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头孢克肟聚合物检查方法建立

2019-09-10周家莉

昆明医科大学报 2019年2期

周家莉

摘要:本文建立了头孢克肟聚合物检查方法,采用TSK gel G2000SWxl凝胶色谱柱。本方法中,头孢克肟浓度在0.02μg/ml~32.40μg/ml范围内,与峰面积线性关系良好,线性方程为y=29153x-2740,r为0.9995,方法精密度、耐用性均良好。

关键词:头孢克肟 聚合物 方法学

【中图分类号】-3 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306(2019)02-012-03

Development of an analysis method for cefixime polymer

Zhou Jiali

Tianjin Vocational College Of Bioengineering 300000

Abstract: This study developed an analysis method for determination of cefixime by using TSK gel G2000SWxl column. In a range of 0.02 ug/mL to 32.40 ug/mL, the concentration is linear to the peak area, with y=29153x-2740, and r=0.9995. The accuracy and robustness of this method are very good.

Key words: cefixime, polymer, analysis method

头孢克肟(Cefixime)为口服用的第三代头孢菌素类抗生素,适用于治疗敏感菌所致的呼吸、泌尿和胆道等部位的感染。头孢克肟对革兰阴性杆菌产生的β-内酰胺酶高度稳定,对革兰阴性杆菌抗菌作用强于第一代和第二代头孢菌素,对革兰阳性球菌抗菌作用不如第一代和第二代头孢菌素。目前国家食品药品监督管理局批准的头孢克肟制剂有片剂、胶囊剂、分散片、干混悬剂和颗粒剂等多种剂型,均为处方药。

2015版《中国药典》未收载头孢克肟及其制剂的聚合物检查控制方法。《日本药局方(JP)》中收载有头孢卡品酯的聚合物控制,[1]采用以苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基础的TSK gel G2000色谱柱,国内亦有文献报道采用苯乙烯为填料的TSK gel G2000SWxl色谱柱,控制注射用头孢地嗪钠等品种中聚合物的含量。本文拟定参照文献《高效液相色谱法测定注射用头孢地嗪钠有关物质Ⅱ(聚合物)及其方法学研究》[2]中聚合物测定方法测定头孢克肟中的聚合物含量,并对该方法进行了详细的方法学验证。

1聚合物检查方法与仪器设备

1.1方法:高效分子排阻色谱法(HPSEC,中国药典2015年版四部通则0514)

1.2仪器设备:色谱柱:凝胶色谱柱(TSK G2000 SWXL )

检测器:紫外检测器;

1.3色谱条件:

流速:1.0ml/min

流动相:0.005mol/L磷酸盐缓冲液[0.005mol/L磷酸氢二钠溶液-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39),以磷酸调节pH值至7.0]-乙腈(93:4)

0.1mol/L磷酸盐缓冲液:取无水磷酸氢二钠1.9g,磷酸二氢钾0.9g,加水溶解并稀释至200ml,混匀。

供试品溶液:称取本品约25mg,精密称定,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液2ml使溶解,用水稀释成0.5mg/ml的供试品溶液;

对照品溶液:称取头孢克肟对照品约25mg,精密称定,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液2ml使溶解,用水稀释成0.5mg/ml的对照品溶液。

1.4頭孢克肟对照品:中国食品药品检定研究院

头孢克肟胶囊:市售品A、市售品B、市售品C

2聚合物检查方法学验证

2.1系统适用性试验

精密量取上述供试品溶液、对照品溶液及空白溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,试验结果如下。

结论:上述结果显示,供试品色谱图中,本品主成分与主成分峰前的聚合物之间分离度符合规定,空白溶剂不干扰主成分峰及聚合物峰的检测;对照品色谱图中各色谱参数符合要求,本方法系统适用性良好。

2.2耐用性试验

取本品,照拟定聚合物检查法,于不同柱温、不同流速、不同流动相比例、不同流动相缓冲液pH值条件下进行测定,以考察方法的耐用性,试验条件及检测结果见下列表格。

结论:由上述结果可知,本品在拟定的色谱条件下,柱温、流速、流动相比例略有波动或不同型号的高效液相色谱仪检验本品,聚合物检出情况及各色谱参数均无明显差异,方法对上述条件耐用性良好。

2.3仪器精密度试验

按拟定配制方法配制对照品溶液,精密量取20μl,连续测定6次,试验结果如下

结论:本方法检查本品中的聚合物,对照品溶液连续测定6次,峰面积RSD均小于5.0%,保留时间RSD均小于2.0%,仪器精密度符合要求。

2.4灵敏度试验

取头孢克肟对照品适量,配制灵敏度试验溶液,以信噪比约为3:1计算检测限,信噪比约为10:1计算定量限。

结论:本方法用于检测头孢克肟中聚合物含量时,灵敏度符合规定。

2.5线性试验及范围

取头孢克肟对照品适量,精密称定,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液适量溶解,并用水定量稀释制成定量限浓度至相当于供试品溶液浓度5.0%系列的样品溶液,作为线性考察溶液。分别精密量取各溶液20μl,照聚合物检查方法检查,记录色谱图,结果如下。

结论:本方法用于本品聚合物检查,头孢克肟浓度在0.02μg/ml~32.40μg/ml范围内,与峰面积线性关系良好,线性方程为y=29153x-2740,r为0.9995。

2.6溶液稳定性试验

按拟定方法配制供试品溶液及对照品溶液,均于室温条件下放置,分别于各考察时间点精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,检测结果如下。

结论:上述结果表明,本方法检查本品中聚合物时,各聚合物峰面积会随着时间推移而发生变化,拟定供试品溶液配制方法为临用前新制;对照品溶液室温放置12小时内稳定,对照品溶液可于该时限内重复使用。

2.7样品聚合物检查

采用聚合物检查方法,对本品中试规模三批样品进行聚合物检查,结果见下表。

结论:本方法用于市售品头孢克肟聚合物检查,方法灵敏、简单。

3聚合物方法学验证结果总结

4讨论

4.1在方法学研究中,使用了同一牌号的不同批号色谱柱进行试验,发现不同批号色谱柱初始使用的分离度、理论板数均有很大差异,有的批号分离度甚至不能符合要求,但是将不符合要求的色谱柱放置一段时间后再用,色谱系统性能明显提升,可满足分析需求。

线性和范围 头孢克肟浓度在0.02μg/ml~32.40μg/ml范围内,与峰面积线性关系良好,线性方程为y=29153x-2740,r为0.9995

4.2本方法使用的色谱柱,使用后需按说明书方法进行冲洗后保存,否则柱效易下降;保存宜在阴凉处。

4.3本方法仅针对头孢克肟聚合物进行研究,亦可用于头孢克肟制剂聚合物的研究。

参考文献

[1]JP XVII Official Monographs P612 Cefcapene Pivoxil Hydrochloride Hydrate

[2]周丽君,陈亮等. 高效液相色谱法测定注射用头孢地嗪钠有关物质Ⅱ(聚合物)及其方法学研究. 安徽医药 2011 May;15(5)