QuEChERs-UPLC-MS/MS测定水稻植株中的氟嘧菌酯残留

王菲迪，吴声敢，蒋金花，徐明飞，柳新菊，安雪花，吕露，赵学平

(浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 省部共建农产品质量安全国家重点实验室(筹)农业农村部农药残留检测重点实验室，浙江 杭州 310021)

氟嘧菌酯是一种新型的甲氧基丙烯酸酯类农药，作为一种新型的内吸性杀菌剂主要用于茎叶处理。氟嘧菌酯具有快速高效杀菌和持效期长的特性，杀菌原理是通过阻断细胞色素间的电子传递，抑制线粒体呼吸，破坏能量生成从而抑制真菌生长，在禾谷类、蔬菜等作物上有广泛的应用[1-2]。氟嘧菌酯已于2017年过新农药登记资料保护期，已引起国内农药企业的登记热潮，在我国具有广阔的市场前景[3]。

目前，有关氟嘧菌酯残留检测的报道还较少。俞建忠等[4]报道了氟嘧菌酯原药的分析方法，采用高效液相色谱对其进行分离分析；雒丽丽等[5]采用超高效液相色谱法对水果和饮料中氟嘧菌酯进行检测；王云凤等[6]基于液相色谱-质谱建立了果蔬中包括氟嘧菌酯在内的8种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留检测方法；Wang等[7]采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱技术建立了黄瓜及土壤中氟嘧菌酯和戊唑醇同时检测的方法。目前氟嘧菌酯在我国的登记产品还很少，除原药外仅有2种产品登记用于黄瓜和番茄。氟嘧菌酯对水稻纹枯病和稻曲病有较好的防治效果，且同类产品嘧菌酯已被多次登记用于防治水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病，因此，氟嘧菌酯在水稻病害防治上有较好的应用前景，未来有可能被频繁登记用于水稻纹枯病和稻曲病等病害防治。目前水稻植株上氟嘧菌酯的检测分析还未见报道，而水稻在我国农产品中占据重要地位，因此，有必要建立氟嘧菌酯在水稻中的残留检测方法。

QuEChERs方法是近年来在农药残留分析领域广泛应用的一种前处理技术，具有简单、快速、高效、成本低、试剂用量少、检测范围广的特点。QuEChERs方法通常采用N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化碳黑(PC)等填料作为吸附剂。PSA用于除去提取液中影响检测的脂肪酸、有机酸、部分色素等干扰物，从而降低液相色谱串联质谱检测过程中的基质干扰。PC主要用于除去色素对检测结果的干扰。C18主要用于除去脂类、甾醇和维生素的干扰。因此，本研究采用QuEChERs前处理技术，并结合超高效液相色谱-串联质谱检测技术，检测水稻植株上氟嘧菌酯的残留量，为水稻中氟嘧菌酯的残留动态及分布研究提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

ABSciex液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Exion LCAD-Triple QuadTM 5500，美国ABSciex公司)；Luna Omega Polar C18色谱柱(2.1 mm×50 mm×3 μm，Phenomenex公司)；BSA224S 电子天平(感量0.000 1 g，德国赛多利斯集团)；OHAUS SPS202F型电子天平(感量0.01 g，奥豪斯仪器常州有限公司)；TYZD-IIA振荡器(姜堰市天仪电子仪器有限公司)；Eppendorf Centrifuge 5430R 高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；MX-S可调式混匀仪(北京大龙兴创实验仪器有限公司)；SK1200H超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。

氟嘧菌酯标准品(纯度99.9%，Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)；色谱纯乙腈(德国Merck公司)；色谱纯甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)；分析纯氯化钠和分析纯MgSO4(天津大茂化学试剂厂)；饮用纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；净化填料石墨化碳黑(PC)和Cleanert MAS-QuEChERS净化管(MS-9PP0250，C18 50 mg，PSA 50 mg，PC 50 mg，MgSO4150 mg)均购自天津博纳艾杰尔科技有限公司。

1.2 标准溶液配制

准确称取氟嘧菌酯标准物质0.010 1 g(纯度为99.9%)，用乙腈定容至10.00 mL，得到浓度为1.01×103mg·L-1标准储备液。用乙腈逐级稀释氟嘧菌酯标准储备液得到的标准工作液。

1.3 试验方法

1.3.1 样品前处理

称取水稻植株样品5.00 g(样品制备：用剪刀或其他工具将水稻植株样品剪成1 cm以下的小段)，置于50.0 mL PPTE离心管中，加入饮用纯净水5.000 mL，涡旋30 s后，加入20.00 mL色谱纯乙腈，振荡30 min，加入3.00 g 氯化钠，涡旋30 s，在7 500 r·min-1转速下离心10 min，取上清液置于Cleanert MAS-QuEChERS净化管中，涡旋30 s，在4 000 r·min-1转速下离心10 min，取上清液0.500 mL置于刻度管中，再加入0.500 mL色谱纯乙腈，混匀后过0.22 μm滤膜，待检测。

1.3.2 检测条件

液相条件。色谱柱：Omega Polar C18(2.1 mm×50 mm×3 μm，Phenomenex公司)；流动相：0.1%甲酸水溶液和乙腈梯度洗脱(表1)；流速为0.25 mL·min-1；柱温为40 ℃；进样体积2.00 μL；峰面积外标法定量。

表1 高效液相色谱梯度洗脱参数

质谱条件。毛细管电压5.5 kV，气帘气35 psi，喷撞气7 psi，喷雾气50 psi，辅助加热气50 psi，离子源温度550 ℃，Q0入口电压10 V，碰撞池出口电压16 V。定性、定量模式均为MRM多反应监测模式，电离方式为ESI+。氟嘧菌酯的其余质谱检测参数见表2。

表2 氟嘧菌酯质谱检测参数

1.3.3 添加回收试验

在水稻植株空白样品中添加氟嘧菌酯标准溶液，添加水平为0.01、0.50、2.00和10.10 mg·kg-1，每个水平重复5次，按本研究建立的方法进行样品前处理和仪器分析，分别计算平均添加回收率和相对标准偏差。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

考察乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸+2 mmol·L-1乙酸铵水溶液、乙腈-2 mmol·L-1乙酸铵水溶液以及甲醇-0.1%甲酸水等流动相对氟嘧菌酯的色谱峰形和响应值的影响。最终确定流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，在该流动相体系下，色谱峰形相对较好且稳定，并优化了流动相梯度。

2.2 净化方法的确定

因水稻植株的提取液中色素含量较多，故选择包含MgSO4、PSA、PC、C18填料的净化管对提取液进行净化。主要对比在C18、PSA和无水MgSO4用量分别为50、50、150 mg的条件下不同用量的PC对添加回收率的影响发现，PC对氟嘧菌酯的添加回收率影响不大，因此，选择Cleanert MAS-QuEChERS净化管(MS-9PP0250，C18 50 mg，PSA 50 mg，PC 50 mg，MgSO4150 mg)用于样品前处理，色素去除效果较好。

2.3 方法的线性范围

将0.000 5、0.001 0、0.005 0、0.010 0和0.050 0 mg·L-1的氟嘧菌酯标准溶液按上述仪器测定条件测定并以峰面积-质量浓度绘制标准曲线。经最小二乘法拟合得到回归方程为y=31 968 438x-5 118(R2=0.999 9)，表明氟嘧菌酯在此浓度范围内线性良好。

2.4 方法的准确度、精密度和定量限

在不含氟嘧菌酯的空白水稻植株样品中，通过添加回收试验，考察了方法的准确度和精密度(n=5)。

表3表明，氟嘧菌酯在0.01、0.50、2.00和10.10 mg·kg-1添加水平下，平均回收率在93.2%～120.0%，相对标准偏差在0.59%～2.67%，满足农药残留分析的要求。根据添加回收确定氟嘧菌酯的定量限(LOQ)为0.010 0 mg·kg-1。

表3 氟嘧菌酯的添加回收率和相对标准偏差

2.5 样品检测

为保证评价方法的可行性，本试验抽取水稻农药田间试验采集的29个样品进行检测。共有25个样品检出氟嘧菌酯，含量在0.02～6.91 mg·kg-1。该结果表明，本研究所建立的QuEChERs-超高效液相色谱-串联质谱检测技术适合水稻植株中氟嘧菌酯残留量的测定。

3 小结

建立了水稻植株中氟嘧菌酯的QuEChERs-超高效液相色谱-串联质谱检测方法，样品用乙腈提取，Cleanert MAS-QuEChERS净化管净化，该方法简单、快速、高效、灵敏，检出限最低达0.010 0 mg·kg-1，能够满足氟嘧菌酯残留量的检测要求，能够为水稻中氟嘧菌酯的残留动态及分布研究提供参考依据，同时也能为氟嘧菌酯在其他农产品中的残留量检测提供一定的参考。