复方青黛膜剂的制备和质量控制

李 真，宋 洁，张志国

复方青黛膜为中国人民解放军第960医院泰安院区（原解放军第88医院）研制，由复方青黛散（2015年版的《中国人民解放军医疗机构制剂规范》第53页）进行剂型改造而制成的一种非标准制剂。但散剂易被唾液冲散，不能长时间作用于患处，经研究可与无毒、无刺激、性质稳定、不影响主药药效且成模性能良好的羧甲基纤维素钠成膜材料制成薄膜制剂。具有清热解毒，镇痛消肿作用，用于口腔炎、口腔溃疡［1］，方中青黛具有清热解毒，凉血消斑、泻火定惊的功效［2］，其主要成分是靛蓝和靛玉红［3-5］。该制剂能准确定位，起效快，大大提高了药物的生物利用度。为完善复方青黛膜的质量标准，并进一步提高医疗机构质量标准，笔者对该制剂的质量标准进行修订，建立相应的高效液相色谱法［6-10］来测定复方青黛膜中靛蓝和靛玉红的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent 1200 LC型高效液相色谱仪（G1311A输液泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1314B VWD检测器、Chemstation色谱工作站）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；HS3120超声波清洗器 （上海楚定分析仪器有限公司）。

1.2 试药羧甲基纤维素钠（CMC-Na，安徽山河药用辅料股份有限公司）；薄荷脑（南通薄荷厂）；冰片（济南润正药材有限公司）；PEG6000（鞍山恒泰药用辅料有限公司）；甘油（湖南尔康制药股份有限公司）；靛蓝对照品（中国食品药品检定研究院）；靛玉红对照品（中国食品药品检定研究院）；复方青黛膜（原解放军 88 医院，批号 170720、170703、170626）；甲醇为色谱纯；水为灭菌注射用水；其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 处方组成复方青黛散37.5 g，羧甲基纤维素钠 62.5 g，丙二醇 31.3 g，吐温-80 15.6 g，甘油 15.6 g，20%PEG6000 62.6 ml，水适量，制得 1000 g。

2.2 制备工艺复方青黛散9味，除冰片、薄荷脑外，牛黄、枯矾共研成细粉，加入青黛，煅石膏细粉充分研磨混合；其余3味粉碎成最细粉与上述药粉混匀；将冰片、薄荷脑与适量上述细粉研细，再与上述药粉按等量递增配研法配研，过筛，混匀，制成1000 g，既得。取羧甲基纤维素钠，加约200 ml蒸馏水，充分浸泡溶胀后，放置过夜，制成胶浆。另取复方青黛散置乳钵中，加入丙二醇，吐温-80，研匀，加入到上述胶浆中，乳钵用适量的水冲洗，洗液并入胶浆中，再加入甘油，20%PEG6000，充分搅拌均匀，放置，待气泡除尽后，均匀涂布于事先涂液体石蜡油的20 cm×16 cm玻璃板上，置于干燥箱60℃烘干，脱膜，分装，即得。

3 质量评价

该品性状为墨绿色薄膜，有冰片、薄荷脑的特臭。

口腔黏附时间的考察：选6名健康志愿者，将1 cm×1 cm的药膜黏附于受试者口腔上颚，试验期间禁水，记录药膜在口腔中的黏附时间。结果药膜与口腔上颚黏附紧密，平均滞留时间为28 min。

重量差异检查：按中国药典（2015年版）二部附录膜剂项下的有关规定进行，平均片重0.58 g，

4 靛蓝的含量测定

4.1 溶液的制备

4.1.1 对照品溶液的制备 精密称定靛蓝对照品5.3 mg，加三氯甲烷超声处理 1 min（250 W，33 kHz），制得每1 ml含靛蓝5.3μg的溶液，即得。

4.1.2 供试品溶液的制备 取该品0.25 g，加三氯甲烷适量超声处理 1 h（250 W，33 kHz），滤过，将三氯甲烷液转移到50 ml容量瓶中稀释至刻度，作为供试品溶液。

4.1.3 阴性对照品溶液的制备 根据样品处方比例称取除青黛以外的药材，制成缺青黛的阴性制剂，再按“4.1.2”项下方法处理，即得阴性对照品溶液。

4.2 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18（2）柱（250mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水（60∶40）为流动相；检测波长为285 nm；柱温为25℃；流速1.0 ml/min；进样量为20μl；理论板数靛蓝峰计算不低于1500。

4.3 系统适用性试验分别精密吸取20μl“4.1.1、4.1.2和4.1.3”项下制备的对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，分别按“4.2”项下色谱条件进行测定，色谱图见图1。

图1 靛蓝HPLC图

4.4 线性关系考察取“4.1.1”项下靛蓝对照品贮备液适量，以三氯甲烷为溶剂稀释，得系列标准溶液， 含靛蓝 0.53、1.06、2.12、4.24、5.30、6.36 μg/ml，分别精密吸取20μl，按“4.2”项下色谱条件进行测定。 以峰面积值为纵坐标（Y），浓度（μg/ml）为横坐标（X）绘制标准曲线。得靛蓝的线性回归方程：Y=82.7179X+9.9671，R2=0.9998，结果表明靛蓝质量浓度在0.53～6.36μg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。

4.5 精密度试验分别精密吸取“4.1.1”项下5.3μg/ml靛蓝对照品溶液 20μl，按“4.2”项下色谱条件，重复进样6次，测得峰面积，计算RSD=0.69%（n=6）。说明仪器的精密度良好。

4.6 重现性试验取样品 （m=0.2503 g，批号170720），按“4.1.2”项下方法分别制备供试品溶液，精密吸取20μl，按“4.2”项下色谱条件进样测定，平行操作5次。结果表明靛蓝的平均含量为0.2265mg/g，RSD=0.96%（n=6），表明该方法重复性良好。

4.7 稳定性试验取样品 （m=0.2503 g，批号170720），按“4.1.2”项下方法配制供试品溶液，分别于室温下放置 0 h，3 h，6 h，12 h，24 h 时， 精密吸取20μl，按“4.2”项下色谱条件进行测定。计算RSD=0.88%（n=5），说明在24 h内供试品溶液基本稳定。

4.8 加样回收率试验精密称取已知含量的样品0.25 g（批号 170720），共称取 9份，前 3份加 5.3μg/ml的靛蓝对照品溶液5.0 ml，中间3份加6.0 ml，后3份加7.0 ml，制成供试品溶液，按“4.2”项下色谱条件进行测定，结果回收率范围为98.04%～102.00%，RSD=1.4%，说明该方法回收率良好，结果见表1。

4.9 样品含量测定取3批样品按“4.1.2”项下方法测定，按外标法计算各样品中靛蓝的含量，结果见表2。

表1 加样回收率试样结果

表2 样品测定结果

5 靛玉红的含量测定

5.1 溶液的制备

5.1.1 对照品溶液的制备 取靛玉红对照品适量，精密称定，加N，N-二甲基甲酰胺制成每1 ml含靛玉红2μg的溶液，即得。

5.1.2 供试品溶液的制备 取复方青黛膜1.0 g剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺 25 ml，超声处理（功率 250 W，频率 33 kHz）60 min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加 N，N-二甲基甲酰胺溶解，转移至10 ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺至刻度，作为供试品溶液。

5.1.3 阴性对照品溶液的制备 根据样品处方比例称取除青黛以外的药材，制成缺青黛的阴性制剂，再按“5.1.2”项下方法处理，即得阴性对照品溶液。

5.2 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18（2）柱（250mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长为292 nm；柱温为常温；流速1.0 ml/min；进样量为20μl；理论板数靛玉红峰计算不低于2000。

5.3 系统适用性试验分别精密吸取20μl“5.1.1、5.1.2和5.1.3”项下制备的对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，分别按“5.2”项下色谱条件进行测定，色谱图见图2。

图2 靛玉红HPLC图

5.4 标准曲线的绘制取“5.1.1”项下靛玉红对照品贮备液适量，以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂稀释，得系列标准溶液， 含靛玉红 0.21、0.42、0.84、1.68、2.10、2.52μg/ml， 分别取 20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积值为纵坐标（Y），质量浓度（μg/ml）为横坐标（X）绘制标准曲线。得靛玉红的线性回归方程：Y=115.3048X+14.4372，R2=0.9998， 结果表明靛玉红在0.21～2.52μg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。

5.5 精密度试验分别精密吸取“5.1.1”项下2.1μg/ml靛玉红对照品溶液20μl，按“5.2”项下色谱条件重复进样6次，测定峰面积，计算RSD=0.79%（n=6）。说明仪器的精密度良好。

5.6 重现性试验取样品 （m=1.0052 g，批号170720），按“5.1.2”项下方法分别制备供试品溶液，精密吸取20μl，按“5.2”项下色谱条件进样测定，平行操作5次。结果表明靛玉红的平均含量为13.6309 μg/g，计，RSD=0.95%（n=6），表明该方法重复性良好。

5.7 稳定性试验取样品 （m=1.0052 g，批号170720），按“5.1.2”项下方法配制供试品溶液，分别于室温下放置 0 h，3 h，6 h，12 h，24 h 时， 精密吸取20μl，按“5.2”项下色谱条件进行测定。计算RSD=0.96%（n=5），表明在24 h内供试品溶液基本稳定。

5.8 加样回收率试验精密称取已知含量的样品1.0 g（批号170720），共称取 9份，前 3份加 2.1μg/ml的靛玉红对照品溶液4.5 ml，中间3份加靛玉红对照品溶液5 ml，后3份加靛玉红对照品溶液5.5 ml。再制成供试品溶液，按“5.2”项下色谱条件测定，结果回收率范围为98.83%～102.41%，RSD=1.27%，说明该方法回收率良好，结果见表3。

5.9 样品含量测定取3批样品按“5.2”项下色谱条件，计算各样品中靛玉红的含量，结果见表4。

表3 加样回收率试样结果

表4 样品测定结果

6 讨论

处方中羧甲基纤维素钠成膜性较好，原料易得，价格便宜，甘油为增塑剂和保湿剂，增加了该膜的柔韧性，PEG6000改善了药物分布不匀的缺点，增加了膜剂的平滑性。

靛蓝与靛玉红是青黛的主要有效成分，两者为同分异构体［11，12］。其中靛玉红含量较低，为使青黛中的靛蓝和靛玉红得到充分的提取，实验中，测定靛蓝时提取液选用了氯仿，测定靛玉红时提取液选用了N，N-二甲基甲酰胺。

该研究在选用流动相时，通过对流动相（甲醇、水）的比例进行筛选优化，结果发现，流动相为甲醇∶水（60∶40）时，靛蓝分离效果较好，流动相为甲醇∶水（70∶30）时，靛玉红分离效果较好，都能达到较理想的分析要求。笔者考察了超声处理时间（10 min、30 min、60 min）对靛蓝和靛玉红提取率的影响。结果随着超声处理时间的延长，样品中靛蓝和靛玉红的提取率增加，故测定时超声处理时间选60 min。

该流程操作制备简单，原料易得，成本低，质量控制标准可行，符合膜剂的质量标准。