血清miRNA-122a和降钙素原对脓毒症相关肝损伤早期诊断及预后评估的临床价值

桑珍珍 高杰 贾春梅 李勇

沧州市中心医院急诊科（河北沧州 061000）

脓毒症是感染引起机体炎症反应失控导致的危及生命的器官功能障碍[1]，急性肝损伤可发生在脓毒症的任何阶段，是影响脓毒症患者预后的独立危险因素[2]。有研究报道，miRNA-122a在调控炎症及肝功能方面发挥重要作用[3]，但其对脓毒症相关肝损伤（sepsis related liver injury，SRLI）的诊断效能及预后价值尚缺乏相关研究。降钙素原（procalcitonin，PCT）是降钙素的前体蛋白[4]，脓毒症时高浓度的PCT可能导致肝细胞坏死，从而造成肝损伤，但是PCT对肝损伤的机制尚未阐明。本研究通过检测脓毒症患者血清miRNA-122a的表达量及PCT含量，探讨其参与肝损伤的内在机制，分析其对脓毒症相关肝损伤的早期诊断及预后评估的临床价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2016年12月至2019年2月沧州市中心医院EICU收治的254例脓毒症患者作为研究对象。

1.1.1 纳入标准年龄18～80岁；入选患者符合脓毒症诊断标准（Sepsis 3.0）[1]，肝损伤组患者同时符合脓毒症相关肝损伤诊断标准[5]；病例资料完整。

1.1.2 排除标准（1）年龄＜18岁或＞80岁；（2）孕妇或哺乳期妇女；（3）既往有慢性肝功能障碍及本次因急性肝功能障碍或慢性肝功能障碍急性发作入住EICU者；（4）肝脏肿瘤或肝脏部分切除术后；（5）存在梗阻性黄疸；（6）中毒或药物性肝损伤等非脓毒症原因引起的肝损伤。

1.1.3 伦理学本研究符合伦理学标准，并经沧州市中心医院伦理委员会批准，所有检查和治疗均获得过患者家属的知情同意。

1.2 病例分组152例脓毒症患者，根据是否发生肝损伤，分为肝损伤组（86例）和无肝损伤组（46例）；脓毒症相关肝损伤患者再按肝损伤严重程度分为轻度肝损伤组（30例）、中度肝损伤组（35例）、重度肝损伤组（41例）；脓毒症相关肝损伤患者根据28 d转归分为生存组（35例）和死亡组（71例）。

1.3 观察指标记录患者入EICU当日的一般资料，包括年龄、性别、感染部位、乳酸（Lac）、氧合指数OI（PaO2/FiO2）、血常规、生化指标、PCT、机械通气、APACHEⅡ评分、SOFA评分等，记录28 d预后。患者入院当天（治疗前）采集患者肘静脉血5 mL，离心（3 000 r/min）10 min，取血浆于-80℃保存，待测miRNA-122a相对表达量。

1.4 血清miRNA提取及检测在miRBase上查找目的基因序列，由美国Invitrogen公司设计合成引物，提取血清miRNAs，合成cDNA。以U6作为内参，RT-PCR反应在9700型基因扩增仪中进行，扩增miRNA。RT-PCR反应条件为：95℃，10 min；40个PCR循环（95 ℃，10 s；60 ℃，60 s）。采用2-ΔΔCt相对定量法计算miRNA-122a相对表达量。

1.5 统计学方法数据处理采用SPSS 23.0统计软件，计量资料以均数±标准差表示或中位数（P25，P75）表示，比较采用t检验或方差分析Mann-WhitneyU检验或H检验，计数资料比较采用χ2检验。采用二元Logistic回归分析影响脓毒症相关肝损伤患者预后的危险因素。当P＜0.05，认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者一般资料比较脓毒症患者无肝损伤组与肝损伤组患者间性别、年龄、感染部位等差异均无统计学意义（均P＞0.05），基线资料均衡，具有可比性。肝损伤组患者的APACHEⅡ评分、SOFA评分、PCT、28 d病死率显著高于无肝损伤组（均P＜0.01）。见表1。

2.2 血清miRNA-122a、PCT用于脓毒症相关肝损伤的早期诊断价值患病组和健康组血清miRNA-122a表达量比较差异有统计学意义（均P＜0.01），见表2。与健康组比较，脓毒症无肝损组、轻度肝损伤组、中度肝损伤组、重度肝损伤组血清miRNA-122a表达量呈上升趋势，各组间表达量比较差异有统计学意义（均P＜0.01），见表3。血清miRNA-122a、PCT诊断脓毒症相关肝损伤的AUC分别为：0.788（95%CI：0.695 ～ 0.863）、0.756（95%CI：0.693～ 0.832）。当miRNA-122a表达量最佳临界值为2.80时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为71.76%，特异度为75.29%；当PCT浓度最佳临界值为15.87时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为68.63%，特异度为67.38%；当miRNA-122a联合PCT诊断脓毒症相关肝损伤的AUC为0.868（95%CI：0.786～0.928），最佳临界值为0.254时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为70.54%，特异度为68.32%。见图1。

2.3 脓毒症相关肝损伤的预后危险因素的单因素分析结果单因素分析结果显示，与存活组比较，28 d死亡组肝损伤严重程度、APACHEⅡ评分、SOFA评分、PCT、Lac、血清miRNA-122a的表达量显著升高，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。

表1 脓毒症相关肝损伤各组患者各指标比较Tab.1 The indicators of sepsis-related liver injury in each group were analyzedM（P25，P75）

表2 不同组间血清miRNA-122a的比较Tab.2 Levels of miRNA-122a in each group ±s

表2 不同组间血清miRNA-122a的比较Tab.2 Levels of miRNA-122a in each group ±s

注：与健康对照组比较，aP＜0.01；与脓毒症组比较，bP＜0.01

组别健康对照组脓毒症组脓毒症相关肝损伤组F值P值例数40 46 86 miRNA-122 1.03±0.02 2.51±0.45a 2.83±0.56ab 12.735＜0.001

表3 入院即刻血清miRNA-122a不同严重程度组的比较Tab.3 Levels of miRNA-122a in each group on day1 ±s

表3 入院即刻血清miRNA-122a不同严重程度组的比较Tab.3 Levels of miRNA-122a in each group on day1 ±s

注：与健康对照组比较，aP＜0.01；与脓毒症组比较，bP＜0.01；与轻度肝损伤组比较，cP＜0.01；与中度肝损伤组比较，dP＜0.01

组别健康对照组脓毒症组轻度肝损伤组中度肝损伤组重度肝损伤组F值P值例数40 46 20 25 41 miRNA-122a 1.03±0.02 2.51±0.45a 2.57±0.34ab 2.84±0.56abc 3.54±0.58abcd 18.436＜0.001

2.4 脓毒症相关肝损伤预后危险因素的二元Logistic回归分析结果二元Logistic回归分析发现，肝损伤严重程度、APACHEⅡ评分、SOFA评分、miRNA-122a是影响脓毒症相关肝损伤患者预后的独立危险因素，见表5。

3 讨论

肝脏是脓毒症早期易侵及损伤的器官之一。脓毒症肝损伤的机制众多[6]，按发病机制不同可分为缺血缺氧性损伤、肝细胞性肝损伤和胆汁淤积性损伤。

图1 血清miRNA-122a、PCT、miRNA-122a联合PCT诊断脓毒症相关肝损伤的ROC曲线Fig.1 ROC curve of serum mirna-122a，PCT and mirna-122a combined with PCT in the diagnosis of sepsis-related liver injury

表4 脓毒症相关肝损伤患者死亡影响因素分析Tab.4 Influential factors of death in patients with sepsisrelated liver injuryM（P25，P75）

近年来研究报道，miRNA-122作为新药肝细胞毒性早期评价标志物具有潜在应用价值[7]。有研究报道，miRNA-122a通过调控靶基因CAT-1、Cycling G1参与蛋白质的合成，进而参与肝细胞的损伤[8]。RAHMEl等[3]研究报道，血清 miRNA-122a表达量的升高，可以作为脓毒症诊断的特异性标志物，还能够对脓毒症患者的疾病严重程度及死亡率做出预警。PCT是降钙素的前体，脓毒症时血清PCT水平升高，高浓度的PCT可能导致肝细胞坏死，从而造成肝损伤，病理机制尚未完全阐明，其一可能是由于细菌易位引起的内毒素血症和SIRS引起的PCT升高，造成肝细胞损伤[9]；其二是促炎细胞因子诱导的PCT增加，由于正反馈机制的存在，导致PCT浓度进一步升高，造成肝细胞损伤[12]。因此，PCT可能是与炎症反应介质的毒性作用和休克引起的肝缺血重叠的一个额外因素，这导致了MODS的发展和脓毒症/脓毒症休克患者病死率的急剧增加[11]。但是目前尚无研究报道血清miRNA-122a联合PCT对脓毒症相关肝损伤的早期诊断的临床价值。因此本研究通过检测脓毒症患者血清miRNA-122a的表达水平、PCT水平，分析其对脓毒症相关肝损伤的早期诊断及预后评估的临床价值。

表5 影响脓毒症相关肝损伤患者预后独立危险因素的二元Logistic回归分析结果Tab.5 Binary Logistic regression analysis results of independent prognostic risk factors for patients with sepsisrelated liver injury

本研究显示，脓毒症相关肝损伤组血清miRNA-122a表达水平、PCT水平显著高于脓毒症组，二者随肝损伤严重程度加重而升高，二者变化趋势与反映病情严重程度的APACHEⅡ和SOFA评分变化趋势一致；且死亡组二者水平显著高于存活组；通过ROC曲线分析发现，血清miRNA-122a、PCT对脓毒症相关肝损伤的早期诊断具有临床价值，但敏感度和特异度不高，然而血清miRNA-122a联合PCT检测对评估脓毒症相关肝损伤具有较高的敏感度和特异度。通过多因素Logistic回归分析发现miRNA-122a是影响脓毒症休克患者预后的独立危险因素。国外研究报道，在急性呼吸窘迫损伤综合症患者中，血清miRNA-122a表达量的升高与死亡率和急性肝损伤有相关性[12]。LI等[13]研究发现，血清PCT水平与急性胰腺炎患者ALT、AST、AKP水平呈正相关，血清PCT水平可作为急性胰腺炎患者肝损伤的指标。本研究结果与国内外报道结果类似，进一步证实血清miRNA-122a联合PCT检测对评估脓毒症相关肝损伤的早期诊断具有临床价值。

但是本研究尚有不足之处，miRNA-122a表达水平仅限于第1天的检测，需连续监测评估与病情变化的趋势，笔者下一步要在细胞水平、组织水平、动物水平进行进一步深入研究miRNA-122a与脓毒症相关肝损伤的关系。