鸡传染性支气管炎病毒QX株感染鸡的组织病理学研究

李晓梅

摘  要：目前鸡传染性支气管炎病毒（IBV）QX基因型是我国主要流行的一种IBV。为充分了解该基因型毒株对宿主相关器官的病理损伤情况，特将IBV-QX 株人工感染发病，在临床明显期（9d）采集试验鸡的心、肝、脾、脑、胰、腺胃、十二指肠、法氏囊和胸腺进行病理学分析。结果显示：发病鸡临床症状明显，出现典型的“花斑肾”;病理学分析得出，发病鸡心肌细胞颗粒变性;肝细胞轻度脂肪变性;脾脏少量淋巴细胞坏死，并且有少量异嗜性粒细胞浸润;脑膜充血;胰腺细胞颗粒变性、坏死;腺胃上皮细胞变性坏死，固有层炎性细胞浸润;十二指肠未见明显病变;法氏囊大部分淋巴滤泡呈现空泡化，残留滤泡淋巴细胞极度减少;胸腺皮质部坏死淋巴细胞核浓缩深染。本试验简明地阐述了IBV-QX 株对传统上的非靶器官的病理损伤，有助于进一步揭示IBV的致病机制。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒;QX基因型;病理变化

中图分类号：S858.315.3     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2019）07-0009-04

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，AIB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一种高度接触性传染病。IBV感染后的鸡主要出现呼吸道、肾脏和生殖道等部位的病理变化，致使感染发病鸡饲料报酬比降低、产蛋率下降而造成巨大经济损失[1]。IBV对所有品种、各年龄段和不同性别的鸡均有易感性，特别是4周龄前的雏鸡最为易感发病[2]。陈良珂等人对我国17个省市的390株IBV研究发现，QX基因型占比55%，临床分型肾型占比82%。由此可知，我国主要流行的IBV为QX基因型，其主要造成肾脏部位病变[3]。1962年美国学者首次系统地对肾型IBV进行了描述[4]，随后世界各地陆续报道肾脏病变的分离株;1995年我国山东和江苏两省报道了临床表现型为生殖型的病例[5]，被感染预备母鸡或产蛋母鸡生殖道出现病变，造成产蛋率下降、产畸形蛋或软壳蛋，甚至出现卵黄性腹膜炎，未表现明显临床症状的发病鸡停止产蛋，俗称“假母鸡”。IBV属单股正链含包膜的RNA病毒，在复制过程中很容易发生基因突变，此外，IBV转录过程不连续的特点使其在复制时更容易出现较高频率的基因插入、基因缺失和基因重组[6，7]。研究表明，IBV的S蛋白决定宿主选择和组织嗜性及血清型[8]。但有学者将IBV的动态分布与病理变化联系起来，发现各基因型的IBV在器官中的病毒载量与病理损伤存在一定的相关性[9]。现已明确IBV可对宿主的呼吸道和肾脏等主要靶器官造成明显的病理损伤，但很少报道该病毒对其它器官组织的损伤情况[10，11]。为此，本試验就人工感染IBV后的临床症状明显期采集发病鸡的相关组织制作病理切片，以探究IBV对宿主相关器官的损伤情况，进一步为IBV的致病机理研究提供素材。

1  材料与方法

1.1  试验材料

1.1.1  病毒株  IBV-QX毒株由山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室惠赠。

1.1.2  试验动物  9日龄SPF鸡胚购自山东昊泰实验动物繁育有限公司，用于病毒复苏。8日龄SPF雏鸡，雌雄不限，购自济南斯派福瑞禽业科技有限公司。

1.2  试验方法

1.2.1  IBV-QX株的EID50测定  首先，将IBV-QX株用9日龄鸡胚连传3代以复壮病毒;然后，取45枚9日龄SPF鸡胚，用含50000U/ml丁胺卡那的PBS对收集的鸡胚尿囊液进行10倍梯度稀释，每个梯度对应5枚鸡胚，尿囊腔接种0.1ml/胚，共设置8个梯度;对照组接入等剂量的灭菌PBS。接毒后，早晚各照胚1次，弃去24h内死胚，24h后死胚置于4℃保存，144h后统一收胚，按照相关公式计算出该分离株的EID50，并观察鸡胚发育情况。

1.2.2  人工感染发病与样品采集  50只8日龄SPF雏鸡分养在2个动物房的隔离器内，试验组和空白对照组各25只。试验组鸡接毒剂量为0.1ml（滴鼻，病毒滴度约为1.5×103 EID50/ml），空白对照组用等量灭菌PBS处理。两组鸡均在攻毒后9d随机取5只剖检，观察组织器官病变情况并采集心、肝、脾、脑、胰、腺胃、十二指肠、法氏囊和胸腺，用4%中性福尔马林溶液固定后制作病理组织切片。15d时统一处理余下试验鸡。

2  结果与分析

2.1  IBV-QX株的EID50测定与胚胎发育情况  通过将IBV-QX株接种鸡胚，测定其EID50，该过程发现鸡胚发育明显受到病毒抑制，出现死胚、侏儒胚等现象。144h后统一收胚，经相关公式计算得出IBV-QX株半数感染量为1.0×106.25EID50/0.1ml。图1展示的是鸡胚接毒144h后空白对照组与感染病毒组的鸡胚发育情况。

2.2  发病鸡的临床症状与剖检变化  人工感染IBV-QX株发病，试验组发病鸡出现IBV感染后的典型临床症状，羽毛蓬乱，精神状态不佳（图2-A）;剖检时可见腹腔有大量泡沫性积液（图2-B）;肾脏肿大充血，呈现典型“花斑肾”（图2-C）;病死鸡的肾脏病变严重，坏死（图2-D）。试验过程中攻毒组在7d时死亡1只，8d时死亡3只，10d时死亡1只，对照组无上述临床症状，也无死亡。

2.3  相关器官病理变化  采集临床症状明显期（9d）试验鸡的心、肝、脾、胰、十二指肠、腺胃、脑、法氏囊制作病理切片，在200倍电镜下观察。结果显示，心脏血管充血，心肌细胞颗粒变性;肝细胞轻度脂肪变性;脾脏少量淋巴细胞坏死，并且有少量异嗜性粒细胞浸润;脑膜充血;胰腺细胞颗粒变性、坏死;腺胃上皮细胞变性坏死，固有层炎性细胞浸润;十二指肠未见明显病变;法氏囊大部分淋巴滤泡呈现空泡化，残留滤泡淋巴细胞极度减少;胸腺皮质部坏死，淋巴细胞核浓缩深染。而对照组各器官无明显病理变化。

[10]  BENYEDA Z，SZEREDI L，MATO T，et al. Comparative histopathology and immunohistochemistry of QX-like， Massachusetts and 793/B serotypes of infectious bronchitis virus infection in chickens[J].J Comp Pathol， 2010，143（4）：276-283.

[11]  Z B，T M，T S，et al.Comparison of the pathogenicity of QX-like，M41 bronchitis strains from different pathological conditions[J]. Avian pathology ： journal of the W.V.P.A， 2009， 38（6）：449-456.

[12]  JAKHESARA S J，NATH B，PAL J K，et al. Emergence of a genotype I variant of avian infectious bronchitis virus from Northern part of India[J].Acta Trop， 2018， 183：57-60.

[13]  ZHAO F， ZOU N， WANG F， et al. Analysis of a QX-like avian infectious bronchitis virus genome identified recombination in the region containing the ORF 5a，ORF 5b，and nucleocapsid protein gene sequences[J].Virus Genes，2013， 46（3）：454-464.

[14]  朱國强，王永坤，孙龙生，等.腺胃病变型鸡传染性支气管炎毒株H_（95）的研究[J].扬州大学学报（农业与生命科学版），1996，17（4）： 55-59.

[15]  王玉东，王永玲，张子春，等.鸡腺胃型传染性支气管炎病毒（QX IBV）的分离和鉴定[J].中国动物检疫，1998，（01）：3-5.

[16]  杨丽媛.IBV山西分离株人工感染雏鸡的临床病理学研究及病毒在体内分布的检测[D].太原：山西农业大学，2013.

Abstract：At present，Avian Infectious Bronchitis Virus （IBV） QX genotype is one of the most epidemic IBV in China. In order to understand the pathological damage of this genotypic strain to the related organs of the host，IBV-QX strain was artificially infected.The heart，liver，spleen，brain，pancreas，proventriculus， duodenum，bursa of Fabricius and thymus of the chickens were collected for pathological analysis during the clinical obvious period （9 dpi）.The results showed that the clinical symptoms were obvious and typical "spotted kidney"appeared in the chickens.Pathological analysis showed that the granulosa degeneration of cardiac muscle cells was observed.Mild steatosis of liver cells.There was a small amount of lymphocytic necrosis in the spleen and a small amount of xenotropic infiltration.Meningeal congestion.Granulosa degeneration and necrosis of pancreatic cells.The epithelial cells of proventriculus were degeneration and necrosis，and the inflammatory cells of lamina propria were infiltrated.No obvious lesion was observed in duodenum.Most of the follicles of bursa of Fabricius showed vacuolation，and the lymphocytes of residual follicles decreased extremely.This was a hyperchromatic concentration of necrotic lymphoid nuclei in the thymic cortex.This study briefly described the pathological damage of IBV-QX strain on traditional non-target organs，which was helpful to further reveal the pathogenesis of IBV.

Key Words： Avian Infectious Bronchitis Virus; QX genotype; Pathological changes□