奶牛绿脓杆菌的分离与鉴定

买尔哈巴·吾恩阿里比

（伊宁市农业农村局动物卫生监督所，新疆伊宁 835000）

1 发病情况及临床症状

2019年5月15日，伊宁市某奶牛场一头奶牛于清晨4时开始阴门流出大量血液，但牛无临产症状，兽医对牛进行了引产，该牛产下一母犊为死胎，产后该牛饮食欲废绝，至5月14日胎衣未下，且阴门流出红褐色血液。14日晚12时该牛出现严重的呼吸困难，且有疼痛表现，兽医对牛进行了强心补液及抗生素治疗，在输液过程中牛因心衰竭呼吸困难而死亡。

2 剖检变化

肺、子宫子叶严重感染，出血性坏死，颜色发黑，切开肺流出黑褐色的液体，小肠黏膜充血、出血严重。其他器官基本正常。

3 病料采集

无菌采取病死牛的病理变化明显的肺、子宫子叶等器官进行分离鉴定。

4 病原菌分类与鉴定

4.1 病原菌的分离培养

4.1.1 组织涂片

取病牛的肺及子宫子叶组织分别涂片，革兰氏、瑞特氏、碱性美蓝染色，镜检。在肺组织革兰氏染色涂片中可见大量两端钝圆，无芽孢及荚膜、单在或成对革兰氏阴性中等大小杆菌，美兰染色可见着色不均的颗粒或两端浓染中等杆菌。子宫子叶组织革兰氏染色可见大量革兰氏阴性大、中等杆菌，革兰氏阳性球菌及大杆菌[1]。

4.1.2 增菌培养

将采集的肺、子宫子叶组织分别接种于普通肉汤、厌气肝汤，37℃培养24小时，观察生长情况。结果肺组织的肉汤培养物浑浊、在表面形成初期为绿色后期变成淡褐色的薄膜，培养物发绿，染色镜检培养物可见革兰氏阴性中等杆菌。在对子宫子叶厌气肝汤培养物的染色镜检中可见大量革兰氏阴性大、中等杆菌，革兰氏阳性球菌及大杆菌。

4.1.3 纯培养及分离培养

取肺组织肉汤培养物在普通培养基上划线进行纯培养。取子叶培养物在鲜血琼脂上用焦性没食子酸法进行厌氧纯培养和在普通琼脂上划线进行需氧菌的纯培养。染色镜检，可见四株菌，即革兰氏阴性大，中等杆菌，革兰氏阳性球菌及大杆菌。无菌取上述四株菌的单个菌落分别接种于普通琼脂，鲜血琼脂，SS琼脂，普通肉汤，厌气肝汤，37°C培养24小时，肺组织的培养物在普通琼脂上长出，较大、光滑、扁平、湿润、边缘整齐的菌落，培养物发绿色，肉汤培养物浑浊呈黄绿色。子叶培养物在SS培养基上长出粉红色、较大、隆起边缘整齐的菌落。在普通培养基上长出针尖大小的灰白色菌落，在鲜血培养基上进行的厌氧培养长出不容血且边缘不整齐的较大菌落。

4.2 生化鉴定

取上述致死小白鼠菌株的普通琼脂培养物进行氧化酶实验，结果为阴性。取培养物接种ATB EXPRESSION细菌自动鉴定及药敏测试仪ID32E试条上37℃培养24h，上机鉴定，其结果见表1。

表1

5 防制

（1）加强饲养管理，立即停止饲喂发霉麸皮，避免因不断摄入发霉饲料产生的有毒物质引起中毒，为绿脓杆菌的感染提供机会。

（2）牛舍内应用福尔马林彻底消毒，搞好环境卫生。

（3）本实验室的药敏结果显示，该菌对环丙沙星最敏感，其次为羧苄青霉素、诺氟沙星。氧氟沙星，庆大霉素效果不明显。对头孢拉定、氨苄西林、青霉素等药物不敏感。