欧盟、日本等国家均制定了动物食品中氟苯尼考的最大残留量标准，我国农业部235号公告也对其残留量作了严格规定——在牛、羊泌乳期禁用。

目前，检测动物源性食品中氟苯尼考残留的方法主要有电位法、分光光度法、色谱法、免疫分析法等。其中，免疫分析法中的胶体金免疫测定法是一种利用胶体金颗粒物标记抗原或抗体的一类检测方法，具有直观简单、快速方便、成本低廉等特点，因此常被乳制品企业用作定性筛查方法。

本研究对市售不同品牌的胶体金免疫层析法试剂在检出限、重复性、特异性、干扰性等方面检测原料乳中氟苯尼考残留结果进行对比，以期为乳制品企业选择试剂品牌提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

读数仪;温育器;移液器;不同品牌氟苯尼考金标快速检测试纸条。

1.2检测方法

依据不同品牌氟苯尼考金标快速检测试纸条说明书进行操作。选取市售5种不同品牌的试剂厂家进行实验，品牌名称分别用A、B、C、D、E代替。

1.3 样品制备及检测

样品不需要前处理——回温至室温后直接检测，按照不同品牌试剂的操作方法进行，并用读数仪判读结果。

1.4 检出限实验

选取阴性原料乳样品6份，向其中5份样品中各加入氟苯尼考标准品，分别配制成不同浓度的水平样品，其中1份作阴性对照，按照不同品牌试剂操作方法进行检测，并计算各个试剂的样品阳性率。

1.5 重复性实验

选取阴性原料乳样品，加入氟苯尼考标准品，配制成0.1μg/kg浓度水平的样品，按照不同品牌试剂的操作方法进行檢测，每种试剂重复检测20组，并计算各个试剂的样品阳性率。

1.6 特异性实验

选取阴性原料乳样品，加入氯霉素、氟苯尼考等同类药物标准品，分别配制成0.1μg/kg浓度水平的样品，按照不同品牌试剂操作方法进行检测，每种试剂检测6组，并测定是否存在交叉反应。

1.7 干扰性实验

选取阴性原料乳样品，加入干扰性物质后，分别配制成0.1μg/kg浓度水平的样品，按照不同品牌试剂的操作方法进行检测，每种试剂检测6组，并测定试剂是否存在干扰。

2 结果与分析

2.1 检出限

根据不同品牌试剂方法检出样品的阳性率不同，由此可得出各个试剂的检出限。检出限结果对比如表1所示，品牌B、C、D试剂检出限均为0.05μg/kg，品牌A试剂检出限为0.07μg/kg，品牌E试剂检出限为0.1μg/kg。

2.2 重复性

通过检测同一浓度水平的20组样品，可知品牌C、D、E试剂阳性率为100%，具有良好的重复性，重复性实验结果见表2。

2.3特异性

根据各个品牌试剂检测同一浓度水平的同类氯霉素药物，得出特异性实验结果，各个品牌试剂均无交叉反应，表明试剂特异性良好。

2.4干扰性

根据各个品牌试剂检测同一水平的干扰物质，结果显示，除品牌E试剂存在干扰外，其余4个品牌试剂均无干扰，具有良好的抗干扰性，干扰性实验结果见表3。

3 结论

通过对5种不同品牌胶体金免疫层析法试剂的研究，发现品牌C、D试剂方法的灵敏度高、重复性好、特异性强、抗干扰性强，在乳制品企业实际检测工作中可以用于快速初筛原料乳中氟苯尼考药物，提高了实验效率，提供了技术保障，避免了质量风险。