HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量准确性的影响因素探讨

孙晓玲 王勍

摘  要：目的：探讨分析HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量准确性的影响因素。方法：选择混合模式离子交换柱，应用醋酸铵缓冲液-乙腈为流动相，通过蒸发光散射检测器进行检测。建立HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量测定模型，并且实施准确度，精密度试验。结果：钠离子浓度处于（1.83-76.37）μg/ml时与峰面积呈二项式相关，奥美拉唑中钠离子平均含量为6.12%，与理论值无显著差异;药物分子洗脱状态会影响钠离子测定重复性和精密度结果、氯离子测定重复性。药物分子洗脱难度大将会降低精密度。结论：应用混合模式离子交换柱，并且采用HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量时具有良好的通用性和耐用性，然而药物分子洗脱难度大将会降低精密度。

关键词：HPLC-ELSD法;化学药物;成盐离子含量;准确性;影响因素

为了有效改善药物溶解度，生产工艺特性和理化稳定性，因此多数药物都是以成盐形式生产。由于我国存在较多仿制药生产企业，并且企业原料药物的成盐形式均不同。比如奥美拉唑药物，我国药物市场所销售的奥美拉唑药物原料为奥美拉唑、镁盐、钠盐和锌盐等，能够应用到不同制剂研发当中[1]。当前，在对奥美拉唑镁盐中镁离子含量进行测定时主要应用滴定法，但是鲜少有学者测定钠离子含量。此次研究主要是探讨分析HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量准确性的影响因素，现将此次研究报告作如下汇报：

1资料与方法

1.1一般资料

（1）仪器设备：HPLC-ELSD仪器主要用于开发和研究方法及其验证实验中，此次实验所应用的仪器包括液相色谱系统。

（2）试剂与实验用药：待测样品为奥美拉唑待定标准化学对照品;氯化钠工业基准品。醋酸铵、氯化钾、硫酸锂、无水氯化钙、乙腈和冰醋酸。

1.2方法

（1）制备混合溶液：称定10.64mg氯化钾，16.55mg氯化钠基准品，11.47mg奥美拉唑钠对照品，14.93mg醋酸铜，16.2mg硫酸镁，11.98mg硫酸锂，28.92mg无水氯化钙，，9.95mg碳酸氢钠。将以上物质分别置入到量瓶（10ml）中，使用60%乙腈水溶液溶解稀释至刻度，混合均匀之后确定各离子峰位溶液。分別称取上述溶液1ml，将其置入到同一个量瓶中，使用乙腈水溶液（60%）进行稀释，混合均匀之后获取混合溶液。

（2）制备氯化钠对照品：选取适量氯化钠基准品，在进行干燥处理之后称取58.13mg，置入到量瓶（50ml）中，使用乙腈水溶液（50%）进行稀释，混合均匀之后获取对照品储备液。称取1ml对照品储备液置入5ml、25ml、100ml和200ml量瓶中，使用乙腈水溶液（50%）进行稀释，混合均匀之后获取从低浓度至高浓度对照品溶液。

（3）制备供试品溶液：称取11.4mg样本细粉，置入量瓶（25ml）中，选择乙腈水溶液（50%）进行稀释，混合均匀之后过滤，选取续滤液作为供试品溶液。

2结果与讨论

2.1测定奥美拉唑钠中钠离子含量

（1）专属性：1）分离奥美拉唑和混合离子溶液：选取20μL混合溶液，记录色谱图至钠离子峰保留时间的6倍，并且按照次序以此进行洗脱：奥美拉唑，锂离子、钠离子、钾离子、镁离子、氯离子、钙离子。如图1所示。其他如锌离子、硫酸根离子、碳酸氢根离子在此色谱条件下不进行洗脱处理，需要应用其他色谱柱进行洗脱处理。尽管奥美拉唑峰与邻近锂离子峰分离度达到1.1，却不会对钠离子峰定量造成影响。2）系统适用性试验溶液：分别称取20μL氯化钠对照品溶液和供试品溶液，如图2所示，氯离子峰与钠离子峰的分离度为17.42.在该色谱柱条件下，钠离子峰与奥美拉唑峰彻底分离，不影响钠离子测定。

（3）测定限和定量限：称取0.5ml对照品溶液置入量瓶（100ml）中，选择乙腈水溶液（50%）进行稀释，混合均匀之后过滤，选取滤液20μL，检测限和定量限分别为0.54μg/ml、1.86μg/ml。

（4）稳定性：选取11.4g奥美拉唑钠细粉，按照1.3所示方法制备供试品溶液，并且在室温条件下静置，分别在0、8h、16h、24h进样20μL，记录钠离子峰面积为5%，在24h内供试品溶液稳定。

（5）准确度：通过加样回收率试验测定准确度，选取11.4mg样品细粉，置入量瓶（25ml）中，选择乙腈水溶液（50%）进行稀释，之后加入401.2μg/ml氯化钠对照品溶液0.5ml、1ml和2.5ml，将其置入钠离子中，使用乙腈水溶液（50%）进行稀释，充分混合均匀，不同浓度制备三分溶液，并且按照1.4中所示方法和色谱条件进行测定，对加样回收率进行计算。结果显示，低浓度平均加样回收率为103.4%，中浓度平均加样回收率为100.6%，高浓度平均加样回收率为101.5%;峰面积分别为1.2%、3.6%、2.1%。

2.2HPLC-ELSD法测定化学药物成盐离子含量准确性的影响因素探讨

（1）药物分子洗脱状态：一般来说，都是通过加样回收率表述方法准确度。奥美拉唑中的奥美拉唑成分和钠成盐为1：1存在，钠离子理论含量为6.13%，检测实际含量为6.12%，峰面积为3.9%。无显著差异，因此药物分子洗脱状态不会影响准确度。

（2）仪器状态：检测仪器检测可会发现颗粒物质时，颗粒大小，形态以及产生过程等都会影响响应值。因此在设计实验时需要串联ELSD和HPLC大，并且计算色谱图中主成分峰值与钠离子峰面积。按照测定显示，奥美拉唑峰面积为0.75%，钠离子峰面积为2.7%，存在显著差异，因此仪器状态会影响准确度。

3、结论

在此研究中建立了HPLC-ELSD法测定奥美拉唑钠中的钠离子含量，并且进行详细论证。通过对化学药物成盐离子含量准确性的影响因素分析，结果显示，检测仪器状态会极大影响检测准确性。

参考文献

[1]程岁寒，张双庆，马灿，等.HPLC-ELSD法区分小儿氨酚黄那敏颗粒中体外培育牛黄和人工牛黄[J].三峡大学学报（自然科学版），2018，40（06）：101-103.

[2]李文东，侯金凤，王俊秋，等.硫酸卡那霉素及注射液有关物质高温型及低温型蒸发光检测器方法建立及比对[J].药物分析杂志，2018，38（09）：1530-1538.

[3]吴高松，王知斌，杨春娟，等.HPLC-ELSD法同时测定无梗五加果中3种3，4-裂环羽扇豆烷型三萜化合物的含量[J].中医药信息，2017，34（01）：36-39.

[4]王静文，龚旭昊，范强，等.HPLC-ELSD法联合UPLC-MS/MS法检测鱼腥草注射液中非法添加的庆大霉素[J].中国兽药杂志，2018，52（03）：45-51.

[5]徐以亮，陈盛君，钱大玮，等.基于HPLC-ELSD特征图谱及多元功效成分定量分析的炒酸枣仁配方颗粒质量标准研究[J].中药材，2017，40（08）：1864-1869.