鸡白细胞介素4的研究介绍

胡亮亮

（阳信县畜牧兽医局，山东阳信 251800）

1 IL-4的发现

1982年，Maureen Howard等 在研究B细胞mIg的功能时，偶然发现PMA诱导后的EL-4细胞系上清能够显著增强B细胞经抗IgM抗体刺激所引发的增殖反应，因此将上清中这种物质称为B细胞 生长因子。随后，该物质对B细胞的其他功能相继被发现，又被命名为B细胞刺激因子-1，1986 年，在Honjo、Lee和Arai先后克隆了鼠和人的该因子 后，国际将其统一命名为白细胞介素4，大约在同一时间，Grabstein等获得了IL-4的氨基酸序列。Avery等在克隆鸡Th2细胞因子时发现chIL-4，发表了mRNA序列Gallus gallus（AJ621249），由此正式拉开了chIL-4在分子水平上研究的序幕。

2 研究目的与意义

IL-4 是重要的免疫调控分子，具有多种免疫功能，了解chIL-4 在鸡体内的动态变化规律，对 于禽类传染性疾病的诊断、治疗及预后判断具有重要的临床意义。目前尚没有检测chIL-4 蛋白的 试剂盒，主要是通过各种方法检测chIL-4 mRNA，但仅仅在mRNA 水平上进行评估，还不能反 映出chIL-4 的实际水平。目前，虽然有检测人和小鼠IL-4 的商品化试剂盒，但是由于chIL-4与 人和小鼠IL-4 的氨基酸同源性仅分别为22.48%和21.23%，所以人和小鼠IL-4 检测试剂盒并不能 用于chIL-4 的检测。为了解决这一问题，本研究研制了检测chIL-4 的双抗体夹心ELISA，为科 学研究中chIL-4 的检测提供方法，也为进一步研究chIL-4 的免疫学功能奠定基础，具有重要的应用价值。

3 研究内容及技术路线

3.1 研究内容

3.2 chIL-4 单克隆抗体的制备及鉴定

将成熟chIL-4 基因亚克隆到原核表达载体上，然后在Ecoil BL21 中诱导重组蛋白的表达，提 取包涵体并复性。用复性的蛋白免疫小鼠，经过4 次免疫后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合，经过3 次筛选与亚克隆后，最终得到稳定分泌抗chIL-4 单抗的杂交瘤细胞株。将杂交瘤细胞注入到小鼠腹腔内，从腹水中纯化出单克隆抗体，然后对抗体的亚型、亲和力、特异性进行鉴定，并分析其可能的抗原识别区。

3.3 chIL-4 双抗体夹心ELISA 检测方法的建立

对获得的单抗进行生物素标记，将单抗依次作为ELISA 的捕获抗体、与其识别不同抗原表位 的生物素化单抗则作为检测抗体，筛选出最佳抗体对。然后通过一系列条件的优化，建立chIL-4 双抗体夹心ELISA，并对该检测方法的特异性和实用性进行初步评价。

3.4 技术路线