谷物中呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的同时测定试验初报

路峰

摘 要 将超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用测定小麦中3种呕吐毒素和玉米赤霉烯酮。样品经超声提取、SPE净化后，用液相分离和三重四极杆质谱仪内标法进行定量分析。结果表明，4种毒素在5～150 ng·mL-1的浓度范围内线性良好;对5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合标准溶液连续3次进样，3个浓度标准品的准确度和浓度的相对标准偏差分别为95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，仪器精密度良好;同时考察了空白小麦基质加标结果，结果显示4种毒素10 ng·mL-1的加标回收率为98.9%～112.0%。

关键词 呕吐毒素;玉米赤霉烯酮;小麦;超高效液相色谱仪;三重四极杆质谱仪

中图分类号：TS210.7 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.20.071

呕吐毒素，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），属单端孢霉烯族化合物，因可引起猪的呕吐而得名。当人摄入了被DON污染的食物后，会出现厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时会损害造血系统造成死亡。欧盟的呕吐毒素限量标准为小于1.0 mg·kg-1;我国食品安全国家标准GB 2761—2017《食品中真菌毒素限量》中规定，玉米等谷物及其制品中呕吐毒素限量为1.0 mg·kg-1。玉米赤霉烯酮（ZON）又称F-2毒素，具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，我国国家标准《食品中真菌毒素限量》中规定谷物及其制品中该毒素的限量指标为60 μg·kg-1。通过将超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用，建立了快速、准确测定小麦中3种呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

实验使用岛津LC-30A超高效液相色谱仪与LCMS-8045三重四极杆质谱仪联用系统。具体配置有：DGU-20A5在线脱气机，LC-30AD×2输液泵，SIL-30AC自动进样器，CBM-20A系统控制器，CTO-30A柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8045三重四极杆质谱仪，Lab Solutions色谱工作站。

1.2 分析条件[1-3]

1）液相色谱条件。LC-30A系统;色谱柱：UHPLC C18 250mm×2.0 mm I.D.×75 mm L;流动相：A为0.01%氨水，B为乙腈;流速：0.3 mL·min-1;进样体积：10 μL;柱温：40 ℃;洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%（梯度洗脱时间程序：0～2 min，B相60%;2～4 min，B相95%;4.5～5.5 min，B相100%;5.7～8.0 min，B相10%）。

2）质谱条件。离子源接口电压：-3.5 kV;离子源ESI，负离子扫描;干燥气：氮气，15 L·min-1;雾化气：氮气，3.0 L·min-1;碰撞气：氩气;加热模块温度：400 ℃;脱溶剂管温度：250 ℃;扫描模式：多反应监测（MRM）;驻留时间：20 ms;延迟时间：3 ms。

1.3 样品制备

1.3.1 标准溶液配制

取适量单标储备液，用乙腈配制成1 000 ng·mL-1 的混合标准溶液，用水逐级稀释成浓度为150 ng·mL-1、100 ng·mL-1、75 ng·mL-1、50 ng·mL-1、25 ng·mL-1、10 ng·mL-1和5 ng·mL-1 的標准工作液。内标物13C-DON、13C-ZON和13C-3-ADON的浓度均为50 ng·mL-1。

1.3.2 样品前处理方法

准确称取5.0 g粉碎均匀的样品至50 mL的离心管中，加入乙腈-水（21∶4，v/v）溶液40 mL，涡旋1 min，超声60 min，离心5 min（10 000 r·min-1）。移取5 mL上清液至多功能净化柱（MycosepTM226）的玻璃管内，加入100 μL内标及5 mL乙腈溶液混匀，将多功能净化柱的填料管插入玻璃管中并缓慢推动填料管，弃去2 mL初滤液，取续滤液4 mL至氮吹瓶中。在40～50 ℃下氮气吹干，用乙腈-水（1∶9，v/v）溶液定容至1 mL，超声涡旋30 s，用0.22 μm滤膜过滤至进样瓶中备用。

1.4 实验试剂

氨水、乙腈，均为分析纯。

1.5 实验对象

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-ADON）、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-ADON）、玉米赤霉烯酮（ZON）。

2 结果与分析

2.1 标准样品的MRM色谱图

10 ng·mL-1混合标准样品的MRM色谱图如图1所示。

由图1可知，出峰时间DON最早，ZON最晚;15-DON的峰强度最小，ZON的峰强度最大。可见，使用本分析方法，DON、15-AON、3-AON、ZON四种毒素均能得到很好的分离。

2.2 线性关系

4种毒素的校准曲线参数见表1。

2.3 检出限和定量限

4种毒素的检出限和定量限见表2。

2.4 精密度实验

对5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合标准溶液连续3次进样，3个浓度标准品的准确度和浓度的相对标准偏差（RSD）分别为95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，仪器精密度良好，见表3。

2.5 基质加标实验

以空白小麦样配制加标溶液，加标浓度为10 ng·mL-1，4种毒素DON、15-ADON、3-ADON和ZON加标回收率分别为98.9%、105.9%、104.7%和112.0%。

3 结论与讨论

建立一种将超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用测定小麦中3种呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。4种毒素在5～150 ng·mL-1浓度范围内线性良好;10 ng·mL-1基质加标样品的回收率良好;低、中、高3个浓度标准品的准确度和浓度的相对标准偏差分别为95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，灵敏度高，可以满足对这4种毒素的分析要求。

参考文献：

[1] Bhat R， Rai RV， Karim AA. Mycotoxins in food and feed： present status and future concerns[J].Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety，2010，9（1）：57-81.

[2] 苏永腾，饶辉，符金华，等.液相色谱-串联质谱法测定植物饲料原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒素A和T-2毒素[J].中国饲料添加剂，2014（10）：16-24.

[3] 杨万颖，郑彦婕，李碧芳，等.液相色谱串联质谱法同时测定小麦粉中10种真菌毒素[J].广东化工，2008，35（9）：123-128.

（责任编辑：赵中正）