一例由猪流行性腹泻病毒变异株引发仔猪腹泻的诊断与治疗

周 政

（湘潭县易俗河镇农技农机畜牧水产推广服务中心，湖南 湘潭 411228）

在生猪养殖过程中，仔猪腹泻是较为常见的临床疾病，其临床表现主要包括腹泻、消瘦和脱水等，1周龄内哺乳仔猪发病后死亡率可高达100%[1]。引起仔猪腹泻的病因有很多，其中猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）是较为常见的，可以引起仔猪腹泻，而猪德尔塔冠状病毒也是近期发现可以导致仔猪腹泻的新型冠状病毒[2]。PEDV感染仔猪后可导致病猪出现呕吐、水样腹泻、消瘦等临床症状，且伴发高死亡率[3-4]。但由于其临床症状与其它病毒性腹泻类似，临床和病理变化诊断无法确诊，需要借助实验室诊断技术对病因进行确诊，以进行针对性地治疗和防控。

2018年4月初，笔者所在的湖南省湘潭县某规模化养猪场暴发仔猪腹泻，10日龄内仔猪出现持续性水样腹泻、呕吐和极度消瘦的临床症状，排出粪便为黄色，后期为黑色且带有腥味的粪便，伴有极高的死亡率，养殖户使用多种抗菌药后仍然无效。最终确诊为PEDV变异株感染所引起，经过紧急处理措施后，疫情得到有效控制，疾病的诊断和治疗过程如下。

1 发病情况

2018年4月初，湘潭县易俗河镇某规模化猪场（存栏母猪100头左右）部分栏舍仔猪发生水样腹泻、食欲差等临床症状，养殖户以为是细菌性疾病感染所导致，故使用常规抗菌药物（恩罗沙星）对发病猪群进行治疗，但效果较差。在治疗期间，其它仔猪群也陆续发生较严重的腹泻，且7日龄内发病猪群死亡率接近100%。值得注意的是，该猪场其它发育阶段猪群未出现明显的临床症状，说明该猪场未发生繁殖障碍性传染病，如猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等。

2 临床症状与病理变化

通过对发病猪群临床症状进行观察，发病的猪群主要是仔猪和保育猪，病猪消瘦、腹泻、脱水和畏寒，在产床可见仔猪呕吐物和水样腹泻粪便。通过对死亡和濒临死亡的仔猪进行病理解剖，发现被解剖的仔猪均出现较为明显的病理变化，如猪小肠肠壁变薄、肠内有未消化的凝乳块，且内容物有腥臭味，但明显的病理变化主要集中在肠道，其它主要脏器未发生明显临床症状。

基于对猪群的发病特点、临床症状和病理变化的观察，我们初步判定该场猪群腹泻病可能是由于流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒或其它腹泻性病毒所导致。为了对发病原因进行确诊，我们将腹泻仔猪送至湖南农业大学动物医学院实验室进行病原诊断。

3 实验室病原诊断

将发病仔猪无菌解剖，取小肠内容物入无菌试管内，加入适合的灭菌PBS溶液后充分混匀，反复冻融3次后，4℃高速离心（13 000 r/min）5 min，取上清液按照试剂盒说明书提取DNA/RNA，逆转录后获得cDNA，应用RT-PCR技术对样品进行病原检测，发现为PEDV阳性（图1），猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒阴性。

图1 被检样品PEDV-N基因部分序列RT-PCR检测结果

为了确定该猪场暴发的PEDV毒株是否为变异株，我们挑选1个样品的S1基因高变区序列进行扩增与测序（图2），同时将获得的序列进行Blast分析。结果显示，扩增的PEDV毒株S1基因部分片段大小为1 503 bp；Blast分析结果显示，该毒株与GenBank收录的变异株相似性为97.3%~99.8%，与PEDV CV777疫苗株同源性较低，仅为93.6%，说明该猪场流行的PEDV为变异株。

图2 本次研究PEDV分离株S1基因部分序列RT-PCR扩增结果

4 治疗与防控

通过进一步对病原进行试验技术诊断，最终可以确诊为该猪场仔猪腹泻是由于PEDV变异株感染所引起，需要采取紧急的处理措施，以降低猪群的死亡率，减少养殖户的经济损失。

4.1 紧急疫苗接种

由于该猪场对猪群免疫接种的腹泻疫苗为“腹泻三联活疫苗”，其中PEDV疫苗株来源为CV777毒株，而该猪场发生的是PEDV变异株暴发，传统的CV777疫苗株对猪群提供保护力有限，而猪群若继发其它免疫抑制性疾病可导致免疫接种效果差，使猪群虽然接种基于CV777毒株研发的弱毒疫苗仍然暴发PED（猪流行性腹泻）。因此，我们选用武汉科前生物股份有限公司生产的“科泻宁（猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻二联灭活疫苗）”和“科腹净（猪传染性胃肠炎/流行性腹泻二联弱毒疫苗）”对猪群进行紧急接种免疫，这两种疫苗是基于PEDV变异株所进行研发的，对PEDV变异株的防控具有较好的效果。其具体免疫防控措施参考疫苗厂家提供建议进行。

4.2 有效的防控措施

对无法挽救的发病猪群进行扑杀并无害化处理，将发病初期的猪群和健康猪群进行隔离，并紧急免疫接种疫苗；对全场进行消毒和卫生清理，用不同消毒机制的消毒剂对猪舍地面、器具、垫料和运输车辆等进行定期消毒；对猪舍内的饲料和饮水等进行病原检测，确定无PEDV污染后方可进行饲喂或投饮；在饮水中加入适量的多维或食盐，提高猪群免疫力，或防止病猪腹泻而脱水死亡；在猪群的饲料中加入适量的抗生素（如阿莫西林），防止继发细菌性感染等。

该猪场严格实施以上免疫程序和防控措施后，笔者于10日后回访，该猪场PED疫情明显好转，仔猪的发病率和死亡率均下降。1个月后，猪场负责人表示猪场出现腹泻的案例较少，且腹泻的原因多是细菌感染所致，不是PEDV感染所引起。

5 小结与讨论

在生猪养殖过程中，仔猪易出现腹泻、发热等临床症状，若养殖户未及时干预和治疗，该病会迅速波及其它健康仔猪群，导致较高的发病率和死亡率，特别是由细菌或病毒所引起的疾病。导致仔猪腹泻的病因较为复杂，如细菌、寄生虫、病毒感染、天气变化和其它因素，但多为病原感染所导致，特别是病毒性感染，能导致仔猪腹泻的病毒多为PEDV等冠状病毒感染。猪流行性腹泻在我国分布广泛，且对养猪业危害严重，2010年以来我国学者从暴发猪流行性腹泻的猪场分离出的PEDV多为变异株，其基因组与PEDV CV777疫苗株存在很大的差异，使得部分猪场即使接种免疫了CV777弱毒疫苗仍然暴发流行性腹泻，并引起仔猪腹泻和大批量死亡，给猪场造成巨大经济损失[5-6]。因此，为有效防控猪流行性腹泻的发生与流行，猪场可选择基于PEDV变异株研发的弱毒疫苗或灭活苗对猪群进行免疫接种，若发生腹泻等临床症状，及时将病料样本送至专业实验室进行诊断，确定导致该病发生的原因，然后有针对性地治疗和进一步预防等。