反相高效液相色谱法测定盐酸萘甲唑啉滴鼻液有关物质

2019-08-22司孝清黄庭亮

科技与创新 2019年15期

司孝清，黄庭亮

司孝清，黄庭亮

（广东恒健制药有限公司，广东江门 529040）

针对盐酸萘甲唑啉滴鼻液有关物质使用反相高效液相色谱法进行测定，色谱柱采用Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为辛烷磺酸钠溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸钠，搅拌溶解；流速、柱温以及检验波长分别设置为1.0 mL/min、40 ℃、280 nm。结果表明，该色谱条件下，萘甲唑啉峰与各杂质峰之间分离良好，各已知杂质峰面积与浓度呈良好线性关系，回收率良好。所用测定方法操作较为简便快捷，且灵敏度与准确度相对较高，可用于产品质量控制。

盐酸萘甲唑啉；反相高效液相色谱法；鼻粘膜；检测器

盐酸萘甲唑啉属于咪唑啉类的拟交感神经药，是广泛用于眼和鼻黏膜的减充血剂，是一种有效的作用于结膜小动脉α肾上腺素能受体的血管收缩剂。当应用于黏膜时，萘甲唑啉引起血管收缩，从而达到迅速和延长减少肿胀和结膜充血的作用，广泛用于成人过敏性及炎症性鼻充血、急慢性鼻炎。中国药典2015版（ChP2015）收载原料、滴眼液及滴鼻液，美国药典40版（USP40）也有收载，欧洲药典9.0版（EP9.0）收载原料。ChP2015萘甲唑啉滴鼻液无有关物质的检测，使用反相液相色谱法对USP40和EP9.0原料中存在的有关物质实施检查，因此本研究针对盐酸萘甲唑啉滴鼻液相关物测定方法的建立，主要以USP40和EP9.0盐酸萘甲唑啉有关物质的测定方法作为参考。

1 仪器与试药

检测仪器有SARTORIUS BT125D 型电子天平，LC-2030岛津二极管阵列检测器，LC-2030四元低压泵，Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱。盐酸萘甲唑啉对照品（50 mg/支）购自抚生实业有限公司，乙腈购自天津市科密欧化学试剂有限公司，冰醋酸（分析纯，广州化学试剂厂生产），辛烷磺酸钠（离子对试剂，国药集团化学试剂有限公司生产），萘甲唑啉杂质A与D购自上海甄准生物科技有限公司、杂质B生产厂家为深圳振强生物技术有限公司、杂质C生产厂家为苏州爱玛特生物科技有限公司，盐酸萘甲唑啉滴鼻液生产厂家为广东恒建制药有限公司。

2 色谱条件

色谱柱：Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

流动相：流动相为辛烷磺酸钠溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸钠，搅拌溶解；流速、柱温以及检验波长分别设置为1.0 mL/min、40 ℃、280 nm，进样量为10 μL。

溶剂：流动相。杂质A峰与萘甲唑啉峰应当保持1.5以上的分离度。

3 方法与结果

3.1 溶液的制备

选择盐酸萘甲唑啉滴鼻液作为本次研究的供试品溶液。

3.2 已知杂质的分离

分别在杂质A、B、C、D对照品中以及盐酸萘甲唑啉对照品进行适量称取，在加入流动相后将杂志对照品与盐酸萘甲唑啉对照品稀释成每含有1 mg盐酸萘甲唑啉，各杂质含量为5 μg/mL的混合溶液，进样10 μL，记录色谱图。

结果显示，各已知杂质峰之间以及各已知杂质峰与主峰之间均能达到基线分离，如图1所示。

图1 已知杂质分离色谱图

3.3 专属性试验

在空白辅料以及供试品溶液各分别取10 μL进行进样，并对所形成的色谱图实施记录。结果显示，辅料无干扰。

3.4 破坏试验

取盐酸萘甲唑啉滴鼻液及空白辅料溶液，各5份，分别用于光照箱（照度大于等于5 000 Lux，近紫外能量大于等于90 uW/cm2）中光照5 d、质量分数为2%的氢氧化钠溶液60 ℃水浴5 min、5 mol/L盐酸溶液100 ℃水浴2 h、121 ℃高压蒸汽加热30 min、质量分数为3%的H2O2（100 ℃）水浴2 h进行破坏试验。结果表明：萘甲唑啉对碱最不稳定，但各降解产物与萘甲唑啉主峰均有良好的分离，空白辅料无干扰。

3.5 线性和范围

精密称取杂质A、B、C、D对照品各适量，用流动相定量稀释成每1 mL分别含杂质A、B、C、D（1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg）的混合溶液，取上述溶液分别进样10 μL，以进样量（μg）为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，结果如下：杂质A曲线方程为=15 741 282.2－28.0，=0.999 9（=5），表明杂质A进样量在0.010 33～0.206 5 μg范围内，与峰面积成良好线性关系；杂质B标准曲线方程为=1 704 244.6－2 102.5，=1.000 0（=5），表明杂质B进样量在0.010 51～0.210 2 μg范围内，与峰面积成良好线性关系；杂质C标准曲线方程为=1 685 876.2－1 238.9，=0.999 9（=5），表明杂质C进样量在0.010 47～0.209 3 μg范围内，与峰面积成良好线性关系；杂质D标准曲线方程为=1 716 326.4+535.0，=0.999 9（=5），表明杂质D进样量在0.010 56～0.211 2 μg范围内，与峰面积成良好线性关系；萘甲唑啉标准曲线方程为=1 596 106.6－114.3，=0.999 9（=5），表明萘甲唑啉进样量范围在0.010 41～0.208 3 μg，与峰面积能够形成较为良好的线性关系。

3.6 检测限

精密称取适量的盐酸萘甲唑啉对照品以及各杂质对照品，使用流动相进行逐级稀释，直至达到约为3倍的信噪比，结果显示，萘甲唑啉检测限为0.14 ng，杂质A检测限为0.12 ng，杂质B检测限为0.22 ng，杂质C检测限为0.52 ng，杂质D检测限为0.15 ng。

3.7 回收率试验

精密称取杂质A、B、C、D对照品各适量，用盐酸萘甲唑啉滴鼻液定量稀释成每1 mL分别含杂质A、B、C、D（1 μg、5 μg、10 μg）的混合溶液，取上述溶液分别进样10 μL，计算回收率。结果显示，杂质A、B、C、D的平均回收率分别为98.0%（=9）、99.8%（=9）、100.6%（=9）、99.8%（=9），方法准确度较高。