紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量

2019-09-23韦林洪

扬州职业大学学报 2019年2期

韦林洪, 张军, 刘俊

(扬州职业大学, 江苏扬州 225009)

氯霉素滴眼液主要用来治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等敏感细菌引起沙眼、结膜炎、眼睑缘炎、角膜炎等。其主要成分为氯霉素,辅料为硼酸、硼砂、醋酸苯汞、注射用水等,其含量测定的主要方法有微生物检定法[1]、紫外分光光度法[2]、高效液相色谱法[3-4]等。微生物检定法的测定原理与临床应用的要求一致,利用氯霉素能够抑制细菌生长的特点来进行含量测定,具有灵敏度高、样品用量少、测定结果直观等优点,但存在操作繁琐、测定时间长、对实验操作人员的操作技能要求较高、实验误差大等缺点，限制了其应用[5]。2010版和2015版《中国药典》均采用高效液相色谱法测定其含量,在系统适用性试验符合要求后,采用梯度洗脱法测定样品中氯霉素的含量,该法分离效果好、准确度高,但实验操作繁琐,需要熟练的操作人员,且难以满足医院和药厂快速测定其含量的需要。文献报道的紫外分光光度法未进行方法学考察,本文采用紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量,并对分析方法的准确度、精密度和专属性等质量指标进行考察。

1 仪器、试剂和溶液的制备

1.1 主要仪器

T6紫外分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司;AR2140电子天平,上海梅特勒公司。

1.2 主要试剂

氯霉素对照品(批号17010720,纯度≥98.0%),江苏绿叶生物科技有限公司;氯霉素滴眼液(8mL∶20mg,批号20171101、20171104、20171108),长春迪瑞制药有限公司;95%乙醇、硼酸、硼砂、醋酸苯汞、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸(以上均为分析纯),国药集团化学试剂有限公司;纯化水,Milli-Q净化系统(美国Millipore公司)。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备

用分析天平精确称取于105℃干燥至恒重的氯霉素对照品0.2502g,置于100mL容量瓶中,加入95%乙醇10mL,振摇使其完全溶解,然后用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液,备用。

1.3.2 供试品溶液的制备

准确吸取氯霉素滴眼液0.5mL于100mL的容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到供试品溶液,备用。

1.3.3 空白辅料溶液的制备

根据氯霉素滴眼液处方规定,分别称取7.5g硼酸、1.5g硼砂和0.01g醋酸苯汞于1000mL容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀。精密量取0.5mL置于100mL的容量瓶中,用纯化水定容,摇匀,得到空白辅料溶液,备用。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择

精密量取0.6mL浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液和0.5mL氯霉素滴眼液分别置于100mL的容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀。以纯化水为空白,分别将氯霉素对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液在200～400nm波长范围内扫描,氯霉素对照品溶液和供试品溶液在278nm处有最大吸收,而空白辅料溶液在该波长处的吸光度趋于零,因此,选择278nm作为测定波长。

2.2 标准曲线的测绘

精密量取浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL分别置于100mL容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到浓度分别为2.5、5、10、15、20μg·mL-1的系列对照品溶液。以纯化水为空白,在278nm波长处测定吸光度,以氯霉素对照品溶液浓度C(μg·mL-1)为横坐标,以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线,见图1。