检测HPV在宫颈癌筛查中应用多通道荧光PCR技术的价值研究

努热丽亚?阿布力克木

【摘 要】 目的：研究检测HPV在宫颈癌筛查中应用多通道荧光PCR技术的价值。方法：选取于本院进行宫颈癌筛查的患者190例，采集所有患者的宫颈细胞标本，并采用多通道荧光PCR技术对其进行18种高危HPV DNA分型和定量检测，将检测结果与PCR-反向斑点杂交法（PCR-RDB）检测结果对比，若结果缺乏一致性，则标本需要应用序列方法验证。结果：就190例患者，其多通道荧光PCR技术检测阳性率为14.21%，PCR-RDB检测阳性率为17.89%，两者检测一致性为99.5%，即Kappa值为0.978。结论：检测HPV在宫颈癌筛查中应用多通道荧光PCR技术的价值较高，可以准确检测出标本阳性，保证患者宫颈癌筛查的效果。

【关键词】 检测HPV;宫颈癌筛查;多通道荧光PCR技术

【中图分类号】R730.43

【文献标志码】A

【文章编号】1005-0019（2019）18-232-02

宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤疾病，而人乳头瘤病毒（HPV）是一种可以引发人体黏膜组织、皮肤良性与恶性肿瘤的双链DNA病毒，根据相关研究可知，宫颈癌病变主要原因在于感染HPV，多通道荧光PCR技术是近几年临床检测HPV常用的一种技术，具有高通量、特异性强的特点[1]。此研究选取190例行宫颈癌筛查患者，分析检测HPV在其中應用多通道荧光PCR技术的价值，具体内容如下。

1 资料和方法

1.1 基本资料

选取2016年7月—2018年7月于本院进行宫颈癌筛查的患者190例，年龄19—49岁，平均年龄（30.57±1.49）岁。所有受检者在文化学历、身高体重、性别等临床资料方面无比较差异（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采集DNA与HPV通用PCR引物设计

采集DNA：采用生理盐水漂洗宫颈刷拭子后，需要将所有生理盐水置入1.5ml离心管内，严格按照每分钟13000r速度完成离心操作10分钟，去除上层清液，将沉淀物添加到DNA裂解液50μL，待均匀混合后需要置于100℃环境中进行干浴10分钟，然后严格按照每分钟13000r速度进行离心操作10分钟，提取上层清液备用。HPV通用PCR引物设计：扩增各HPV亚型的通用引物核苷酸，MY09引物序列：5-CGT CCM ARR GGA WAC TGA TC-3，MY11引物序列：5-GCM CAA GGG WCA TAA YAA TGG-3，其中R=A/G，Y=C/T，W=A/T，M=A/C。

1.2.2 多通道荧光PCR检测

18种高危HPV DNA分型和定量检测，其中HPV26、53、73、82等4种HPV无法被分出具体型别，剩余的HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等14种HPV可以被分出具体型别，每个患者宫颈细胞标本用4个反应管检测，严格根据说明书完成试剂量配制，之后将采集5μL的DNA标本置入PCR反应管内，再采用PCR仪按照试剂盒说明书调整反应条件、对应荧光基团、4个通道，之后扩增PCR，结果判断标准：若通道具有明显对数扩增曲线，同时Ct在26及以下，即阳性;若不存在对数扩增曲线，Ct在26以上，则阴性;试验有效性判断：各标本均可以通过反应管4-通道4中的β球蛋白基因。

1.2.3 PCR-RDB检测

采用RDB试剂盒检测HPV分型，其中包括HPV6、11、40、42、43、44、54、61、81、83等10种低危型别与HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等，之后采用PCR仪、全自动核酸杂交检测仪严格按照试剂盒说明书完成检测，结果判断标准：试验有效（在膜条PC位点上存在蓝色斑点）、HPV感染和型别（膜条上蓝色斑点有无、出现位置）。

1.2.4 HPV序列

由多通道荧光PCR检测、PCR-RDB检测筛查出来的阳性标本，需要通过DNA测序确定型别。

1.3 统计学分析

本研究数据由SPSS19.0软件统计，计数资料检验用x2，表示行百分率（%），P<0.05说明差异呈现统计学意义。

2 结果

多通道荧光PCR技术检测阳性率为14.21%（27/190），PCR-RDB检测阳性率为17.89%（34/190），两者检测一致性为99.5%，即Kappa值为0.978，两种检测均未发生结果无效情况，PCR-RDB法检测的28种HPV基因分型中包括了多通道荧光PCR技术检测的18种高危型HPV，且多通道荧光PCR技术仅出现1例假阳性，PCR-RDB检测出现2例假阴性。

3 讨论

宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤疾病，其发病率仅次于宫颈癌，根据相关研究得出，宫颈癌危险因素主要包括感染HPV（人乳头瘤病毒），且女性宫颈病变的主要标志为HPV-DNA，在99.7%宫颈癌患者体内存在高危型HPV-DNA，故检测女性生殖道HPV感染情况和基因型在宫颈癌预防中具有至关重要的价值[2]。PCR-RDB检测是通过扩增靶序列杂交、固化多种特异性探针膜条等方法筛查出DNA中的多种突病，可以通过肉眼直接观察结果，且具有强特异性、敏感性，是国内当前常用的一种HPV基因分型检测方法，但存在操作繁琐、时间长、极易遭受污染、成本高的缺陷;而多通道荧光PCR是近几年临床监测HPV常用的一种技术，且不具有上述缺陷，并能够利用β球蛋白基因鉴别基因，以此及时排除假阴性情况，可以准确显示出阳性情况[3]。研究结果显示，多通道荧光PCR技术检测阳性率为14.21%，PCR-RDB检测阳性率为17.89%，两者检测一致性为99.5%，即Kappa值为0.978。

总而言之，检测HPV在宫颈癌筛查中应用多通道荧光PCR技术的价值较高，能一次性检测18种高危型HPV，并进行定量、分型，可准确筛查出宫颈细胞阳性情况，为患者后续治疗提供科学的数据参考，有助于保障女性身心健康，值得大力推广应用在宫颈癌筛查中。

参考文献

[1] 郑建军， 胡志芳. HPV16/18型病毒检测在宫颈癌筛查中的价值[J]. 中国妇幼保健， 2017， 32（16）：3725-3727.

[2] 田敬英. HPV基因分型联合TCT检测在宫颈癌筛查中的应用[J]. 中国实用医刊， 2016， 43（9）：119-120.

[3] 臧元怡. 高危HPV检测联合TCT在宫颈癌筛查中的应用[J]. 现代中西医结合杂志， 2015， v.24（11）：1184-1186.