沈阳地区高血压患者CYP3A5基因多态性与钙离子通道阻滞剂氨氯地平的相关性研究

王玉红，胡晓芳，刘 静

(北部战区总医院检验医学中心,辽宁沈阳 110016)

高血压病是一种好发于中老年人、发病趋势日益增高的一种心血管疾病。高血压是心力衰竭、心肌梗死、慢性肾病、糖尿病等非传染性疾病的重要危险因素，因此，预防和治疗高血压可使心血管疾病得发病率、病死率明显下降[1-2]。 近几十年来，我国人群高血压患病率居高不下且呈持续上升的趋势。调查表明，目前我国约有2亿高血压患者，即每10个成年人中就有2人患高血压，约占全球高血压人数的1/5[3]。氨氯地平是目前临床上高血压治疗的首选药物，但疗效存在明显的个体差异[4]。根据国内外的研究表明，超过33%的人群服用该药物疗效不达标，且有20%左右的人群服用该药物产生严重不良反应如面部潮红、脚踝水肿及心悸等导致终止用药。而国外多项研究证实此种个体化差异与患者的基因多态性是紧密相关的[5]。本文通过对沈阳地区1 182例高血压患者进行CYP3A5基因多态性检测结果，结合服用氨氯地平的疗效进行数据分析，探讨CYP3A5基因型对于氨氯地平降压疗效的预测，为今后高血压患者的个体化诊疗做出新的尝试。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究选取2016年1月至2017年12月就诊于北部战区总医院的1 182例高血压患者。其中男623例，女559例，平均年龄为(47.11±14.27)岁。纳入标准：符合年高血压防治指南的诊断标准即：收缩压≥140 mm Hg和(或)舒张压≥90 mm Hg；患者病情>3个月，所有患者均未行其他药物治疗。排除标准：通过询问病史及血液生化、心电图等其他辅助检查排除的继发性高血压以及由于其他疾病引起的高血压。本研究经过北部战区总医院伦理委员会批准，所有纳入患者均知情同意。采取患者清晨空腹外周静脉全血5 mL，2% 乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。

1.2仪器与试剂 Promega 全血DNA抽提试剂盒；湖南宏灏基因生物科技有限公司CYP3A5检测试剂盒(基因芯片法)；杭州博日FQD-916A型荧光定量PCR仪；博奥生物有限公司BioMixerTMⅡ核酸快速杂交仪；博奥生物有限公司SlideWasherTM洗片机；博奥生物有限公司LuxScan-10K/B微阵列芯片扫描仪。

1.3方法

1.3.1核酸提取 使用Promega全血DNA抽提试剂盒严格按照操作作业书提取全血核酸样本。300 μL全血样本中加入1 mL的细胞裂解液，室温孵育10 min后，2 000 ×g离心1 min，沉淀中加入核裂解液充分裂解后，加入蛋白沉淀液，清除溶液中的蛋白影响；2 000×g离心3 min，留取上清，加入至异丙醇溶液中抽提DNA样本；沉淀经洗涤后加入DNA溶液后留存。

1.3.2基因多态性检测 使用湖南宏灏基因生物科技有限公司CYP3A5检测试剂盒(基因芯片法)严格按照操作作业书依次进行目的片段扩增，杂交及芯片读取一系列过程。扩增条件为95 ℃预变性 1 min； 95 ℃ 15 s,60 ℃ 退火40 s,40个循环。

1.3.3治疗方案及疗效评价 高血压病患的筛选，根据《中国高血压防治指南(2017 年修订版)》对待选病患进行3次非同日坐位血压测量，每次重复两次取均值作为用药前血压值及入选标准。用药后血压监测，对患者采用氨氯地平5 mg每日1次，总疗程4周每隔两日按指南标准随访监测血压。疗效评价：按照新指南标准根据原卫生部颁发的《临床药物研究指导原则》，将疗效分为显效、有效、无效。显效:舒张压(DBP) 下降≥10 mm Hg 并达到正常范围(≤90 mm Hg)，或虽未降到正常范围，但已经下降≥20 mm Hg;有效:DBP 下降≤10 mm Hg，但已达到正常范围，或 DBP 下降10～19 mm Hg，但未达到正常范围，或为单纯收缩性高血压，收缩压(SBP)下降≥30 mm Hg;无效:未达到以上标准者[6]。

2 结 果

2.1CYP3A5基因多态性检测结果及分组结果 根据多态性检测结果分为AA型组、AG型组、GG型组，AA型组频率为89例(7.53%);AG型组频率为415例(35.11%);GG型组频率为678例(57.36%);每组中根据年龄划分为<65岁、65～<80岁和≥80岁，每组间男女比例及年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2血压监测结果及药物疗效评价 AA型组显著有效11 例，有效37例，无效41例，总有效率54%;AG型组显著有效50例，有效240例，无效125例，总有效率70%;GG型组显著有效130例，有效487例，无效61例，总有效率91%。从表1中显示出，无论什么年龄层次，在氨氯地平治疗后，血压均明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 氨氯地平治疗前后收缩压及舒张压变化

注：与治疗前比较，*P<0.05

3 讨 论

高血压严重威胁我国中老年人的身心健康。在临床治疗中，往往同种药物同种剂量，疗效存在较大差异，也就是说对于药物患者存在个体差异性[3]。所以对于这种个体化差异的机制研究，成为近年来高血压用药研究的热点，而随着基因检测及药物代谢机制研究的快速发展，基因指导的高血压个体化诊疗也日渐成熟起来[7]。

近年来越来越多的研究表明氨氯地平的药物疗效与P450(CYP)特别是CYP3A5的基因多态性紧密相关，P450(CYP) 是人体内药物代谢的主要酶，是一类主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶[8]。其中 CYP3A 为最大的一族，约占肝脏 CYP 总量的30%，参与大量内源性和外源性化合物的代谢。CYP3A5 参与了临床中 50% 以上常用药物的氧化、还原反应[9]。而氨氯地平的药物代谢及消除也正是和CYP3A5基因相关的，特别是CYP3A5多个突变等位基因中的第3个内含子中的6986 A→G单核苷酸多态性所影响表达的酶类，显著影响氨氯地平的代谢及血药浓度[10]。研究表明CYP3A5*3突变纯合子的mRNA表达水平显著野生型等位基因携带者，致使该酶活性缺失或降低，故其突变纯合子携带者有 CYP3A5 蛋白不表达个体的称呼[11]。由于CYP3A5 蛋白酶的缺失影响携带者氨氯地平的血药浓度致使携带CYP3A5*3*3突变纯合子的高血压患者服用氨氯地平的降压疗效显著优于野生型基因携带患者[12-13]。本研究选取沈阳地区1 182例高血压患者有关 CYP3A5 基因多态性与降压药疗效的相关的研究，结果发现在使用相同治疗用药方案的情况下患者经过基因检测分组GG基因型组降压效果最好，AG组次之，AA组较差，差异具有统计学意义(P<0.05)。说明CYP3A5基因多态性与氨氯地平的降压疗效有关。CYP3A5 基因多态性影响氨氯地平的血药浓度，研究表明 GG 型 氨氯地平浓度和活性最高，AA型最低，AG型居中。CYP3A5*3 等位基因携带者在氨氯地平的代谢过程中比 CYP3A5*1 携带者具有更高的血药浓度，氨氯地平可以充分发挥其降压作用。因此，在临床上对已经确诊的高血压患者，应该尽早进行CYP3A5基因多态性检测，以便选择合适的药物及药物剂量以便提高高血压患者的血压达标率，提高患者的生存质量。