葫芦素B的检验方法研究

姜怀利

（江苏因倍思科技发展有限公司 江苏淮安 223005）

1 前言

葫芦素是从葫芦科植物中提取的苦味苷元成分，是一类高度氧化的四环三萜类化合物[1-3]，其化学结构的确立始于20 世纪60年代，现已发现40 余种葫芦素中，以葫芦素B 应用最广，此外还有葫芦素 A、葫芦素 C、葫芦素 D 等[4-6]。

本文采用高效液相色谱法测定葫芦素B 的含量，并计算出了不同试验下的相对标准偏差（RSD），此法简便、准确，重现性好[7,8]。

2 仪器与试剂

Shimadzu LC-20A 型高效液相色谱仪，Shimadzu SPD-10A 紫外检测器；Sartorius SQP 双量程电子天平。

葫芦素B 对照品（天津药物研究院提供）；所用试剂均为分析纯。

3 色谱条件

色谱柱:江苏汉邦 Kromosil C18 色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）；流动相:甲醇-水（62∶38）；柱温:25℃；检测波长:228 nm；流速:1.0 mL/min。

对照品溶液的制备:精密称取葫芦素B 对照品适量，用甲醇制成每1 mL 含葫芦素B 0.03 mg 的溶液。

供试品溶液的制备:取供试品细粉约1.25 g，精密称量，置具塞锥型瓶中加甲醇20 mL，振摇20 min，放置10 min，过滤，滤液置25 mL 容量瓶中，用少量甲醇洗涤，洗液并入同一容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀[9]。

4 标准曲线及线性范围

称取葫芦素B 对照品2.8 mg 至50 mL 的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得贮备液，分别吸取贮备夜 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL 至10 mL 容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定。

分别精密吸取对照品溶液（0.005 6 mg/mL、0.011 2 mg/mL、0.016 8 mg/mL、0.022 4 mg/mL、0.028 0 mg/mL、0.033 6 mg/mL、0.039 2 mg/mL）20 μL（详见表1），按已拟订的色谱条件测定峰面积。

以峰面积（A:mV·min）为纵坐标，葫芦素 B 的浓度（C:mg/mL）为横坐标绘制得曲线，并计算得回归方程 Y=3×107X+687.1，相关度（r）为 0.999 8。详细情况见图1。

表1 葫芦素B 线性数据

图1 峰面积与浓度曲线图

再以峰面积（A:mV·min）为纵坐标，葫芦素B的进样量（m:μg）为横坐标绘制标准曲线，并计算得回归方程 Y=1×106X+687.1，相关度（r）为 0.999 8。详细情况见图2。

图2 峰面积与进样量曲线图

实验结果表明，葫芦素B 为0.0056～0.0392mg/mL时，其进样量（m）与峰面积（A）呈良好的线性关系。

5 精密度试验

精密吸取葫芦素B 对照品溶液，即浓度为0.028 0 mg/mL 的溶液 20 μL，分别进样 6 次，每次20 μL，测得的峰面积值详见表2。

表2 精密度实验结果

（续表2）

实验结果表明，本色谱条件下的仪器精密度良好。

6 重现性试验

精密称取样品6 份，制成对应的供试品溶液，按上述拟订色谱条件测定，分别平行测定6 次，进样量为20 μL，测定每粒含葫芦素B 的量。详细结果见表3。

表3 重现性试验结果

实验表明，所拟订的色谱条件以及试验方法重现性良好。

7 溶液稳定性试验

分别取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件分别在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 进样，测定峰面积，考察样品溶液的稳定性，结果详见表4。

表4 葫芦素B 溶液稳定性试验结果

实验结果表明，供试品溶液在12 个小时内基本稳定。

8 加样回收率试验

取已知含量的样品6 份，分别加入葫芦素B 对照品适量，制成供试品溶液[10]，按上述色谱条件测定，进样量20 μL，计算回收率公式为:

回收率（%）=（实测葫芦素B 量-样品中葫芦素B 量）/添加葫芦素 B 量×100%

详细结果见表5。

表5 回收率试验结果

实验结果表明，葫芦素B 含量在该色谱条件下回收率良好。

9 结语

本文采用的测定葫芦素B 含量的高效液相色谱法的精密度、重现性和加样回收率的RSD 均小于2%，符合实验要求，表明该方法可实际用于葫芦素B 含量的测定[11]。