高活性枯草芽孢杆菌的筛选及其与黄芪相比较对生长小鼠免疫、生长指标的影响

鞠林 侯军义 李延涛 张甜 林雪彦*

高活性枯草芽孢杆菌的筛选及其与黄芪相比较对生长小鼠免疫、生长指标的影响

鞠林①侯军义②李延涛②张甜②林雪彦②*

（①山东省泰安市第一中学 271000 ②山东农业大学 山东 泰安）

为了研究益生菌和中草药对小鼠生长和免疫指标的作用，本试验选取黄芪和枯草芽孢杆菌作为研究材料。试验对象为36只SPF昆明生长鼠，分为对照组A组，黄芪组B组以及枯草芽孢杆菌组C组，每组12只。C组与A组、B组相比，C组能显著提高谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白的含量。C组的免疫球蛋白M含量显著高于A组和B组。C组白细胞介素4的含量显著高于对A组和B组(P<0.05)，白细胞介素2的含量也高于A组和B组(0.05

免疫指标 黄芪 枯草芽孢杆菌。

目前研究证明，枯草芽孢杆菌能直接稳定肠道微生态系统，恢复肠道的完整性。芽抱杆菌是具有较强的耐酸、耐盐、耐高温和耐挤压等特性的革兰氏阳性杆菌[1, 2]。用于词料添加剂的芽胞杆菌是一种需氧的非致病菌。它可分泌多种胞外酶，能补充水生动物肠道内源酶的不足，促进淀粉、纤维素等分解，提高词料消化率[3, 4]。黄芪作为饲料添加剂具有提高动物生产性能、增强机体免疫和抗病力等多方面的作用[5, 6, 7]。目前有研究证明日粮中添加黄芪，可提高蛋鸡的产蛋率和饲料报酬，降低淘汰死亡率，并降低采食量和料重比。肉鸡日粮中添加黄芪可提高肉鸡生长性能和产肉性能，提高肝脏和血液抗氧化能力，改善免疫性能[8, 9]。

随着畜禽集约化饲养程度的提高，防治动物群发病的药物类饲料添加剂的应用越来越广泛，需求量也日趋增加。因而研制能改善畜禽健康，提高生产性能且安全无毒的天然制剂已成为该领域的一个开发热点[10, 11]。枯草芽孢杆菌和黄芪正是由于对生命体的肠道菌群有良好的作用在未来可能会被大量使用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 器材 一次性手套，一次性口罩，手术衣，手术剪，医用酒精，酒精棉球，100g电子秤，1.5ml离心管，冻存管，液氮罐，血常规用自动生化分析仪(型号：7020；Hitachi)，酶联免疫吸附测定试剂盒等。

1.1.2 中草药与菌种 黄芪粉，细度：120目，易溶于水，购于泰安美兴科贸有限公司。由自己筛选枯草芽孢杆菌，活性强，抑菌圈大。

1.1.3 试验动物 昆明SPF生长鼠36只，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司。

1.1.4 日粮 SPF鼠专用日粮，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组与管理 将36只试验鼠分为3组，分别为对照组，黄芪组，枯草芽孢杆菌组各12只。采用自由饮水的方法将黄芪与枯草芽孢杆菌分别按照前人研究以及相关产品的用量加入饮水中。本次试验添加量为这两种产品每1g分别溶于1000ml纯净水中。每只试验鼠每次供水200ml，并且每隔3d更换一次。3组的饲养环境以及日粮完全相同，每隔1天更换新料并且记录采食量，每隔3d称重并记录体重变化以及更换垫料。

1.2.2 试验过程 本次试验在山东农业大学动物科技学院鼠房代谢室进行，在试验开始前先对鼠房进行消毒，对饮水瓶以及鼠笼进行清洗消毒，检查鼠房通风，光照温度以及加湿器等设备以确保试验顺利开始且不影响后续工作。在试验鼠到的第1天先对其称重记录初始重，每隔1d于固定时间下午3时更换饲料并记录采食量，每隔3d于固定时间下午3时称鼠重，更换垫料，更换饮水并记录数据，并且及时检查鼠房内通风，光照温度以及加湿器等设备是否正常。

1.2.3 抗疲劳测试 随机从每组中选4只进行抗疲劳测试，将3个组的试验鼠同时分别放入相同温度的水中，开始记录时间以及试验鼠的状态。观察得出结果：在所选的试验鼠中，抗疲劳能力最强的是对照组，其次是黄芪组，枯草芽孢杆菌组最弱。

1.2.4 采样 在饲喂至第23天进行采样，采样前先进性称重，采样内容主要包括：血液、肝脏、胰腺、十二指肠、空肠以及粪便。

2 结果

2.1 采食量与体重 各组在采食量和体重变化中的对比如表1和表2所示，血液指标如表3所示，免疫指标和白细胞介素分别如表4和表5所示。

表1 采食量对比 （g）

表2 体重对比 （g）

由表1和表2可知，在采食量对比中B组在该试验期间高于A组和C组，而C组对于采食量没有突出作用，说明黄芪在本次试验中有提高采食量的作用；在体重对比中C组较高于B组而略高于A组，B组对于体重增长没有突出作用，说明在本次试验中枯草芽孢杆菌在提高增重方面优于黄芪。

2.2 血液指标 见表3。

表3 各组血液指标对比

注：相同字母表示影响不显著(P>0.05)，不同字母表示影响显著(P<0.05)，0.05

由表3可知，在所测的6个血液指标中，添加枯草芽孢杆菌能够显著提高AST、TP、ALB的含量，与A组、B组差异显著(P<0.05)，A组与B组之间无显著差异(P>0.05)。

2.3 免疫指标 见表4。

表4 各组免疫指标对比 (μg/L)

由表4可知，在所测的三个指标中，添加枯草芽孢杆菌的C组IgM含量显著高于A组和B组(P<0.05)，A组与B组之间无显著差异(P>0.05)。

2.4 白细胞介素 见表5。

表5 各组白细胞介素指标对比 (ng/L)

由表5可知，添加枯草芽孢杆菌的C组IL-4的含量显著高于对A组和B组(P<0.05)，IL-2的含量也高于A组和B组(0.05

3 讨论

（1）本研究将黄芪和枯草芽孢杆菌加入饮水中供试验鼠饮用，期间观察试验鼠的生长、生理以及健康状况，最终采样进行对比分析。由上文研究内容及结果可知，在采食量上，黄芪组的采食量高于对照组和枯草芽孢杆菌组，说明添加黄芪能够提高动物采食量。在体重增长上，黄芪组稍低于对照组与枯草芽孢杆菌组，这种现象有可能是将日粮中更多的营养物物质用于提升自身免疫力以及促进代谢。（2）根据血液指标与免疫球蛋白的分析，在饮水中添加枯草芽孢杆菌能够显著提高AST、TP、ALB、IgM以及IL-2和IL-4的含量，这些指标浓度的增加对将会直接影响动物的免疫力，因此对于本次试验而言，添加枯草芽孢杆菌的C组免疫力强于对照组A组与添加黄芪的B组。

4 结论

在饮水中添加枯草芽孢杆菌对免疫力的增强效果优于添加黄芪的效果，因此本次试验的结果将作为日后继续研究相关方面的参考依据。

[1] 张伟庆, 黄福佳, 杨萧华. 枯草芽孢杆菌工程菌(WＢ800Ｎ-CC31)对大鼠免疫指标的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2017(5下): 184-186.

[2] 惠明, 窦丽娜, 田青等. 枯草芽孢杆菌的应用研究进展[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(27): 11623-11624,11627.

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[4] 余东游, 毛翔飞, 秦艳等. 枯草芽孢杆菌对肉鸡生长性能及其抗氧化和免疫功能的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2010, 46(3): 22-25.

[5] 王迪, 张文风, 张杰. 黄芪配甘草对小鼠细胞免疫功能的影响[J]. 长春中医药大学学报, 2006, 22(3): 42-43.

[6] 王晨等. 黄芪及其复配组合调节正常小鼠免疫功能的探索[J]. 中国现代药, 2018, 5: 20, (5).

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致 谢

感谢本次举办的科技创新大赛给了我一个锻炼与提升自身能力以及开阔眼界的机会，感谢山东农业大学给我提供了良好的试验环境以及学长学姐提供相关的技术指导，最应该感谢的是我的母亲林雪彦教授，含辛茹苦的养育以及无微不至的教导使我能够清楚的认识到漫长的人生道路该如何去走，感谢她对我本次试验的大力支持。最后，感谢我的所有老师以及同学们，是他们良好的教育和品行给我创造了美好的学习环境，感恩，感谢，感激。

（2019–04–25）

S852.61+6

A

1007-1733(2019)08-0013-03