农村散养家禽禽流感和新城疫免疫程序探讨

林显湛　卢伟全　陈世文　彭志超　黄自立

摘 要 农村散养家禽虽然在整个家禽饲养行业所占份量很小，但依然普遍存在。饲养散养家禽的多为老年人以及他们在家帮带的学龄前儿童，是散养家禽容易传播的禽流感包括H5亚型、H7N9的易感人群。为切合农村实际，加强散养家禽H5+H7N9以及新城疫免疫工作，对35羽试验鸡进行了禽流感（H5 Re-8+H7N9 Re1）+新城疫同时免疫，抗体水平合格率分别达到97.14%、97.14%和94.29%，证明對农村散养家禽禽流感和新城疫同时免疫效果理想。

关键词 H5;H7N9;重组疫苗;免疫抗体水平

中图分类号：S855.3 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.12.078

禽流感（Avianinfluenza，AI）是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽类高度接触性、急性传染病。禽流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属A型禽流感病毒[1]。禽流感病毒由很多亚型，其中认为H5和H7亚型多为高致病性强毒株[2]。东莞市一直以来重视高致病性禽流感免疫工作，但在散养家禽方面，经常遇到的是散养户认为免疫灭活苗后容易出现不良反应，甚至影响产蛋、个别出现死亡等，拒不履行强制免疫主体责任。为了探索更切合农村基层、更便于操作的免疫程序，对5个家禽散养户饲养的家禽进行了禽流感+新城疫同时免疫，并与单纯免疫禽流感的方法进行比对，其中H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗体水平均为97.14%，远高于单纯免疫组的60.00%和55.00%，证明在农村基层应可完善免疫程序。

1 材料与方法

1.1 家禽血清

在2019年3月采自东莞市农村鸡散养户，日龄均在120～150 d，一组为同时免疫1次禽流感灭活苗+新城疫弱毒苗，剂量为0.5 mL和1羽份，一组为单纯免疫1次禽流感灭活苗，剂量为0.5 mL。以翅静脉采血，以3 500 r·min-1离心15 min 分离获得待检血清，-20 ℃保存备检。

1.2 试剂

1.2.1 1%鸡红细胞悬液

采集实验室饲养的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合，用pH值7.2的0.01 mol·L-1 PBS液洗涤3次，每次以1 000 r·min-1离心10 min，洗涤后用PBS液配成体积分数1%鸡红细胞悬液，4 ℃保存备用。

1.2.2 抗原和阳性血清

H5亚型禽流感抗原（Re-8株）、H7N9（Re1株）、ND（La Sota株）及相对应毒株的阳性血清。

1.2.3 主要耗材和仪器

96孔“V”型反应板，离心机，8道移液器，微量震荡器。

1.3 方法

按照高致病性禽流感诊断技术、新城疫诊断技术规定的血凝与血凝抑制方法操作。根据东莞市动物疫病监测方案规定，家禽免疫后21天进行免疫效果监测，以完全抑制4单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI的滴度，H7N9、ND以HI效价大于或等于41og2判阳性、H5以大于或等于5log2判阳性，判定为抗体合格。

2 结果与分析

2.1 同时免疫禽流感+新城疫的免疫抗体水平

共检测35份血清样品，H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗体水平均为97.14%，ND为94.29%，未发现不良反应，详细结果见表1。

2.2 单纯免疫禽流感的免疫抗体水平

共检测20份血清样品，H5 Re-8株免疫抗体水平为60.00%，H7N9 Re1株为55.00%，ND不作比较，有3羽鸡出现不良反应，其中1例为精神沉郁，1例为食欲不振，1例为下痢。详细结果见表2。

3 讨论

农村散养家禽免疫难度不仅在免疫密度上，而且在免疫效果上。例如2019年春防期间，东莞市调查摸底应免散养家禽为17.38万羽，经过集中免疫后，免疫密度达到97.89%，仍有接近0.37万羽散养家禽由于散养户认为免疫禽流感灭活苗后，容易出现不良反应如精神沉郁、食欲不振、下痢以及产蛋下降等，严重者出现死亡，而拒绝履行强制免疫义务。在已免疫的散养家禽方面，由于难以做到像规模养殖场一样多次免疫，灭活苗单靠一次免疫，未必能达到良好的免疫效果。因此，探索针对农村散养家禽的、可操作性强的免疫程序，对防控高致病性禽流感，尤其是保障散养户以及其家人身体健康尤为重要。本次试验探索同时免疫禽流感+新城疫，一方面降低了不良反应的概率和症状，另一方面通过一次免疫可以产生较高的免疫抗体水平，适合在农村基层进一步试验推广。

本次试验所选取的试验鸡，均来自三鸟批发市场，蓄肥养殖50～70 d，日龄均在120～150 d。由于散养户拒绝多次采集血清，因此未能在免疫前检测原有抗体水平以作比较，目前正在物色合适的散养场点作相关比较。

同时免疫可能和目前规模养殖场免疫程序不相符，但同时免疫并不是首次使用，目前我国一直在使用的禽流感-新城疫基因工程苗，包括H9亚型+ND、H5亚型+ND，都已在实际生产中得到广泛使用，并取得一定效果。以往存在质疑的ND抗原血凝素受体位点借助于自身病毒空间结构优势，比AI的血凝素结合受体位点更具有优势[3]，在本次试验中并未得到明显体现，相关机理有待进一步研究。

我国自2018年12月开始已转换禽流感新毒株，在东莞市家禽规模养殖场已全部清理的情况下，农村散养家禽是防控高致病性禽流感的重点，春防期间正逐步过渡新毒株疫苗进行免疫注射，在8—9月秋防集中免疫期间，将进一步探索完善针对农村散养家禽的免疫程序，争取达到一次免疫就可以达到良好免疫效果的目标，降低高致病性禽流感疫情和人感染病例发生的风险。

参考文献：

[1] Y.M.Saif，H.J.Barnes，J.R.Glisson，等.禽病学[M].第11版.北京：中国农业出版社，2005.

[2] 张进.高致病性禽流感免疫程序的优化及应用[D].长沙：湖南农业大学，2010.

[3] 陆桂丽，汪萍，沙依兰古丽，等.禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）接种肉鸡后免疫抗体水平消长规律分析[J].中国兽医杂志，2010（12）：39-42.

（责任编辑：刘昀）