元蘑液体培养基配方筛选

2019-08-27兴刘继云李占君杜帛霖

食用菌 2019年4期

郭兴刘继云李占君王渌杜帛霖王刚

（1伊春林业科学院，黑龙江伊春153000；2黑龙江北货郎森林食品有限公司，黑龙江伊春153000）

元蘑（Hohenbuehelia serotina）隶属真菌界真菌门担子菌亚门层菌纲伞菌目侧耳科亚侧耳属[1]，又称亚侧耳、黄蘑、冻蘑。元蘑具有极高的营养价值，其质地柔嫩、味道鲜美、食味独特，含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿质元素等多种营养成分[2-3]。

在元蘑的人工栽培过程中普遍采用试管母种制作原种，再扩大制作栽培种的固体菌种接种培育法，这种方法生产效率低，菌丝满袋周期长且菌龄不一致。液体发酵生产液体菌种则可以克服上述缺点，是一种适合规模化、工厂化的菌种制备技术[4]。我国的液体菌种生产设备和配套技术已经达到国际先进水平[5-6]，液体菌种已应用到黑木耳、金针菇、杏鲍菇、平菇、滑子菇、猴头菇、白灵菇、蛹虫草、灵芝等食用菌上[7-16]。笔者对元蘑进行液体培养基配方的筛选，为实际生产提供理论的指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株

供试元蘑菌株采购于吉林省敦化市明星特产科技有限责任公司。

1.1.2 供试培养基

斜面/固体培养基（PDA）：马铃薯 200 g（去皮后切成小片，加适量蒸馏水，煮至呈软泥状，四层纱布过滤后取滤液），葡萄糖20 g，琼脂20 g，pH自然，蒸馏水定容至1000 mL。

基础种子培养基：葡萄糖3 g/100 mL，蛋白胨0.3 g/100 mL，磷酸二氢钾 0.1 g/100 mL，硫酸镁0.05 g/mL，pH 自然。

1.1.3 其他材料

葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、蛋白胨、酵母膏、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钙、七水合硫酸亚铁、七水合硫酸锌、氯化钠、浓盐酸、氢氧化钠为国产分析纯；VB1、VB2、VB6、VC、玉米粉、黄豆粉、小米粉，为国产食品级。

1.1.4 仪器与设备

立式压力蒸汽灭菌器，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；超净工作台，苏州广源净化科技有限公司；HZ-2111KB立式震荡培养箱，金坛市盛蓝仪器制造有限公司；AL-104高精度电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；DZB-718便携式多参数水质分析仪，上海仪电科学仪器股份有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种活化与接种

分别配制PDA斜面培养基，将原始菌株接种到其中，再将其放入25℃恒温培养箱中培养7 d，对其进行传代活化。

1.2.2 培养方法

在无菌条件下，分别将10个活化的菌株接入供试培养基中（150 mL培养液装于250 mL三角瓶中）、温度25℃、转速150 r/min，培养7 d后，结束培养，测定菌丝生物量。

1.2.3 碳源试验

单因素碳源试验，碳源分别为3 g/100 mL的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、玉米粉、小米粉。

1.2.4 氮源试验

单因素氮源试验，氮源分别为0.3 g/100 mL的蛋白胨、黄豆粉、酵母膏、尿素、硫酸铵。

1.2.5 不同无机盐及添加量对发酵的影响试验

基础种子培养基中的KH2PO4含量设置为0.05 g/100 mL、0.1 g/100 mL、0.15 g/100 mL、0.2 g/100 mL、0.25 g/100 mL。

基础种子培养基中的MgSO4含量设置为0.01 g/100 mL、0.03 g/100 mL、0.05 g/100 mL、0.07 g/100 mL、0.09 g/100 mL。

配制5组发酵培养基，额外分别按0.3 g/100 mL添加 FeSO4·7H2O、CaCO3、NaCl、ZnSO4，以不添加为空白对照。

1.2.6 不同维生素对发酵的影响

分别在基础种子培养基中，添加0.001%的VC、VB1、VB2、VB6配制4组发酵培养基。

1.2.7 试验测定方法

菌丝体生物量的测定：将培养结束后的发酵液倒入抽滤瓶中，抽滤，抽滤过程中流动地加入些许蒸馏水对菌丝体进行冲洗，抽滤后得到较干的菌丝体，再放置于烘箱中，温度设置为60℃，待完全烘干后，称重[17]。

所有单因素和正交试验均重复三次。采用SAS9.2数据分析软件进行方差分析。

1.2.8 正交优化

在单因素试验的基础上，以最佳碳源、最佳氮源、无机盐、维生素4个影响因子采用L9（34）正交表进行正交试验，每组设置3个平行（150 mL培养液分装于250 mL锥形瓶中），25℃，150 r/min摇床培养7 d后，过滤收集菌丝球并洗净，于60℃烘箱中完全烘干后称重，记录每组各瓶菌丝体干重并计算平均值。