LC-MS/MS法检测拉科酰胺原料中的对甲苯磺酸甲酯

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摘 要 目的：采用LC-MS/MS法对拉科酰胺原料中基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯进行检测。方法：采用 Agilent Eclipse XDB C18（2.1 mm×150 mm，3.5 mm.）柱，以5 mmol/L醋酸铵-0.1%甲酸为流动相A，甲醇为流动相B，梯度洗脱，流速0.4 ml/min。质谱采用多反应监测（MRM）模式，离子对m/z 204.0/91.1。结果：本研究建立的方法线性范围在2.5～100.0 ng/ml（R2=0.996），定量下限为2.62 ng/ml，日内和日间精密度良好（RSD<5%），加标回收率符合要求，24 h内溶液稳定性良好。结论：本方法灵敏度高、选择性好、样品前处理简单，可以满足拉科酰胺原料中痕量对甲苯磺酸甲酯的定量检测要求。

关键词 基因毒性杂质 对甲苯磺酸甲酯 拉科酰胺 LC-MS/MS

中图分类号：TQ460.72； O657.72 文献标示码：A 文章编号：1006-1533（2019）15-0116-04

Determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide by LC-MS/MS

SHU Shihui*， YAO Junliang， YIN Daquan

（Central Research Institute， Shanghai Pharmaceuticals Holding Co.， Ltd.， Shanghai 201203， China ）

ABSTRACT Objective： To establish an LC-MS/MS method for the determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide. Methods： Chromatography separation was performed on Agilent Eclipse XDB C18 column （2.1 mm×150 mm， 3.5 mm） with gradient elution at speed 0.4 ml/min. Mass spectrometry was performed using multiple reaction monitoring （MRM） mode and ion pair m/z 204.0/91.1. Results： The linear range of methyl p-toluenesulfonate was at 2.5-100.0 ng/ml （R2=0.996） with a lower limit of quantitation of 2.62 ng/ml. The RSD of the recovery results obtained from intra- and inter-day precision study were less than 5%. The percentage recovery in drug samples was within the accepted range. The sample solution showed good stability within 24 h. Conclusion： This method has high sensitivity， good selectivity and simple sample preparation and is suitable for the quantitative determination of methyl p-toluenesulfonate in lacosamide drug substances.

KEy WORDS genotoxic impurity； methyl p-toluenesulfonate； lacosamide； LC-MS/MS

拉科酰胺是一种新型N-甲基-D-门冬氨酸受体甘氨酸结合位点拮抗剂，它主要用于治疗癫痫和神经性疼痛。由于拉科酰胺原料在工艺过程中使用了对甲苯磺酸和甲醇，反应过程中可能会生成对甲苯磺酸甲酯（p-toluenesulfonate，PTSM），而对甲苯磺酸烷基酯一直被视为潜在基因毒性杂质，这些物质可与DNA发生烷基化反应，从而可能成为癌癥的诱因。近些年来，各国药品监管机构对于基因毒性杂质的管控要求是逐年提高，EMEA（欧洲药品管理局）以及ICH相继颁发了基因毒性杂质研究相关技术指导原则[1-2]。由于对潜在基因毒性杂质进行研究已成为申报文件的重要一环，因此，必须对拉科酰胺原料中的PTSM予以监控。

目前，对甲苯磺酸酯类杂质在其他药品中的残留虽已有用液相色谱[3]、气质联用 [4-5]和液质联用技术 [6-9]进行测定的报道，但拉科酰胺原料中磺酸酯类基因毒杂质的分析尚未见有研究。众所周知，样品基质对痕量杂质测定具有非常显著的影响，因此，很有必要对此类基因毒杂质在拉科酰胺原料中的残留量进行仔细的研究。本研究尝试采用HPLC-MS/MS法多反应监测（MRM）模式测定拉科酰胺原料中痕量PTSM，旨在建立灵敏度高、选择性好、操作简单的定量检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

1200高效液相色谱仪、6460 串联质谱仪（美国Agilent公司）； CPA225D电子天平（德国Sartorius公司）；Advantage A10纯水仪（美国Milli-Q公司）。

1.2 试药

拉科酰胺原料（自制，批号119-38、119-39、100-100、100-101、100-110、100-117、100-124）；PTSM对照品（百灵威公司，纯度98%，批号 LU70L01）；甲酸（阿拉丁试剂（上海）有限公司，色谱纯，批号J1529047）；甲醇（美国Merck公司，色谱纯，批号1749207435）；水为自制高纯水。