重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫效力研究

吴姣姣，曾显营，陈晓涵，臧金凯，包红梅，施建忠，邓国华，郭兴福，刘景利，毛胜刚，杨 帆，陈志宇，孙项楠，路 通，陈化兰，田国彬*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室，黑龙江哈尔滨150069；2.哈尔滨维科生物技术有限公司，黑龙江哈尔滨150069)

高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza，HPAI)是一种重要的人兽共患传染病，被世界动物卫生组织规定为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[1]。2017年初，我国出现H7N9亚型HPAI病毒，并在多个省份的肉鸡和蛋鸡中引起HPAI疫情，造成重大的经济损失，同时第5波人感染H7N9病毒的病例达到766人，引起人们对下一次会有更多人感染的担忧和恐惧[2]。更重要的是研究显示，该HPAI H7N9病毒在人体内复制后容易突变为对人高度致死、且有可能高效传播的病毒，对公共卫生蕴藏更大风险[3]。为有效控制H7N9亚型禽流感，国家禽流感参考实验室及时研制出重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，并于2017年9月在我国家禽中大量应用。该疫苗的应用极大的降低了H7N9病毒在家禽中的流行，更在阻断人感染H7N9病毒方面产生了“立竿见影”的效果，人感染H7N9病例由免疫前的766例减少为同期的3例[3-4]，很快消除了人们的担忧。

我国是肉鸡养殖大国和消费大国。自1986年以来，我国肉鸡的养殖和消费呈增长趋势。据相关部门统计，2015年我国肉鸡的年出栏量为87.9亿只，其中白羽肉鸡39.45亿只，黄羽肉鸡39亿只，肉杂鸡9亿只；2015年我国居民人均消费鸡肉量已达到10 kg以上[5]。活禽市场是肉鸡的重要销售场所，我国多地人群习惯去活禽市场购买活鸡。禽流感疫苗的有效免疫将减少肉鸡带毒率，有益于降低人感染AIV的风险。当前使用的重组AIV(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对肉鸡的免疫效果如何？值得关注和评估。本研究评估了H5+H7灭活疫苗对白羽和黄羽商品肉鸡的免疫保护效果，为现地肉鸡的禽流感疫苗免疫提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 病毒株、抗原及血清 攻毒用病毒株A/Chicken/Guizhou/4/2013(H5N1)(简 称 CK/GZ/4/13)株 和A/Chicken/Guangxi/SD098/2017(H7N9)(简称 CK/GX/SD098/17)株，均由国家禽流感参考实验室分离、鉴定和保存。H5N1亚型Re-8株和H7N9亚型H7-Re1株血凝抑制试验抗原和阳性血清均由哈尔滨维科生物技术开发公司提供。

1.2 疫 苗 重组AIV(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)(以下简称为H5+H7疫苗)，2017007批，由哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.3 实验用鸡及试验场所 10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡来自哈尔滨当地养殖场。疫苗接种和饲养均在养殖场进行，所有涉及H5亚型和H7亚型AIV操作的试验均在生物安全三级实验室(ABSL-3)进行。

1.4 实验用鸡胚 10日龄SPF鸡胚购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.5 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI) HA和HI试验方法根据国家标准(GB/T-18936-2003)进行。

1.6 白羽肉鸡免疫效力试验

1.7 黄羽肉鸡免疫效力试验

2 结果

2.1 白羽肉鸡免疫效力试验结果

表1 白羽肉鸡免疫后21 d和35 d攻击H5N1亚型和H7N9亚型AIV的排毒情况检测结果

2.2 黄羽肉鸡免疫效力试验结果

表2黄羽肉鸡免疫后21 d和76 d攻击H5N1亚型和H7N9亚型AIV的排毒检测结果

3 讨论

H5亚型和H7亚型禽流感是危害我国养殖业的重要传染病，疫苗免疫在禽流感防控中发挥了重要作用[6]。2004年我国出现H5N1亚型AIV引起的HPAI疫情，波及全国大多数省份，造成严重的经济损失。2005年开始我国使用疫苗防控H5N1亚型禽流感，疫苗使用后家禽疫情显著减少，得到有效控制。但由于AIV对水禽致病力较低，影响水禽养殖者对免疫的积极性，致使水禽免疫覆盖率较低，因此水禽携带并传播病毒，导致H5亚型AIV依然在家禽中存在，由于其抗原性不断发生变异，促使疫苗种毒不断更新[6-8]。2015年以来，我国开始使用H5亚型Re-8株疫苗，该疫苗可以抵御多种NA亚型H5 AIV的攻击[8-9]，用于家禽H5亚型禽流感防控。2013年我国出现了H7亚型流感病毒感染人的事件。由于该病毒对家禽呈低致病力，因此没有使用疫苗防控。2017年初，我国出现高致病力H7N9病毒株[2]，并在多个省份引起疫情。因此，我国农业部(现农业农村部)决定开始使用疫苗防控H7N9亚型禽流感。国家禽流感参考实验室研制的H5+H7疫苗于2017年9月在我国大面积应用后，有效控制了家禽和人的H7N9禽流感疫情[3-4]。血清学监测数据显示，H5亚型和H7亚型AIV HI抗体在蛋鸡和饲养周期较长的肉鸡中的免疫覆盖率达到73.1%以上，而短期饲养的肉鸡中免疫覆盖率仅为4.8%[3]。本研究的攻毒结果显示，黄羽肉鸡和白羽肉鸡感染H7N9和H5N1病毒后均快速发病、死亡。2017年8月我国安徽一肉鸡场发生H7N9禽流感疫情，扑杀和无害化处理74463只家禽，造成重大经济损失。因此存栏量巨大的黄羽肉鸡和白羽肉鸡的疫苗免疫对于我国HPAI防控十分重要。

通常认为肉鸡饲养周期短，禽流感疫苗免疫效果不佳。本研究中，黄羽肉鸡在14日龄和35日龄分别以0.3 mL/只和0.5mL/只的剂量免疫后，其H5亚型和H7亚型AIV HI抗体在免疫后21 d和出栏时（90日龄） 均在6 log2以上，在免疫后3周和出栏时攻毒，免疫鸡均获得完全保护，充分表明H5+H7疫苗对黄羽肉鸡具有良好的免疫效果。短期饲养的白羽肉鸡以0.5 mL的剂量免疫后，也可以产生6.0 log2左右的HI抗体，攻毒后其也获得完全的保护。因此，肉鸡免疫H5+H7禽流感灭活疫苗后可以抵御H5亚型和H7亚型AIV的攻击。

鉴于上述研究结果，推荐H5+H7二价灭活疫苗对商品肉鸡的免疫程序如下：短期饲养肉鸡在10日龄左右免疫，0.5 mL/只；饲养期在2月以上的肉鸡在14日龄左右首免，0.3 mL/只，35日龄左右加强免疫，0.5 mL/只。肉种鸡可以参考蛋鸡免疫程序，并根据抗体监测情况适时加强免疫。