有机硒与无机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响研究*

裴冰倩，郭家栋，汤昕明，王术荣

（1.山西农业大学食品科学与工程学院，山西 太谷 030801；2.中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650223）

土壤缺硒属于世界性的问题，在我国就有许多省区存在不同程度的土壤缺硒问题。尤其是从东北到西南的15个省（市、自治区）的部分地区，构成了“贫硒地带”，而苏、皖、鲁、甘、宁等省（自治区）的部分地区也存在相对贫硒现象[1]。硒是人体必需的微量元素之一，人体缺硒会导致克山病、癌症、心血管病、白内障、糖尿病、艾滋病等40余种疾病发病率的上升[2]。目前市面上出现了多种富硒保健食品，但其价格昂贵，难以被广大普通消费者所接受。因此，开发出经济、方便、适合直接食用的富硒产品迫在眉睫[3-4]。

近几年，富硒苹果[5]、富硒葡萄[6]、富硒樱桃[7]等富硒农产品有了较深入研究与开发。榆黄蘑（Pleurotus citrinopileatus Sing.）味道鲜美，营养价值极高，含有蛋白质、维生素和矿物质等营养成分，其中氨基酸含量尤为丰富，属高营养、低热量食品。长期食用，有降低血压、抗癌、增强免疫力的功效，是老年人心血管疾病患者和肥胖症患者的理想保健食品[8]。以榆黄蘑为富硒载体，培养富硒榆黄蘑，可同时发挥硒的作用与其本身固有的营养价值，以及两者协同的生理作用[9]。本研究以不同浓度有机硒与无机硒对照培养榆黄蘑菌丝，探究榆黄蘑的耐硒能力及其适宜的硒生长浓度，以期为富硒榆黄蘑的科学化、规模化和市场化栽培提供理论依据。

1 试验材料

1.1 试验菌株

榆黄蘑菌株由山西农业大学食用菌中心提供。

1.2 主要试剂

硒代蛋氨酸，购自上海生工生物工程有限公司；亚硒酸钠，购自山东西亚化学工业有限公司；其他试剂（葡萄糖、琼脂、KH2PO4、MgSO4）等均为常规试剂。

2 试验方法

2.1 菌种活化和培养

将在4℃冰箱冷藏培养的斜面母种取出，移接到试管中，置于25℃恒温培养箱中培养3 d。将试管中的活化菌丝移接至PDA平板培养基上，放置于25℃恒温培养箱中培养，进一步扩大培养、活化，以供后续试验使用[10]。

2.2 硒标准溶液制备

2.2.1 无机硒标准液

称取干燥的亚硒酸钠2.194 g，加蒸馏水定容至100 mL，得到10 mg·mL-1的标准储备液备用。

2.2.2 有机硒标准液

称取硒代蛋氨酸2.482 g，加蒸馏水定容至1 000 mL，得到1.00 mg·mL-1的标准储备液备用。

2.3 制备不同浓度无机硒、有机硒的PDA培养基

土豆洗净后去皮切块，称取土豆200 g放入锅中，加入蒸馏水1 000 mL，在电炉上加热至沸腾后继续加热20 min，用8层纱布过滤，滤去土豆渣，得到的滤液依次加入琼脂20 g、葡萄糖20 g、蛋白胨1.50 g、KH2PO43.75 g、MgSO41.80 g，搅拌至充分溶解后，加水补充至1 000 mL。取6个大小相同的锥形瓶，分别移取0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL的亚硒酸钠标准溶液加入5个锥形瓶中，放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30 min，用PDA培养基定容到100 mL，分别制成 10 mg·L-1、 20 mg·L-1、40 mg·L-1、60 mg·L-1、80 mg·L-1的不同浓度培养基。以不加无机硒的PDA培养基作为对照组。

同理，以上述方法分别制备成0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1、5.00 mg·L-1的硒代蛋氨酸有机硒培养基[11]。以不加有机硒的PDA培养基作为对照。

2.4 接种和培养

在超净工作台中将活化好的平板菌种用打孔器打孔，选取同一生长周期的菌丝接入到上述试验组和对照组中。每个浓度重复3次，进行平行对照。置入25℃恒温培养箱进行培养，每3天观察1次，并用十字划线法准确测量并记录菌落直径。

2.5 数据处理

将测量的数据采用SPSS 17.0软件进行差异显著性分析，并采用Origin 6.1软件绘图。

3 结果与分析

3.1 不同浓度有机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响

不同浓度有机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响情况见图1。

图1 不同浓度有机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响Fig.1 Effect of organic selenium of different concentration on the growth of mycelium of Pleurotus citrinopileatus

由图1可知，有机硒浓度为0.10 mg·L-1的试验组，菌丝生长速度与不添加有机硒的对照组差别不大。有机硒浓度为 0.05 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1、5.00 mg·L-1的试验组，菌丝生长速度明显低于浓度为0.10 mg·L-1的试验组和不添加有机硒的对照组，长势也差于后者。不同浓度有机硒对榆黄蘑菌丝体生长速度的影响情况见表1。

表1 不同浓度有机硒对榆黄蘑菌丝体生长速度的影响Tab.1 Effect of organic selenium of different concentration on the growth rate of mycelium of Pleurotus citrinopileatus

由表1可知，有机硒浓度达到0.10 mg·L-1时菌丝长势较好，生长速度明显加快，表现为菌丝洁白、浓密、粗壮，长势旺盛；有机硒浓度为0.05 mg·L-1时，对菌丝生长表现出抑制作用，硒的浓度为5.00 mg·L-1时抑制作用最明显，生长速度最慢，后期菌丝几乎停止生长。所以硒浓度为0.10 mg·L-1时，利于榆黄蘑菌丝生长培养。

3.2 不同浓度无机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响

不同浓度无机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响情况见图2。

图2 不同浓度无机硒对榆黄蘑菌丝生长的影响Fig.2 Effect of inorganic selenium of different concentration on the growth of mycelium of Pleurotus citrinopileatus

由图2可知，与不添加无机硒的对照组比较，添加不同浓度的无机硒后，菌丝生长速度均受到不同程度的抑制。与硒浓度为 40 mg·L-1、60 mg·L-1、80 mg·L-1的试验组比较，硒浓度为10 mg·L-1~20 mg·L-1时，菌丝长势相对较好。不同浓度无机硒对榆黄蘑菌丝体生长速度的影响情况见表2。

表2 不同浓度无机硒对榆黄蘑菌丝体生长速度的影响Tab.2 Effect of inorganic selenium of different concentration on the growth rate of mycelium of Pleurotus citrinopileatus

由表2可知，添加无机硒后，菌丝生长均受到抑制，当无机硒浓度为10 mg·L-1~20 mg·L-1时，菌丝长势相对较好，菌丝浓厚、洁白、健壮。当无机硒浓度为 40 mg·L-1、60 mg·L-1、80 mg·L-1时，菌丝生长速度缓慢，表现出较强的抑制作用。

4 结论

综上所述，当有机硒浓度为0.10 mg·L-1时，菌丝生长与对照组菌丝生长情况相似，其余浓度均对榆黄蘑菌丝生长有较明显抑制作用；当无机硒浓度为10 mg·L-1~20 mg·L-1时，菌丝生长较好，但相较于对照组菌丝生长情况差，所有浓度均表现为抑制作用。黄春燕等[12]对高温富硒平菇栽培技术研究表明，在硒（Na2SeO3）浓度为80 mg·kg-1~160 mg·kg-1的PDA固体培养基上，菌丝生长良好，当硒浓度超过240 mg·kg-1时，菌丝生长受抑制。张崴等[13]在研究硒对北虫草菌丝体及子实体生长影响作用发现，菌丝体的耐硒（Na2SeO3）能力为9 mg·L-1，在硒浓度为4.5 mg·L-1的培养液中，菌丝体长势较好；培养液硒浓度高于20 mg·L-1时，菌丝体无法生长。本研究表明有机硒（C5H11NO2Se） 浓度为0.10 mg·L-1时，对榆黄蘑菌丝生长较适宜，无机硒（Na2SeO3）浓度为10 mg·L-1~20 mg·L-1时，对榆黄蘑菌丝生长较为适宜。食用菌菌丝的富硒能力具有很大差异，这可能与试验所用硒原料、实际硒浓度以及食用菌种类不同有关。本研究可为榆黄蘑菌丝富硒培养和栽培提供一定的科学依据。