QuEchERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中甲磺草胺

范艳，程媛媛，韩超，王莉，王菲迪，吴声敢

(浙江省植物有害生物防控重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地 农业农村部农药残留检测重点实验室浙江省农业科学院农产品质量标准研究所，浙江 杭州 310021)

甲磺草胺(Sulfentrazone)，又名甲基磺酰甲胺，是一种三唑啉酮类除草剂，原卟啉原氧化酶抑制剂。通过抑制叶绿素生物合成过程中原卟啉原氧化酶而破坏细胞膜，使叶片迅速干枯、死亡。适用于大豆、玉米、花生、向日葵等作物田内一年生阔叶杂草、禾本科杂草和莎草，如牵牛、反枝苋、铁苋菜、曼陀罗、狗尾草、苍耳、牛筋草、香附子等。甲磺草胺是一种使用范围较广，低毒且难降解的除草剂，对目前较难除的牵牛花、香附子、苍耳有较好的效果[1-2]，是玉米、大豆和花生等作物的新型高效低毒播后苗前除草剂。这也使得甲磺草胺在农作物中有一定量的农药残留。

饲料是用于农业或牧业饲养的动物食物，包括大豆、豆粕、玉米、鱼粉、氨基酸、杂粕、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、饲料添加剂等十余个品种的饲料原料，对饲料中甲磺草胺残留量的研究至关重要。美国和日本已经制定了甲磺草胺在部分商品(包括水果、蔬菜、饲料等)中的残留限量(0.05～1.5 mg·kg-1不等)[3]，我国目前还没有对甲磺草胺做限量规定，也没有相关的检测标准。目前，对甲磺草胺的检测方法包括气质联用[4-6]，液相色谱法[7-10]和液质联用[11]。甲磺草胺的不合理使用，不仅会对动物产生影响，还会对人体健康产生重大威胁。因此，有必要建立一种简便、快速的方法检测饲料中的残留。本文采用了有机溶剂提取、QuEchERS净化，结合超高效液相色谱-串联质谱法，建立了饲料中甲磺草胺的农药残留检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料

试剂：色谱纯甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)，色谱纯乙腈(Merck公司)，饮用纯净水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)，分析纯氯化钠(兰溪市屹达化工试剂有限公司)。

仪器和设备：ABSciex液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Exion LCAD-Triple QuadTM5500，美国ABSciex公司)，ACQUITY UPLCTMBEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美国Waters公司)，BSA224S 电子天平(感量0.000 1 g，德国赛多利斯集团)，OHAUS SPS202F型电子天平(感量0.01 g，奥克斯仪器常州有限公司)，TYZD-IIA振荡器(姜堰市天仪电子仪器有限公司)，Eppendorf Centrifuge 5430R高速冷冻离心机(德国艾本德股份公司)，MX-S可调式混匀仪(北京大龙兴创实验仪器有限公司)，Cleanert MAS-QuEchERS净化管，移液枪，不锈钢单头长柄药勺(长约20 cm)，50 mL PPTE离心管，刻度管，容量瓶等。

1.2 标准溶液的配制

电子天平称取甲磺草胺标准品0.016 4 g(纯度为98.5%)，用色谱纯乙腈定容至10.00 mL，得到浓度为1.62×103mg·L-1的标准储备液。用乙腈稀释甲磺草胺标准储备液，得到浓度为10.0 mg·L-1的标准工作液。用乙腈逐级稀释10.0 mg·L-1的标准工作液，得到浓度为0.500、0.100、0.050、0.010、0.005、0.002 mg·L-1的标准工作液。

1.3 质谱条件

毛细管电压-4.5 kV，气帘气35 psi，喷撞气7 psi，喷雾气50 psi，辅助加热气50 psi，离子源温度550 ℃，射入电压-10 V，碰撞室射出电压-16 V。定性、定量模式均为MRM多反应监测模式，电离方式为ESI-。甲磺草胺的其余质谱检测参数见表1。

表1 甲磺草胺质谱检测参数

1.4 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美国Waters公司)；色谱柱温度：40 ℃；进样量：5.00 μL；流速：0.25 mL·min-1；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：色谱纯乙腈；梯度洗脱程序：0～0.5 min，60% A，0.5～4.0 min，60%A～10%A，4.0～4.5 min，10% A，4.5～4.6 min，10%～60%A，4.6～6.5 min，60% A。

1.5 试验基质

鹌鹑饲料701主要成分为大豆粉、玉米粉、鱼粉等。

1.6 样品前处理

称取饲料2.00 g (添加标样静置30 min后进行前处理)，置于50 mL PPTE离心管中，加入饮用纯净水5 mL，涡旋30 s后，加入20 mL乙腈，振荡30 min，加入3 g氯化钠，涡旋30 s，1 574g离心10 min，取上清液置于Cleanert MAS-QuEChERS净化管中，涡旋30 s，静置5 min后取上清液过0.22 μm滤膜或用乙腈稀释后过0.22 μm滤膜，待检测。

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的优化

选择了4种有机溶剂作为提取溶剂，分别为乙腈、乙酸乙酯、甲醇、正己烷。添加浓度为10 mg·L-1，3个重复。试验结果表明，乙腈提取的回收率为95.0%，乙酸乙酯提取的回收率为87.0%，甲醇提取的回收率为80.4%，正己烷提取的回收率为0。根据试验结果，选择乙腈作为最终提取溶剂。

2.2 净化条件的选择

比较了3种Cleanert MAS-QuEChERS净化管，分别为PSA 50 mg+MgSO415 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 10 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 50 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg。添加浓度为10 mg·L-1，5个重复。3种净化管的回收率分别为96.0%、95.5%、95.1%，表明这3种净化管都可以满足回收率的要求。因为用有机溶剂提取后的溶液含色素，所以，本试验选用含50 mg PC的Cleanert MAS-QuEChERS净化管。

2.3 线性关系、回收率和精密度

将浓度为0.002、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500 mg·L-1的甲磺草胺标准工作液进样分析，以浓度-峰面积绘制标准曲线。结果如图1所示，得到回归方程为y=4 226 608x+10 267(R2=0.999 8)。

图1 甲磺草胺标准曲线

在饲料中添加3档浓度(0.10、10.00、162.00 mg·kg-1)的甲磺草胺标准溶液，每档浓度设5个平行样品。回收率和相对标准偏差见表2，仪器对甲磺草胺的最小检出量(LOD)为4.00×10-3ng，甲磺草胺在饲料中的最低检测浓度(LOQ)为0.1 mg·kg-1。

表2 不同添加水平下饲料中甲磺草胺的回收率和相对标准偏差

3 小结

本文采用QuEchERS结合高效液相色谱-串联质谱法建立了饲料中甲磺草胺的检测方法。饲料用乙腈提取，用Cleanert MAS-QuEChERS净化，采用0.1%甲酸和乙腈作为流动相梯度洗脱，然后进高效液相色谱-串联质谱检测。在0.10、10.00和162.00 mg·kg-1添加水平下，甲磺草胺的回收率为91.5%～103.0%，相对标准偏差(n=5)为1.39%～5.41%，仪器对甲磺草胺的最小检出量为4.00×10-3ng，甲磺草胺在饲料中的最低检测浓度为0.1 mg·kg-1。本研究为饲料中甲磺草胺的检测提供了一个简便、快速、准确的方法。