猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗保存期试验

梁宛楠，陈丕坤

（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

猪细小病毒病与伪狂犬病是危害全球养猪业的三种重要传染病，分别是由猪细小病毒（PPV）和伪狂犬病毒（PRV）。目前这两种传染病在猪场的发生率较高，给养猪业带来了巨大的经济损失。因此，为了预防和控制这些疾病，安全、高效的疫苗是最主要的解决途径。本研究试制的猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗是一种含有猪细小病毒L株抗原和猪伪狂犬病毒H株抗原的油乳剂灭活疫苗。取试制的3批灭活疫苗，制备后立即置于2～8 ℃冰箱保存，分别于保存后的3、6、9、12 和15 个月，按照现行《中国兽药典》要求进行疫苗的物理性状及无菌检验；按照拟定的质量标准进行疫苗的效力检验，来确定疫苗的保存期，为养殖户可以应用到安全、高效的疫苗提供保证。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 试制疫苗

猪细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗，批号：201601、201602和201603。

1.1.2 试验动物

体重＞350 g、猪细小病毒HI 抗体效价≤1:8 的豚鼠；体重10～20 kg、猪伪狂犬病毒中和抗体阴性的断奶仔猪，

1.2 试验方法

1.2.1 疫苗物理性状检验

按现行《中国兽药典》附录的规定进行灭活疫苗的外观、剂型、黏度和稳定性检验，应符合要求。

1.2.2 无菌检验

按现行《中国兽药典》附录的规定进行检验，应符合规定。

1.2.3 效力检验

按照拟定的《猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗（L株+H株）质量标准》（草案）的要求进行疫苗的效力检验。每批疫苗抽检3 瓶，经充分混合后，对试验动物进行免疫。

猪细小病毒：每批疫苗在保存3、6、9 个月时接种豚鼠5 只，在保存12、15 个月时，接种豚鼠10 只，剂量0.5 mL·只-1，观察28 d，连同条件相同的对照豚鼠3 只，采血，测定血清中HI 抗体效价。

猪伪狂犬病毒：每批疫苗在保存3、6、9、12、15个月时，接种10～20 kg、猪伪狂犬病毒血清中和抗体阴性的猪5 头，剂量3 mL·头-1，观察28 d，连同条件相同对照猪3 头，采血，测定猪伪狂犬病毒血清抗体中和指数。

1.2.4 研究指标

按下述标准判定保存的疫苗是否合格。合格：疫苗物理性状符合拟定的《猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗（L株+H株）质量标准》（草案）的规定；疫苗无细生长；接种豚鼠的猪细小病毒HI 抗体效价≥1:64，接种猪的血清中和指数≥316。不合格：达不到上述标准的疫苗判为不合格。

2 试验结果

2.1 物理性状检查结果

在疫苗于2～8 ℃保存后的3、6、9、12和15个月，检查保存疫苗物理性状，检验结果见表1。

表1 猪细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗保存期试验物理性状检查结果

2.2 无菌检验结果

在疫苗于2～8 ℃保存后的3、6、9、12和15个月，按照现行《中国兽药典》附录进行无菌检验，结果见表2。

2.3 效力检验结果

2.3.1 猪细小病毒

以不同保存时间的疫苗，每批疫苗各取3瓶混合后接种豚鼠5只，肌肉注射0.5 mL·只-1，于注射疫苗后28 d，连同4 只对照豚鼠一起采血进行检测，血清中猪细小病毒HI 抗体效价测定结果见表3。

由表3 可知，疫苗经不同时间保存后测定，3批疫苗接种豚鼠后，能引起良好的免疫反应，HI抗体效价均＞1:64。

表2 猪细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗保存期试验无菌检验结果

表3 猪细小病毒血清HI抗体效价测定结果

2.3.2 猪伪狂犬病毒

以不同保存时间的疫苗，每批疫苗各取3瓶混合后接种猪5头，颈部肌肉注射，3 mL·头-1，于注苗后28 d，连同对照猪10 头一起采血，检测血清中和抗体指数，结果见表4。

由表4 可知，疫苗在2～8 ℃条件下、经过不同时间保存后测定，3批疫苗接种猪后，均能引起良好的免疫反应，血清中和抗体指数均＞316。

4 结 论

猪细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗在2～8 ℃保存12个月物理性状及无菌检验均未发生变化，效力检验合格。