河北省猪瘟流行情况的病原学检测及其免疫效果分析

刘艳平

（河北省滦平县农业农村局，068250）

1 前言

猪瘟(swine fever，SF)，又称古典猪瘟（classical swine fever，CSF）、“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的传染性疾病[1]。猪瘟传染源多是由猪瘟病毒感染的家猪、野猪，病发并没有显著的季节性，但是多发于寒冷、高温气候。猪瘟的发生，表现出非典型化的病症特点，在多地区表现出散发性流行的态势，其产生原因较为复杂，出现混合感染的情况较多，同时妊娠母猪带毒，存在着严重的繁殖障碍，且多是呈现出持续感染的情况，急性死亡案例较少。

2 河北省猪瘟流行情况的病原学检测

2.1 健康猪群猪瘟病原学调查

（1）调查材料。使用由美国IDEXX 公司生产的IDEXX CSFV Ab ELISA 试剂盒，开展猪瘟病毒检测工作，同时还需要使用到德国SIGMA 3-18K高速冷冻离心机，美国BIOTEK ELX405 全自动洗板机等器材[2]。

（2）检测方法。首先，从河北省生猪养殖产业发展状况、养殖规模、区域分布、养殖数量因素入手，通过随机分布，从河北省11 个地级市，42 个市辖区、20 个县级市、104 个县、6 个自治县设置出620 个猪瘟监测采样点。从生猪的养殖、屠宰到流通等全流程，都需要被纳入到监测范围之中。其次，按照安全的原则，采集猪群血样，作为监测样品，并贴好标签，保存在-20℃的环境下[3]。

（3）开展血清样品中的猪瘟病毒抗原检测工作。根据试剂盒中的说明书要求实施检测活动，标记好样品位置，将微量反应板取出，将50μL检测猪瘟单克隆抗体加入每孔中，同时还要做好相应的对照孔处理工作，确保阳性对照和阴性对照结果真实有效。在事先标记好的检测孔中，放好被检测样品，且每一个样品都需要更换吸头。在判断检测结果的过程中，主要是按照被检测样品的修正OD 值加以对比，当修正OD 值≤0.100，可以认为猪瘟病毒抗原显示为阴性；而如果修正OD 值＞0.300，则说明病毒呈现阳性。具体检测过程中，如果检测结果不在这两者范围内，即0.100＜修正OD 值≤0.300，就说明检测结果存在着一定的不准确性，需要开展重复检测工作，或者使用猪瘟病毒特异性方法予以有效确认。

（4）结果与分析。针对2013～2018年河北省猪瘟病原检测结果进行细致分析和统计，发现当地猪瘟病原阳性率呈现出了一定的下降趋势。其在5年间共检测猪瘟病毒病原学样品22361 份，检测出病原学阳性样品为751 份，整体阳性率为3.36%。期间整体的猪瘟防控形势表现出逐渐好转的情况，但是在2017年病原学阳性率出现了上升情况，表明河北省依然面临着严峻的猪瘟防控形势。

2.2 发病猪群猪瘟病原学调查与免疫抗体相关性分析

河北省部分养猪场发生了猪病现象，以高热稽留为显著特征，病猪的发病率和死亡率都较高。为有效检测出病猪血清中的免疫抗体，需要开展猪瘟病原学调查与免疫抗体相关性研究工作。本次研究过程中，主要是河北省病猪淋巴结、血清、扁桃体、肾脏、脾脏等多个组织部分采集样品，并保存在-20℃环境中。检测工作间进行中，需要针对组织样品进行处理，开展猪瘟病毒RNA提取工作。其中需要将已经处理好的样品开展对照工作，分别从阴性、阳性对照两种方式入手，将750μL Trizol 加入到相应的对照样品之中，并开展充分振捣工作，保持着20s 的时间。需要注意到的是，在晾干离心管中残余液体之后，将20μL RNA 溶解液，针对RNA 进行溶解，完成溶解之后，需要将其保存在-20℃环境中。针对河北省2018年上半年猪瘟病毒抗体阳性率统计情况进行分析，能够得出以下数据信息，结合猪瘟病原学调查与免疫抗体相关性的研究，能够得到一定的检测结果。实施猪瘟病毒抗原检测工作的过程中，将所有采集的病料，开展实时荧光RT-PCR检测工作，得到的结果为总阳性率为34.72%。而在猪瘟病毒抗体检测过程中，发现猪瘟病毒免疫抗体阳性，所得到的抗体阳性率为51.36%。

表1 河北省2018年上半年猪瘟病毒抗体阳性率统计情况

3 河北省猪瘟免疫效果的血清学评价

在实际检测工作间进行中，发现已经接受过猪瘟疫苗接种的猪群之中，还存在着一定的猪瘟病毒，有潜在的猪瘟隐患。想要针对猪瘟免疫抗体和猪瘟病原检出率之间的关系进行分析，需要强化猪瘟免疫抗体的检测工作，探讨其病原检出率情况。具体检测工作过程中，监测点、监测样品的选择和采集，都和上述病原学调查情况一致。检测结果显示，河北省猪瘟免疫抗体的合格率保持着持续上升的趋势，从2013年到2018年，免疫抗体合格率总体上生了10.42%。

4 分析和讨论

猪瘟这种动物疫病，拥有着较高的发病率和死亡率，将会给养殖业造成较大的经济损失，影响到当地的经济发展情况。口腔黏膜是猪瘟病毒传染的主要途径，大部分情况下，猪瘟潜伏期保持在1～10d 范围内。病猪初期主要是表现在了白细胞减少症、结膜炎情况，会给猪群造成较大的损伤。患病程度逐渐增加，表现出了较多临床症状，如便秘、中枢神经系统紊乱、腹泻方面，影响到病猪的生长情况。猪瘟病毒的传播性较高，大多通过直接接触的健康猪都会被受到感染，从血清、组织之中，开展酶联免疫吸附试验和荧光RT-PCR 试验工作，将能够检测出其中的猪瘟病毒抗原[4]。分析河北省猪瘟免疫效果的血清学情况，针对猪瘟病毒免疫效果不佳的原因进行分析，能够发现主要是由于：（1）猪群带毒。这种情况出现之后，将会导致垂直感染的情况出现，存在着恶性循环，仔猪在母猪的感染下存在猪瘟病毒。（2）免疫程序不够合理。养殖户在接种猪瘟疫苗之后，没有开展及时有效的免疫抗体检测工作，避免抗体效果不佳的情况。