基于尿pH 研究麻黄对高尿酸血症模型大鼠血尿酸的影响

应帅兵 黄继勇

高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）是以血尿酸（serum uric acid，SUA）水平升高为特征的代谢性疾病，是痛风、高血压、高血脂、糖尿病和代谢综合征等病的独立危险因素[1-2]。常用药物别嘌醇、非布司他、苯溴马隆等控制尿酸水平不仅存在长期用药的管理问题，更有皮肤黏膜、消化系统、肝肾功能损害等严重的不良反应[3]。中药穿山龙、车前草等均有降尿酸作用，但其降尿酸水平有限[4-5]。麻黄辛温解表，具有宣肺利水功效。黄柏善清下焦湿热，具有泻肾功效。本研究通过灌胃次黄嘌呤（hypoxanthine，HX）和腹腔注射氧嗪酸钾（oteracil potassium，OP）联合法建立HUA 模型，并予麻黄、黄柏水煎液干预，与别嘌醇进行比较，以尿pH 和肾功能变化为切入点，评估麻黄及黄柏降尿酸的效果及其机制，报道如下。

1 实验材料

1.1 动 物 健康雄性SD 大鼠30 只，5 周龄，体质量（200±20）g，购自上海斯莱克有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2017-0005，合格证号：0345203，饲养于浙江中医药大学动物实验中心，许可证号：SYXK（浙）2018-0012，饲养环境：全封闭隔离饲养，温度范围20℃～25℃，相对湿度范围40%～60%，每天光照12h。本实验符合动物实验伦理相关要求（实验动物管理与伦理审查决议编号：ZSLL-2018-036）。

1.2 主要药品与试剂 次黄嘌呤（Amresco 公司，批号20180121），氧嗪酸钾（Sigma 公司，批号S27869-095），麻黄和黄柏（浙江中医药大学中药饮片厂，批号20180310），别嘌醇片（重庆科瑞制药，批号H50020455，规格：0.1g/片），尿酸测定试剂盒、肌酐测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20180314、20180321）；

1.3 主要仪器 多功能酶标仪；pH 计；日立7020 全自动生化分析仪（日本日立公司产品）。

2 实验方法

2.1 药物混悬液配置 HX 混悬液：HX 溶于3%可溶性淀粉溶液配置成25mg/mL 混悬液，OP 混悬液：OP 溶于生理盐水配置成80mg/mL 混悬液；别嘌醇片混悬液：取别嘌醇片溶于无菌蒸馏水配置成1mg/mL；中药水煎液：取麻黄、黄柏各100g，麻黄水煎液浓缩至2g/mL，使用时蒸馏水稀释至0.05g/mL，黄柏水煎液浓缩至0.1g/mL，使用时用蒸馏水稀释至0.1g/mL。置冰箱内保存。

2.2 模型制备及处理 大鼠适应性养殖1 周后按随机数字法分为正常组、模型组、麻黄组（0.5g/kg）、黄柏组（1.0g/kg）、别嘌醇组（200mg/kg），每组6 只。所有大鼠均予基础饲料，自由采食饮水。除正常组外，其余各组大鼠选用尿酸前体物质HX 和尿酸酶抑制剂OP 联合建立HUA 模型[6]，每间隔24h 灌服HX 500mg·kg-1·d-1，腹腔注射OP 200mg·kg-1·d-1，连续灌胃1 周后建立HUA 模型。模型标准：（1）精神状态：精神不振，闭眼发呆；（2）外形：皮毛松乱、脱落，无光泽，皮肤灰污；（3）SUA：造模第7 天，给药6h 后内眦静脉采血，3500r/min 离心15min，取血清测定SUA，与正常组比较SUA 水平检验造模成功与否[7]。造模成功后，除正常组外各组继续灌胃HX 和腹腔注射OP，以60kg 体质量成人用量麻黄6g，黄柏12g 换算大鼠生药给药剂量分别为0.5g·kg-1·d-1和1.0g·kg-1·d-1，别嘌醇给药剂量为200mg·kg-1·d-1。按20mL/kg 灌胃量配置不同浓度的药物：别嘌醇组2mg/mL；麻黄组浓度0.05g/mL，黄柏组0.1g/mL；同时正常组和模型组予以20mL·kg-1·d-1蒸馏水灌胃。各组大鼠分笼饲养，给药时间1 周，每天固定时间段内进行灌胃操作，期间所有大鼠标准饮食，自由饮水。

2.3 指标检测 （1）一般情况：每天观察各组大鼠毛色、体质量（body weight，BW）、饮食、体态、灵敏度和精神状况；（2）肝脏指数（liver index，LI）、肾脏指数（kidney index，KI）：禁食24h 后称重，在10%水合氯醛按0.3mL/100g 体质量标准行腹腔注射麻醉，解剖腹腔分离大鼠左侧肾脏，于肾门处剪断肾蒂，快速剥离肾脏包膜后以滤纸吸干并称重，计算KI；分离大鼠肝脏，滤纸吸干称重，计算LI。KI=[肾脏质量（g）/体质量（g）]×100%，LI=[肝脏质量（g）/体质量（g）]×100%；（3）生化指标SUA 和SCr 检测：经腹主动脉收集血液标本，离心取血清，酶比色法SUA 测定，具体操作步骤按试剂盒说明进行；肌氨酸氧化酶法测定SCr，具体操作步骤按试剂盒说明进行；（4）尿量和尿液pH：处死前24h 将大鼠放入代谢笼，禁食收集尿液，离心取上清液用pH 计测定尿pH。

2.4 统计学方法 应用SPSS19.0 统计软件进行统计学分析，所有数据先进行正态性检验和方差齐性检验，正态分布及满足方差齐性的计量资料以均数±标准差（s） 表示，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），不符合条件数据进行非参数检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组大鼠一般情况、BW、KI 及LI 比较 正常组大鼠精神状态良好、毛色光泽、尿量正常，粪便成麦粒状，模型组大鼠在实验期间均表现出精神萎靡、毛发无光泽易脱落、多尿、便稀等症状，治疗组有类似表现。造模前各组大鼠体质量差异无统计学意义（P＞0.05），2 周后，与正常组比较，各组大鼠BW 增长缓慢。与正常组比较，模型组和别嘌醇组大鼠KI 较大（P＜0.05），麻黄组和黄柏组大鼠KI 明显偏大（P＜0.01）。与模型组比较，麻黄组大鼠KI 较大（P＜0.05），黄柏组和别嘌醇组大鼠差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠LI 差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠BW，KI 及LI 比较（%

表1 各组大鼠BW，KI 及LI 比较（%

注：与正常组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05；BW：体质量；KI：肾脏指数；LI：肝脏指数

组别正常组模型组别嘌醇组麻黄组黄柏组鼠数6 6 6 6 6 BW（g）222.50±6.89 198.67±17.2△△205.33±10.23△196.67±15.06△△204.67±5.65△KI 0.90±0.05 1.10±0.07△1.07±0.04△1.28±0.17△△*1.18±0.14△△LI 3.27±0.12 3.28±0.28 3.23±0.14 3.30±0.33 3.24±0.30

3.2 各组大鼠SUA 和SCr 水平比较 与正常组大鼠比较，模型组大鼠SUA 水平明显升高（P＜0.01)，别嘌醇组、麻黄组和黄柏组大鼠差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组大鼠比较，别嘌醇组、麻黄组及黄柏组大鼠SUA 水平明显降低，麻黄组大鼠降尿酸效果与别嘌醇组、黄柏组大鼠比较差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠SCr 差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 各组大鼠SUA 和SCr 水平比较（

表2 各组大鼠SUA 和SCr 水平比较（

注：与正常组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01；SUA：血清尿酸；SCr 血清肌酐

组别正常组模型组别嘌醇组麻黄组黄柏组鼠数6 6 6 6 6 SUA（mmol/L）40.66±16.77 77.96±19.40△△46.89±9.90**42.05±8.23**51.13±13.86**SCr（μmol/L）59.41±28.00 75.61±7.07 65.76±9.85 70.75±6.81 88.00±10.90

3.3 各组大鼠尿量和尿pH 比较 各组代谢笼收集24h 尿液外观与气味比较无明显差别。与正常组比较，各组大鼠尿量均明显增加（P＜0.01）。与模型组比较，各组大鼠尿量差异无统计学意义（P＞0.05）。经pH计测定各组大鼠尿pH：与正常组比较，别嘌醇组和黄柏组大鼠尿pH 增加呈碱性（P＜0.05），麻黄组大鼠尿pH 增加显著（P＜0.01）。与模型组比较，麻黄组大鼠尿pH 较高（P＜0.05），其余各组大鼠尿pH 差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 各组大鼠尿量和尿pH 水平比较

表3 各组大鼠尿量和尿pH 水平比较

注：与正常组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05

组别正常组模型组别嘌醇组麻黄组黄柏组鼠数6 6 6 6 6尿量（mL）7.00±2.30 29.50±5.25△△31.17±15.37△△26.83±15.13△△34.33±4.27△△尿pH 值6.52±0.92 6.82±0.40 7.55±0.83△7.67±0.58△△*7.63±0.73△

4 讨 论

HUA 病机与高脂血症、代谢综合征相似，多为痰浊所致，与水液代谢失常有关。HUA 治法以祛邪通络为主，用药贵在宣通疏泄。临床上使用麻黄连翘赤小豆汤治疗HUA[8]。麻黄生物碱（如：LEP、DPEP、LMEP）是君药麻黄发挥治疗效果的必需活性成分[9]。药理研究表明，麻黄碱和伪麻黄碱通过降低IL-21 水平减轻肾小管上皮细胞损伤，通过改善胰岛素抵抗，代谢综合征等途径发挥降血糖、降血脂和抗氧化作用[10-11]。本实验结果显示，单味麻黄可以通过碱化尿液发挥降低HUA 大鼠SUA 水平的作用，且效果与别嘌醇和黄柏差异无统计学意义。本实验麻黄用量选取临床常用剂量6g，探究不同浓度麻黄对尿酸的效果具有巨大潜力。

中药治疗HUA 的机制多从黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）尿酸转运蛋白1（uric acid transporters，URAT1）入手，如土茯苓根茎，虎杖，川芎和姜黄抑制XO 的活性减少尿酸生成，而山药，栀子和草本植物通过调节URAT1 的表达影响尿酸的重吸收[5，12-18]。临床使用碳酸氢钠和枸橼酸钠药物调节尿pH 而增加尿酸溶解，进而抑制尿酸重吸收，但过度碱化可导致磷酸钙、碳酸钙等结石形成，因此调节尿pH 在适当范围内对于增加尿酸排泄和预防尿酸性肾结石具有重要意义。已有研究表明，黄柏可以降低SUA 水平，其机制与抑制URAT1 和其mRNA 表达水平，抑制小鼠肝脏XO 活性相关[19]。本实验结果显示，黄柏降尿酸的效果与既往研究结果一致。实验结果还显示，黄柏组尿pH 与模型组无显著差异，麻黄组尿pH 大于模型组，说明药物影响尿酸代谢与碱化尿液有关，而尿液pH 范围与增加尿酸排泄的关系需进一步研究。

SUA 升高同样可引起肾脏病变，持续尿酸钠晶体沉积于肾小管—间质可引起尿酸性肾病[20]。本实验结果显示，除正常组外各组均有不同程度的肾脏肉眼改变，肾脏表面出现边界清楚，形状不规则的白色斑块，与正常组比较各组KI 升高，因此药物干预对于肾脏病变有一定的影响。

本实验结果显示，麻黄可以显著降低SUA 水平，且作用效果较别嘌醇与黄柏无显著差异，其机制可能与碱化尿液有关。