人干扰素诱导蛋白10及趋化因子受体3在儿童难治性支原体肺炎患者中的表达及意义

张中兴

（河南省舞阳县人民医院 儿科，河南 舞阳 462400）

肺炎支原体被认为是年轻人和儿童社区获得性肺炎中最重要的病原体之一。肺炎支原体引起支原体肺炎，也称为非典型肺炎，已被许多医生证实有不同的临床特征［1］，占社区获得性肺炎（community acquired pneumonia, CAP）的7%～20%。5 岁以下的儿童通常伴有轻度上呼吸道症状，而年龄较大的患有支气管肺炎儿童和青少年则需要住院［2］。肺炎支原体肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia,MPP）的症状与促炎细胞因子的诱导有关。促炎性细胞因子介导的组织损伤包括细胞内定位、直接细胞毒性和炎症反应激活，并在肺炎的发病机制中发挥重要作用［3］。可以说肺炎支原体诱导的过度炎症反应在CAP 的发病机制中发挥重要作用，包括难治性肺炎支原体肺炎。人干扰素诱导蛋白10（interferon-inducibleprotein 10,IP-10）是一种经典的γ-干扰素（interferon-γ, IFN-γ）诱导型趋化因子受体3（CXC-chemokine receptor 3,CXCR3）配体，是一种多功能趋化因子。其生理活性表现为受体CXCR3 通过从脾脏或骨髓中募集嗜中性粒细胞或T 细胞来调节组织炎症，以启动获得性免疫应答［4］。然而，关于难治性支原体肺炎诱导IP-10、CXCR3 表达的报道很少。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择对象为2015年1月至2019年1月在本院接受治疗的支原体肺炎患儿，所有患儿均符合支原体肺炎的诊断标准，其中难治性支原体肺炎患儿临床表现以及胸部影像学加重，大环内酯类抗生素应用1 周以上无好转。排除慢性肺疾病、呼吸道感染以及心肝肾疾病的患者，排除临床资料不全的患者。依据诊断标准将患儿分为两组，支原体肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia,MPP）组患儿120 例，男80 例，女40 例；年龄6～12 岁，平均（9.12±1.53）岁；难治性支原体肺炎（refractory mycoplasmal pneumoniae pneumonia,RMPP）组40 例，男26 例，女14 例；年龄6～12 岁，平均（9.15±1.48）岁；两组患儿性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究前均经患儿家属知情同意，并经院伦理委员会批准。

1.2 治疗方法

所有患儿均接受大环内酯类抗生素、阿奇霉素序贯治疗，RMPP 组加用糖皮质激素、丙种球蛋白，治疗前、治疗7 d 后抽取患儿空腹血5 ml，Perocll 非连续密度梯度离心法分离中性粒细胞。

1.3 实时荧光定量聚合酶链式反应检测IP-10 及CXCR3 水平

实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测IP-10 及CXCR3 水平，采用Trizol 提取中性粒细胞RNA，测定纯度，并逆转录生成cDNA。PCR采用20 μl 的反应体系，其中2×SYBR®Premix Ex-Taq II 10 μl，上游（10 μmol）和下游（10 μmol）各0.5 μl，cDNA 1 μl，PCR 级高纯水8 μl。采用ABI7500 型实时荧光定量PCR 仪（美国Applied Biosystems 公司）进行基因扩增，引物序列由上海英骏公司提供。IP-10（BM955683.1）上游序列：5'-GAATTTGGGCCCCTTGGGAG-3'，下游序列：5'-AGTGGATGTTCTGACCCTGC， 产物 199 bp；CXCR3（NM_001504.2） 上 游 序 列 ： 5'-TACATGCACTGCTGCCTCAA-3'，下游序列：5'-AGTCAGACTGTGGGCGAAAG-3'， 产物225 bp；β -actin（NM_001101.5） 上 游 序 列 ： 5'-CTTCGCGGGCGACGAT-3'， 下游序列： 5'-CCACATAGGAATCCTTCTGACC-3'，产物104 bp。采用相对定量2-△△Ct法比较目的基因水平。

1.4 肺功能指标

应用德国耶格公司肺功能检测仪检测用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、第1 秒用力呼气容积（forced expiratory volume in one second,FEV1）及最大呼气流量（peak expiratory flow,PEF）。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0 统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，采用Pearson 进行相关性分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般临床资料比较

两组患者的性别、年龄、肺部啰音及咳嗽等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）；RMPP 组患儿的高热人数明显高于MPP 组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组肺功能指标比较

RMPP 组患儿的FVC、FEV1 及PEF 水平明显低于MPP 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 两组IP-10 及CXCR3 水平比较

RMPP 组患儿的IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明显高于MPP 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.4 RMPP 组患儿治疗前后肺功能以及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比较

治疗后，患儿的FVC、FEV1、PEF 水平明显升高，而IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

2.5 IP-10 和CXCR3 与肺功能相关性

IP-10 与FVC、FEV1、PEF 水平呈现负相关（r=-0.512、-0.473、-0.439）；CXCR3 与FVC、FEV1、PEF 水平呈现负相关（r=-0.409、-0.398、-0.432）。

表2 两组肺功能指标比较（±s,L）

表2 两组肺功能指标比较（±s,L）

组别MPP组RMPP组t值P值例数120 40 FVC 87.12±4.68 75.12±5.89 13.130 0.000 FEV1 89.35±4.86 76.35±5.26 14.351 0.000 PEF 81.22±4.37 65.27±3.82 20.600 0.000

表3 两组IP-10 及CXCR3 水平比较（±s）

表3 两组IP-10 及CXCR3 水平比较（±s）

组别MPP组RMPP组t值P值例数120 40 IP-10 1.52±0.35 2.44±0.45 15.050 0.000 CXCR3 2.07±0.52 2.98±0.74 8.865 0.000

表4 RMPP 组患儿治疗前后肺功能及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比较（±s）

表4 RMPP 组患儿治疗前后肺功能及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比较（±s）

组别治疗前治疗后t值P值例数40 40肺功能FVC/L 75.12±5.89 90.38±6.24 11.248 0.000 FEV1/L 76.35±5.26 91.57±6.88 11.289 0.000 PEF/L 65.27±3.82 90.25±6.17 13.269 0.000 IP-10 2.44±0.45 2.11±0.38 3.544 0.001 CXCR3 2.98±0.74 2.15±0.65 5.330 0.000

3 讨论

近年来，越来越多的难治性或严重甚至致命的肺炎支原体感染病例被报道。在现有的研究中，患有RMPP 的儿童的住院时间和发热持续时间较长［5］。最近的一项研究表明，大环内酯类抗药性肺炎支原体可导致临床难治性肺炎，并进一步发展为严重和复杂的肺炎。加用糖皮质激素治疗严重的RMPP 通常具有显著的有益效果［6］。因此，为了有效预防疾病的进展，早期诊断和筛查儿童严重的RMPP 对儿科医生来说非常重要，并可以及时治疗，包括选择抗生素和使用糖皮质激素。

一些临床指标有助于诊断严重的RMPP。一般而言，严重RMPP 可能伴有胸腔积液，而且发热持续时间延长，并出现不应性［7］。据报道，与没有胸腔积液的患者相比，胸腔积液的MPP 患者可能具有更严重的MPP 形式［8］。其机制尚不清楚，一个可能的原因是由免疫异常引起的炎症反应［9］。实验室检查结果显示，严重MPP 患者的C-反应蛋白和乳酸脱氢酶水平升高。然而，这些指标对于严重的MPP 是非特异性的［10］。尽管早期诊断对于避免延迟有效治疗非常重要，但基于这些，在儿童疾病早期仍然很难区分MPP 和难治性的MPP。许多研究表明，过度炎症反应在RMPP 中起重要作用。IP-10 是一种经典的IFN-γ 诱导型CXCR3配体，是一种多功能趋化因子［11］。而CXCR3 属于G 蛋白偶联受体家族，为常见的趋化因子受体，能与趋化因子IP-10 特异性结合，介导趋化因子效应［12］。本研究中，RMPP 组患儿的IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明显高于MPP 组，这可能与患儿的免疫异常有关，尤其RMPP 组患儿的免疫异常更加严重，并导致IP-10 及CXCR3 mRNA 水平异常增加。

本研究中，RMPP 组患儿的FVC、FEV1 及PEF 水平明显低于MPP 组，这也证实RMPP 组患儿的肺功能更差。而RMPP 组患儿接受糖皮质激素、丙种球蛋白治疗后，FVC、FEV1 及PEF 水平明显增加，这也说明RMPP 患儿经过糖皮质激素、大环内酯类抗生素治疗后，体内的炎症可以得到较好的控制，并进一步改善患儿的肺功能。通过相关性分析显示，RMPP 组患儿的IP-10 及CXCR3 水平分别与FVC、FEV1、PEF 水平显示负相关，这说明IP-10 及CXCR3 水平在一定程度上能反映患儿的炎症程度，并进一步展现肺功能，可以将其作为反映患儿炎症严重程度的重要指标。