疏肝补肾法对肝郁肾虚型黄褐斑患者血SOD、MDA及总（-SH）水平的影响

李温如 马丽俐 陈志伟

黄褐斑是一种由多种因素诱发而出现于面部的色素沉着性皮肤病，属中医“面尘”、“黧黑斑”、“肝斑”等范畴。该病病因、发病机制尚不明确，主要与遗传、内分泌因素及紫外线照射有关[1]。此外，氧化应激也参与黄褐斑的发病[2]。笔者运用疏肝补肾法治疗女性肝郁肾虚型黄褐斑，取得较好疗效[3]，同时检测其血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总巯基（-SH）的水平，探讨疏肝补肾法对女性肝郁肾虚型黄褐斑患者氧化应激的影响，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2014 年2 月—2015 年7 月于浙江省中医院皮肤科门诊就诊的女性黄褐斑患者70例，中医辨证分型为肝郁肾虚型，采用随机数字表法分为中药组和成药组，各35 例。同期选取面部无黄褐斑等色素沉着性皮肤病的女性健康体检志愿者30名为正常对照组。本研究经医院伦理委员会审核通过，所有患者均签署知情同意书。

1.2 诊断及中医辨证分型标准 黄褐斑诊断参照中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组《黄褐斑的临床诊断和疗效标准（2010 年版）》[4]：（1）面部淡褐色至深褐色、界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎症表现及鳞屑；（2）无明显自觉症状；（3）女性多发，主要发生于青春期后；（4）病情可有季节性，常夏重冬轻；（5）排除其他疾病（如颧部褐青色痣、Riehl 黑变病及色素性光化性扁平苔藓等）引起的色素沉着。中医诊断、辨证分型参照国家技术监督局1997 年版《中华人民共和国国家标准·中医临床诊疗术语证候部分》[5]中肝郁肾虚型的诊断：以胁胀作痛，情绪抑郁，耳鸣，腰膝酸软等为常见证候。

1.3 纳入标准 （1）符合上述诊断及中医辨证分型标准；（2）女性，年龄20～50 岁；（3）近1 个月内未使用治疗黄褐斑及影响内分泌的药物；（4）依从性良好的患者。

1.4 排除标准 （1）口服避孕药、妊娠、哺乳妇女；（2）年龄＜20 岁或＞50 岁；（3）男性黄褐斑患者；（4）由其他皮肤病引起的色素沉着；（5）合并有心、肝、肾、内分泌、造血系统等内科疾病。

2 方 法

2.1 治疗方法 中药组：予自拟方疏肝补肾汤：柴胡、当归、炒枳壳、炒白芍各12g，川芎、丹皮、泽泻各9g，熟地、山萸肉、女贞子各15g，淮山药30g，甘草6g。临症加减：肝郁气滞为主者，加郁金、香橼各9g，白蒺藜6g，玫瑰花5g；肝肾不足者，加枸杞子9g，菟丝子、杜仲各12g；伴失眠者，加珍珠母（先煎）、夜交藤各15g，合欢花9g；褐斑日久色深者，加丹参、赤芍各9g，白僵蚕6g，白芷9g；月经不调、痛经者，加制香附9g，桃仁、红花各6g，益母草15g，泽兰12g。水煎服，1 天1 剂，分2 次温服，每次250mL。成药组：予六味地黄丸（仲景宛西制药股份有限公司，规格：1.44g/丸，批号131237），8 丸/次，3 次/天，红花逍遥胶囊（云南楚雄天利药业有限公司，规格：0.4g/粒，批号20131127），4 粒/次，3 次/天。两组患者均外用广谱防晒霜（薇诺娜，SPF30，PA+++，外出前30min 适量均匀涂抹于面部，户外活动时每2h 重复使用1 次）。4周为1 个疗程，连续治疗3 个疗程。

2.2 观察指标 血清SOD、MDA、（-SH）含量检测，清晨采集两组患者治疗前后及正常对照组空腹静脉血2mL，于离心机3000r/min 离心10min，取上层血清1mL 置于-20℃冰箱保存待测。酶标测试仪（美国伯乐公司，型号：iMark）检测血清SOD、MDA 含量，全波长多功能酶标仪（美国赛默飞世尔科技公司，型号：Varioskan Flash）检测总（-SH）含量。采用双抗体夹心酶联免疫分析法（ELISA）检测血清SOD、MDA含量（试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司，批号20160182932、2016018293），采 用 微 量 酶 标 法（MELIA）检测总（-SH）含量（上海酶联生物科技有限公司，批号2016011928），实验操作严格按照说明书进行。

2.3 统计学方法 应用SPSS19.0 进行统计分析，计量资料以均数±标准差） 表示，采用t 检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05 差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。

3 结 果

3.1 两组黄褐斑患者及正常对照组一般资料比较中药组35 例，年龄26～48 岁，平均（39.80±4.88）岁；病程0.5～20 年，平均（4.24±3.95）年；根据皮损部位进行分型：蝶型27 例，面上型6 例，泛发型2 例。成药组35 例，年龄23～50 岁，平均（39.89±6.83）岁；病程0.1～20 年，平均（4.08±4.15）年；蝶型28 例，面上型5 例，泛发型2 例。正常对照组30 名，年龄20～50岁，平均（38.07±3.84）岁。三组一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

3.2 两组治疗前后及正常对照组血SOD、MDA、总（-SH）含量比较 治疗前，两组黄褐斑患者SOD、总（-SH）均低于正常对照组，MDA 均高于正常对照组（P 均＜0.01）；两组间比较，血清SOD、MDA、总（-SH）含量差异无统计学意义（P 均＞0.05）。治疗后，中药组、成药组患者SOD、总（-SH）含量较治疗前明显升高，MDA 显著降低（P 均＜0.01）；且中药组上述指标改善较成药组更明显（P 均＜0.05），见表1。

表1 两组黄褐斑患者治疗前后及正常对照组血SOD、MDA、总（-SH）含量比较（

表1 两组黄褐斑患者治疗前后及正常对照组血SOD、MDA、总（-SH）含量比较（

注：与正常对照组比较，*P＜0.01；与同组治疗前比较，△P＜0.01；与成药组治疗后比较，▲P＜0.05；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；总（-SH）：总巯基；中药组：自拟疏肝补肾汤，成药组：六味地黄丸+红花逍遥胶囊

组别中药组治疗前治疗后成药组治疗前治疗后正常对照组例数35 SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）总（-SH）（μmol/L）60.54±10.69*67.82±9.04△▲5.73±1.40*3.98±0.94△▲407.01±93.24*493.64±82.80△▲35 30 57.69±4.61*61.10±5.07△73.15±10.09 6.11±1.16*5.24±1.19△4.41±1.37 384.70±61.63*417.16±63.25△510.47±70.46

3.3 不良反应 两组患者治疗期间均未出现严重不良反应。

4讨 论

研究发现，自由基增加及其代谢产物参与黄褐斑的发病[2，6-7]。抗氧化系统中，SOD、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是细胞内的主要抗氧化酶，巯基（-SH）是还原型谷胱甘肽（GSH）的活性基团，这些物质的含量常用来评价氧化/抗氧化系统的功能。细胞膜上的脂质过氧化物（LPO）容易分解产生MDA，促进脂褐素即色素的生成，当LPO、自由基增多，SOD、CAT、GSH-Px、（-SH）等抗氧化剂含量或活性降低，不能有效发挥协同作用清除MDA等氧化产物，自由基堆积，氧化/抗氧化系统失衡，导致酪氨酸酶活化，黑素细胞功能活跃，黑素生成增加，引起皮肤色素沉着。Havva 等[6]检测55 例黄褐斑患者血清Cu/Zn-SOD 和GSH-Px 的酶活性、MDA、NO、蛋白羰基水平，结果显示患者Cu/Zn-SOD 和GSH-Px 酶活性增高，但明显低于正常对照组、MDA、NO 高于对照组，蛋白羰基水平低于对照组，张慧[7]检测90 例黄褐斑患者血清SOD、MDA、GSH-Px、晚期氧化蛋白产物（AOPP），结果显示黄褐斑患者氧自由基和TLRs/MYD88 水平与患者病情和治疗效果密切相关，以上研究均表明黄褐斑患者体内存在氧化应激损伤。本研究对两组黄褐斑患者及正常对照组血清SOD、MDA、总（-SH）含量进行检测，SOD、总（-SH）含量明显低于正常对照组，MDA 含量显著高于正常对照组，表明黄褐斑患者体内存在氧化/抗氧化失衡，与上述研究结果相符，提示皮肤色素代谢障碍与氧化应激损伤有关。

药理研究证实，甘草、川芎、泽泻、当归可抑制酪氨酸酶活性，减少黑素细胞增殖，川芎、当归对酪氨酸酶活性有双向调节作用，山茱萸、枳壳、白芍等均对酪氨酸酶有不同程度的抑制作用，山萸肉、当归对多巴自动氧化生成黑素具有显著抑制作用[8-10]。李根林等[11]研究表明，丹皮、地黄、当归均有不同程度的体外清除自由基能力。本研究结果显示，疏肝补肾汤治疗后患者血清SOD、总（-SH）含量均明显升高，MDA含量明显降低，表明疏肝补肾法可能通过增加SOD、总（-SH）含量，改善患者的氧化应激状态，加速清除MDA 等氧自由基代谢产物来调节黑素代谢。