乳腺癌中Ulk1过表达与患者TNM分期和癌症复发的关系研究

韩赫林　李义强　崔格格　谭添

【摘要】 目的：探討乳腺癌中Ulk1过表达与患者TNM分期和癌症复发的关系。方法：选取2013年3月-2015年5月在本院治疗的乳腺癌患者196例，根据TMN分期分为T1期94例、T2期42例、T3期36例、T4期24例，检测并观察不同分期患者的Ulk1蛋白表达及阳性率，分析Ulk1蛋白表达与临床病理特征的关系、乳腺癌患者癌症复发因素。结果：T1期Ulk1蛋白表达均高于T2、T3、T4期，T2期Ulk1蛋白表达均高于T3、T4期，T3期Ulk1蛋白表达高于T4期，差异均有统计学意义（P<0.05）;T1、T2、T3、T4期患者Ulk1阳性率逐渐降低（P<0.05）;Ulk1蛋白表达与年龄无关（P>0.05），分化程度越高、浸润深度越深、有淋巴血管间隙浸润、有淋巴结转移，Ulk1蛋白阳性表达率越低（P<0.05）;有淋巴结转移、有淋巴血管间隙浸润是乳腺癌患者癌症复发的危险因素（OR=4.20、5.02，P<0.05），Ulk1蛋白表达阳性是乳腺癌患者癌症复发的保护因素（OR=0.48，P<0.05）。结论：Ulk1蛋白在乳腺癌的发生进展过程中起抑制作用，TNM分期越高，Ulk1蛋白阳性率越低，Ulk1蛋白表达阳性是乳腺癌患者癌症复发的保护因素。

【关键词】 乳腺癌; Ulk1; TNM分期; 癌症复发

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between Ulk1 overexpression in breast cancer and TNM staging and cancer recurrence.Method：A total of 196 patients with breast cancer in our hospital from March 2013 to May 2015 were selected.According to TMN stage，they were divided into 94 patients with T1 stage，42 patients with T2 stage，36 patients with T3 stage and 24 patients with T4 stage.The expression and positive rate of Ulk1 protein in patients with different stages were detected and observed，the relationship between Ulk1 protein expression and clinicopathological characteristics and the recurrence factors of breast cancer were analyzed.Result：The expression of Ulk1 protein in stage T1 was higher than those of stage T2，T3 and T4，the expression of Ulk1 protein in stage T2 was higher than those of stage T3 and T4，and the expression of Ulk1 protein in stage T3 was higher than that of stage T4，the differences were statistically significant（P<0.05）.The positive rate of Ulk1 in patients with stage T1，T2，T3 and T4 decreased gradually（P<0.05）.The expression of Ulk1 protein was not related to age（P>0.05），the higher the differentiation degree，the deeper the infiltration depth，the infiltration of lymphatic vessel space and lymph node metastasis，the lower the positive expression rate of Ulk1 protein（P<0.05）.Lymph node metastasis and lymphatic interstitial infiltration were risk factors for cancer recurrence in breast cancer patients（OR=4.20，5.02，P<0.05），positive expression of Ulk1 protein was a protective factor for cancer recurrence in breast cancer patients（OR=0.48，P<0.05）.Conclusion：Ulk1 protein inhibits the occurrence and progression of breast cancer，the higher TNM stage，the lower the positive rate of Ulk1 protein，the positive expression of Ulk1 protein is a protective factor for cancer recurrence in breast cancer patients.

【Key words】 Breast cancer; Ulk1; TNM stage; Cancer recurrence

First-authors address：First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.14.038

乳腺癌是全球女性最常見的恶性肿瘤，在我国女性恶性肿瘤排名第一[1-2]。2012年全球乳腺癌新发病例超过120万，我国每年新增约21万乳腺癌患者[3-5]。近年来我国乳腺癌发病率正逐年上升，流行趋势为城市高于农村，沿海地区高于内地。乳腺癌严重影响了患者的生活及生存质量，因此，对乳腺癌发病机制及治疗药物的研究显得尤为重要[6]。不协调的51样激酶1（Unc-51-like kinase 1，Ulk1）是细胞自噬过程中的正向调节因子，在多种外周组织（心脏、大脑）中正常表达，对胚胎发育、免疫系统调控、血管生成和肿瘤转移等方面发挥着重要作用[5-6]，参与了胚胎发育、细胞增殖与分化等一系列生理活动。研究表明，Ulk1在癌症的发生发展中发挥着重要的调控作用，能通过肿瘤细胞的自噬作用，且Ulk1表达与肿瘤组织的级别高低、TNM分期有重要关系[7-8]。因此本文研究乳腺癌中Ulk1过表达与患者TNM分期和癌症复发的相关性，为乳腺癌患者的早期诊断、治疗、预后提供依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年3月-2015年5月在本院乳腺外科确诊的乳腺癌患者196例。纳入标准：年龄≥18岁;意识清晰;患者的预计生存期均>12个月。排除标准：严重精神病史;合并其他肿瘤;肝肾功能不全;存在其他重大器官疾病。其中患者年龄47～68岁，平均（57.5±10.8）岁，均行乳腺癌病理组织检查;病理分期采用国际抗癌联盟（UICC）推荐的TNM分期，其中T1期94例、T2期42例、T3期36例、T4期24例;患者均自愿提供前乳腺癌组织标本，用作分析Ulk1蛋白的表达。患者（或患者直系亲属）均签署知情同意书。本研究已经医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 ELISA测定Ulk1蛋白水平 按照无菌条件操作，实验所有器具在使用前均用高压灭菌，烘干。将保存在-80 ℃冰箱中的乳腺癌组织取出解冻。称取0.1 g乳腺癌组织，加入少量液氮，在研钵中迅速将乳腺癌组织碾碎至粉末状;将组织粉末转入2 mL Eppendorf管中，加入1.2 mL PBS（pH 7.4），充分振荡混匀，4 ℃下2 000 r/min，离心20 min。仔细收集上清液。获取乳腺癌组织匀浆后，采用Elisa法检（试剂盒购于上海恒远生物科技有限公司）测乳腺癌组织中的Ulk1蛋白表达量。

1.2.2 Ulk1在T1～4期中的表达水平的测定 免疫组化方法测定Ulk1在T1～4期中的表达，制作常规5 μm乳腺癌组织石蜡切片，3% H2O2溶液常温阻断内源性过氧化氢酶活性，微波修复抗原，PBS常规冲洗，1% CXCR7抗体工作液（购于英国Abcam公司），4 ℃过夜，加入二抗（IgG），室温30 min，加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片。采用双盲法统计结果，随机选取5个高倍视野（×400）计数，无色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分，同时计数;阳性细胞>50%为（+++），26%～50%为（++），6%～25%为（+），阳性细胞≤5%为（-），（-）及（+）归为阴性表达组，（++）及（+++）归为阳性表达组。

1.3 观察指标 检测并观察患者不同分期患者的Ulk1蛋白表达及阳性率，分析Ulk1蛋白表达与临床病理特征的关系，对患者进行随访，分析乳腺癌患者癌症复发的影响因素。

1.4 统计学处理 使用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验;复发因素分析采用logistic回归分析，检验水准α=0.05。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同临床病理特征组中Ulk1蛋白水平的表达 T1、T2、T3、T4期患者Ulk1蛋白水平分别为（2.67±0.19）、（1.83±0.09）、（1.25±0.25）、（0.75±0.18）ng/mL;T1期Ulk1蛋白表达高于T2、T3、T4期（t=20.200、24.102、46.121，P=0.000、0.000、0.000），T2期Ulk1蛋白表达高于T3、T4期（t=14.013、34.335，P=0.000、0.000），T3期Ulk1蛋白表达高于T4期（t=11.679，P=0.000）。

2.2 不同临床病理特征组中Ulk1阳性表达率比较 T1、T2、T3、T4期患者Ulk1阳性率分别为：94.7%（89/94）、85.7%（36/42）、61.1%（22/36）、37.5%（9/24）;T1、T2、T3、T4期患者Ulk1阳性率逐渐降低（字2=26.241，P=0.000），见图1。

2.3 Ulk1蛋白表达与临床病理特征的关系 Ulk1蛋白表达与年龄无关（P>0.05），分化程度越高、浸润深度越深、有淋巴血管间隙浸润、有淋巴结转移，Ulk1蛋白阳性表达率越低（P<0.05），见表1。

2.4 乳腺癌患者癌症复发因素分析 对所有患者均进行为期3年的随访，截至随访结束，乳腺癌患者癌症复发共64例。单因素分析结果显示，淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润、Ulk1蛋白阳性与复发有关（P<0.05），见表2;以乳腺癌是否复发为因变量（无=0，有=1）进行多因素Logistics回归分析，结果显示：淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润是乳腺癌患者复发的危险因素，Ulk1蛋白阳性是乳腺癌患者复发的保护因素（P<0.05），见表3。