基于无节幼体干重产出的五种产地丰年虫卵的孵化质量分析

李炳乾，张云泽，张 礼，郑秀洁，辛乃宏，杨俊涛，王新磊

(1.中盐工程技术研究院有限公司，天津 300450；2.新疆湖盐工程技术研究中心，新疆 精河 833300)

丰年虫卵是指由丰年虫所产生的休眠卵，其孵化产生的无节幼体约含蛋白质60%、脂肪15%[1]，具有很高的营养价值，是鱼、虾和蟹等幼体极好的饵料[2-5]。现有丰年虫卵的行业标准《SC/T2001-2006》从水分、孵化率和杂质三方面阐述了丰年虫卵的质量和检测方法，并规定了其质量等级。由于目前来自于不同产地的丰年虫卵众多，仅使用水分、孵化率和杂质来评价丰年虫卵的质量越来越显示出其局限性，不能全面客观地反映丰年虫卵的质量。近几年，描述丰年虫卵的质量指标及检测方法越来越多，例如孵化效率、孵化速率、出虫量[6-10]等。国内丰年虫卵交易中，只有极少数用户检测孵化率、孵化效率、孵化速率、水分等指标。目前国内最普遍的检测方法为出虫量[11-16]，即丰年虫卵在规定条件下孵化一定时间(通常为24 h～36 h)后所孵出的无节幼体经分离脱水后的湿重来评价虫卵质量，但湿重法受幼体中水分含量的影响比较大，不能真实反映丰年虫卵的营养价值。丰年虫无节幼体的营养价值取决于丰年虫卵的孵化条件和孵化时间，刚孵化出的无节幼体营养价值最高，孵化后的幼体在水中游动的时间越长，消耗的自身营养越多，虽然个体逐渐变大，但其相对干重越小，营养价值越低。控制丰年虫卵的孵化条件和幼体收获时间能够获得最有营养价值的无节幼体，可以更有效地使用丰年虫卵，降低育苗成本，提高水产幼苗的成活率。

实验选取具有代表性的五个产地的丰年虫卵进行质量评价研究，以丰年虫卵孵化出无节幼体的干物质量来评价丰年虫卵孵化质量，即在特定的时间内，一定重量的丰年虫卵能孵化出无节幼体的干重，以期获得最有营养价值的丰年虫无节幼体。

1 材料与方法

1.1 材料

实验选择五个产地的丰年虫卵作为研究对象，分别是：渤海湾(水分含量14.12%，2016年)、新疆巴里坤(水分含量12.8%，2016年)、新疆艾比湖(水分11.53%，2016年)、西藏双湖(水分含量13.28%，2015年)、俄罗斯库伦达湖(水分含量12.98%，2015年)。

1.2 方法

实验将五种产地的丰年虫卵分别孵化18 h、24 h、36 h、48 h，检测其孵化率、出虫量、无节幼体水分、无节幼体体长。

(1)孵化率检测。将2 g丰年虫卵放入1 L的透明孵化管中孵化，孵化管安放在恒温水浴箱内，孵化管周围采用日光灯连续光照，光照强度在2 000 lx以上，孵化管底部连续充气，保持丰年虫卵在孵化液中均匀分布，孵化一定时间后，从每个孵化管中取样放入样品盘中，总取样体积大于1 000 μL，加入1滴～2滴鲁哥氏碘液，将无节幼体固定并染色。在解剖显微镜下计数每一样品盘中无节幼体的数量(N)及伞状幼体的数量(U)；在每个样品盘中加入一定量的次氯酸钠溶液，待空壳溶解后，在解剖显微镜下记录未孵化的胚胎数(C)。孵化百分率(H)计算如下：

(2)出虫量检测。用40 L自制圆柱圆锥孵化桶(亚克力透明材料)，放入100 g丰年虫卵孵化，孵化结束后，用0.1 mm筛绢收集底部的无节幼体，清洗、滤干、称重。参照5个盐湖丰年虫卵最优孵化条件的研究[12-14]，实验孵化条件见表1。

表1 五种产地丰年虫卵的孵化条件Tab.1 The hatching conditions of Artemia cysts from five origins

注：孵化剂为过氧化钙，试验选用的其中三个产地的丰年虫卵需要加入孵化剂时孵化率最优

(3)无节幼体干物质量检测方法。无节幼体干物质量是在出虫量检测的基础上利用水分分析仪或烘箱来检测无节幼体的水分含量，然后换算其干物质量。

(4)无节幼体水分检测。取5 g～6 g无节幼体用奥豪斯水分分析仪(MB-25)检测(温度参数130 ℃；时间参数：AUTO)。

(5)无节幼体体长检测方法。利用计算机西格图像采集系统测量。

2 结果与分析

2.1 渤海湾丰年虫卵孵化不同时间的指标

渤海湾丰年虫卵孵化特征见表2。从表2可见，渤海湾丰年虫卵在24 h内孵化率已基本到达最高值，且在48 h内稳定。出虫量、无节幼体体长和无节幼体水分随着孵化时间的延长逐渐增加。24 h无节幼体体长达到622.1 μm，48 h达885.3 μm。

表2 100 g渤海湾丰年虫卵孵化特征Tab.2 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Bohai bay

2.2 新疆巴里坤丰年虫卵孵化不同时间的指标

从表3可见新疆巴里坤丰年虫卵在24 h内孵化率就稳定在高值。出虫量、无节幼体体长和无节幼体水分随着孵化时间的延长逐渐增加。24 h无节幼体体长为604.5 μm，48 h达818.8 μm。

表3 100 g新疆巴里坤丰年虫卵孵化特征Tab.3 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Balikun lake of Xinjiang

2.3 新疆艾比湖丰年虫卵孵化不同时间的指标

从表4可见新疆艾比湖丰年虫卵在24 h内孵化率就稳定在高值。出虫量、无节幼体体长和无节幼体水分随着孵化时间的延长逐渐增加。24 h无节幼体体长为555.2 μm，48 h达929.1 μm。

表4 100 g新疆艾比湖丰年虫卵孵化特征Tab.4 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Aibi lake of Xinjiang

2.4 西藏双湖丰年虫卵孵化不同时间的指标

从表5可见西藏双湖丰年虫卵在24 h内孵化率就稳定在高值。出虫量、无节幼体体长和无节幼体水分随着孵化时间的延长逐渐增加。24 h无节幼体体长为585.3 μm，48 h达807.1 μm。

表5 100 g西藏双湖丰年虫卵孵化特征Tab.5 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Shuang lake of Tibet

2.5 俄罗斯库伦达湖丰年虫卵孵化不同时间的指标

从表6可见俄罗斯库伦达湖丰年虫卵在24 h内孵化率就稳定在高值。出虫量、无节幼体体长和无节幼体水分随着孵化时间的延长逐渐增加。24 h无节幼体体长为568.8 μm，48 h达871.2 μm。

表6 100 g俄罗斯库伦达湖丰年虫卵孵化特征Tab.6 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Kulunda lake of Russia

2.6 五种产地的丰年虫卵在孵化不同时间所得无节幼体的干重情况

从表7可见渤海湾、新疆艾比湖、西藏双湖、俄罗斯库伦达湖丰年虫卵在孵化24 h得到的无节幼体干重最多，随着孵化时间延长到36 h，干重损失分别为7.3%、10%、13.5%、24.8%。孵化时间延长到48 h，干重损失分别为23.9%、20.7%、25.1%、27.8%。

新疆巴里坤丰年虫卵在孵化18 h得到无节幼体干重最多，随着孵化时间延长到24 h，干重损失为11.6%；孵化时间延长到36 h，干重损失为15.4%；孵化时间延长到48 h，干重损失为24.1%。

表7 100 g丰年虫卵孵化不同时间所得无节幼体的干重Tab.7 The dry weight (g) of nauplii at different hatching time of 100 g Artemia cysts

注：以上结果为实验用样品所得，仅用于反映干重趋势

3 讨论

3.1 五种产地丰年虫卵孵化得到无节幼体的情况

近年来，国内丰年虫卵的质量是以出虫量(无节幼体湿重)来评价，大部分用户以孵化24 h作为标准，也有的用户以36 h或48 h作为标准。用出虫量作为判断标准有一定的弊端，例如：过滤脱水标准无法统一，无节幼体沥水会因网兜孔径、操作手法等差异而无法达成一致；同时该方法也不能确定不同品系的丰年虫卵的真实营养成分含量等。从实验的五个产地丰年虫卵的结果来看，孵化时间不同，孵化率、出虫量、无节幼体水分、无节幼体体长和干物质重均有较大差异。

从表2～表6的数据可以得到，五种产地的丰年虫卵孵化率在24 h内基本可以达到最高值。24 h无节幼体体长均不相同，在555.2 μm～622.1 μm(有的品系丰年虫卵孵化24 h后可达690 μm)，无节幼体体长随着时间的延长逐渐增加，同时无节幼体体内水分含量也逐渐增加，从而导致出虫量在48 h内随着时间的延长逐渐增加，因此用出虫量作为丰年虫卵质量的标准时应重点考虑孵化时间的问题。

丰年虫无节幼体从大小、形态上还分为“Ⅰ期幼体”和“Ⅱ期幼体”。通常情况下，经过孵化的无节幼体从卵壳中出来，此时还没有形成口、肠道以及肛门，这个阶段的幼体被称为“Ⅰ期幼体”。一段时间后，幼体发育形成口、肠道、肛门，体长也明显增加(大部分在700 μm以上)，这时被称作“Ⅱ期幼体”。由于运动耗能“Ⅱ期幼体”较“Ⅰ期幼体”体内的营养成分大幅度降低。生产上，应该用营养丰富的“Ⅰ期幼体”，但在实际情况下，大多数技术人员不具备从形态上鉴定“Ⅰ期幼体”和“Ⅱ期幼体”的能力，只能从时间上大致判断，因此，用“Ⅰ期幼体”和“Ⅱ期幼体”来判断丰年无节幼体的营养情况，操作性不高。

无节幼体干重即无节幼体的营养物质重量。从实验结果分析，在实验的五种丰年虫卵中，仅新疆巴里坤丰年虫卵的最高干重在18 h出现，但其孵化率并未到达最高值，孵化24 h时，孵化率虽然达到最高值，但干物质重量反而降低，说明最佳的孵化时间在18 h～24 h。其他四种产地的丰年虫卵孵化24 h所得无节幼体的干重最多，且孵化率均在最高值附近。实验用五种产地的丰年虫卵在24 h后随着时间延长，所得的无节幼体干重均越来越少。虽然有部分品系虫卵的最佳孵化时间大于或小于24 h，但均在24 h附近得到最佳结果。在实际应用中24 h作为一个时间周期，可操作性强。因此，用24 h作为孵化时间是比较理想的。

用无节幼体的干物质量来评价丰年虫卵质量是比较准确的标准，该指标可以规避沥水程度、孵化率、杂质、水分、孵化速率等指标的影响。

3.2 判断丰年虫卵质量的其他指标

除从丰年虫卵本身的特征和孵化的无节幼体作为判断标准外，丰年虫卵还因品系不同具有自己独特的特性，从而决定其质量的优劣。如是否需要加入孵化剂、是否耐高温、孵化后分离效果、无节幼体活力、克卵数等。

正是由于丰年虫卵还具有上述的特殊特征，因此在市场上还存在一部分品系的虫卵，其价格不能用普通丰年虫卵的标准来判断。例如：渤海湾周边的盐田丰年虫卵(孵化时不需要添加孵化剂、耐高温、孵化后无节幼体活力好)、西藏双湖丰年虫卵(孵化时不需要添加孵化剂、分离好、营养丰富)等因其自身特有的优势，其价格与大部分盐湖虫卵的标准有所差异，有时差异还较大。

丰年虫卵因其特殊性，判断其质量的指标较多，且不同用户关注的指标也不尽相同，因此，制定丰年虫卵完美的质量标准困难较大。实验主张以无节幼体的干物质量作为评价丰年虫卵质量的基础指标，再配合其他指标来微调其质量标准。

4 结论

丰年虫卵孵化出的无节幼体干物质重量直接关系到丰年虫卵在水产养殖中的应用价值，单位重量丰年虫卵孵出的无节幼体干物质重量与丰年虫卵的品系、孵化率、水分、孵化时间等密切相关。不同品系的丰年虫卵通过控制孵化条件可以获得最优营养价值的无节幼体。丰年虫卵孵化出无节幼体的干物质量作为丰年虫卵质量的评价指标，具有全面性和科学性。