日照市规模牛羊场O型口蹄疫免疫效果监测分析

韩 勇 李 英 刘玉洁

1.山东省日照市畜牧兽医管理服务中心，山东日照276800；

2.山东省五莲县畜牧兽医管理服务中心叩官畜牧兽医站，山东五莲262300

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性的传染病，主要感染猪、羊、牛等动物，尤其以牛、羊发病率为多。本病具有流行性快、传播广、发病急、危害大等流行病学特点。病畜和带毒畜是主要的传染源，它们既能通过直接接触传染，又能通过间接接触传给易感动物。口蹄疫发生有严格的季节性，它可以发生在全年的任何月份[1]。

目前，我国主要采取以免疫注射为主的综合性防控措施来预防和控制口蹄疫。通过免疫监测，可以及时了解口蹄疫免疫后的效果，准确掌握疫情动态，根据免疫抗体水平科学地进行综合免疫预防，以便预测疫病的动态，控制疫病的发展。为此，日照市动物疫病预防控中心在全市牛羊场进行随机抽样，开展免疫效果监测，以掌握全市牛羊场O 型口蹄疫抗体水平。

1 材料与方法

1.1 试验时间、地点

本试验研究于2019年7月7—10日在日照市动物疫病预防控中心进行。

1.2 血清样品

为配合日照市春季防疫检查工作，进行牛羊口蹄的免疫效果监测，日照市动物疫病预防控制中心于2019年6月下旬对全市4 个区县共8 家规模化牛羊场进行了抽样检测，共抽查240 份血清。

1.3 检测试剂

O 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 试剂、标准阳性血清和标准阴性血清均购自中国农业科学院兰州兽医研究所，生产批号为20190610101-1。

1.4 仪器设备

MultIIskan GO 酶标仪，美国赛默飞（Thermo-Fisher）公司；GZX9140 恒温培养箱，上海博迅公司；移液器，德国赛多利斯（Sartorius）公司。

1.5 口蹄疫抗体的检测

1）抗原抗体反应：在U 型血凝板上将待检血清从1∶16 倍比稀释至1∶128，然后每孔加稀释的病毒抗原50 μL，封板，4 ℃过夜。

2）ELISA 板洗5 次，将抗原抗体混合物50 μL移至ELISA 板上，37 ℃1 h。

3）洗5 次，加入50 μL 豚鼠抗血清，37 ℃30 min。

4）洗5 次，加入50 μL 酶结合物，37 ℃30 min。

5）洗5 次，加入50 μL 底物，37 ℃15 min。

6）加入50 μL 终止液，立即在波长450 nm 处读取光吸收值（OD 值）。

7）结果判定：阳性对照效价≥1∶（1 024±1），阴性对照效价≤1∶8。临界值=抗原对照OD 值/2。被检样品大于临界值为阴性，小于临界值为阳性。

2 牛羊O 型口蹄疫检测结果

O 型口蹄疫抗体检测结果见表1。由表1可见，血清检测240 份，免疫合格220 份，抗体总体合格率91.7%。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分别为100.0%、83.3%和75.0%。

表1 O 型口蹄疫抗体检测结果

3 讨 论

3.1 检测总体情况分析

抽检了全市4 个区县8 家规模化牛羊场，其中奶牛场5 家，肉牛场1 家，羊场2 家。样品共240份。从检测结果来看，O 型口蹄疫总体免疫合格率为91.7%，符合国家要求。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分别为100.0%、83.3%和75.0%。

3.2 抗体水平差异原因

奶牛的抗体水平最高，免疫合格率达到100%，这是因为奶牛生长周期长，一般经过多次免疫，抗体水平普遍高。肉牛和羊由于饲养周期短，仅免疫1～2 次，抗体水平明显低于奶牛。

3.3 疫苗免疫效果分析

通过养殖户了解到有些动物群体在接种疫苗后的整体状况较差，对疫苗的刺激反应比较大。表明不同个体即使是相同的免疫程序，所产生的免疫效果也不一样，主要与群体先天状况和养殖场环境、饲养管理水平有关。

3.4 口蹄疫液相阻断ELISA 试验分析

所采取的口蹄疫液相阻断ELISA 试验，不仅能判定口蹄疫抗体的阴阳性，还能判定口蹄疫抗体的滴度，从而可以根据滴度制定科学的免疫程序。口蹄疫液相阻断ELISA 试验检测1 个样品可以设计4～8 个滴度，而1 个ELISA 板只能检测10～20 个样品，成本较高[2]。因此，实验室可以根据具体的实际情况，自行设计布局，增加检测样品数量。

目前，日照市进行免疫的猪口蹄疫疫苗主要有2 种，一是口蹄疫O 型灭活苗，二是口蹄疫合成肽疫苗。在进行口蹄疫免疫抗体检测时，对猪免疫口蹄疫合成肽疫苗，要使用专门的口蹄疫合成肽ELISA 试剂盒进行检测，不能使用液相阻断ELISA 试剂盒。