精准检测，科学防控

唐彩琰 何闪

编者按：2019年6月3日，在第一届兽医检测诊断大会召开期间，《国外畜牧学—猪与禽》编辑非常荣幸采访到北京爱德士元亨生物科技有限公司（以下简称“爱德士”）中国区实验室技术服务总监徐灵龙先生（以下简称“徐先生”）和爱德士猪产品线现场技术服务总监李昭春先生（以下簡称“李先生”）（图1）。

问：爱德士的聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）产品有哪些优势及独到之处？

徐先生：美国爱德士生物科技公司（以下称爱德士）成立于1984年。大家对爱德士品牌的认知始于酶联免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）系列产品，其实我们早在1993年就有了PCR诊断产品面世，并于2007年研发了荧光定量PCR系列产品。爱德士产品无论在研发设计还是在产品质控方面始终如一地执行行业最高标准和最严格的质控体系。我们除了给客户提供性能优异的PCR产品之外，同时也提供PCR实验室问题解决方案，帮助客户建立实验室质控体系。首先，爱德士现有的荧光定量PCR体系拥有独特的内参系统，可以监控取样环节、样本运输/保存、样本前处理及核酸提取、PCR体系配置、仪器及程序设定等各个环节;若任何一个环节出现问题导致假阴性的结果（尤其是针对非洲猪瘟的检测，对猪场来说往往是致命的），爱德士的内参系统均能指示出来。其次，我们引入两个特殊试剂：阳性对照追踪检测混合液和细菌DNA检测混合液，让PCR实验室全方面的污染监测成为现实，避免环境污染带来的样品假阳性结果;另外，爱德士PCR产品实现了通用试剂及通用扩增程序，简化了实验室的操作，减轻了试剂污染压力，并实现了实验室的高通量检测。

问：目前市场上检测非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR产品品牌众多，爱德士的非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）荧光定量PCR产品性能如何？

徐先生：关于荧光定量PCR产品的性能评估指标通常来说包括产品的分析敏感性和特异性、诊断敏感性和特异性、重复性及稳定性等几大方面。我们的非洲猪瘟PCR产品在这些方面均进行了相关测试及验证，其中包括兼容性（覆盖目前已知的24个基因型）、最低检出限（单拷贝，1～10拷贝/反应）、PCR扩增效率（效率100.7%;相关系数0.999 6;斜率-3.306 4）、混样检测能力（最多可达20份）、分析特异性（与其他猪病病原体如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒等无任何交叉）诊断特异性（100%，n=227）;另外，该产品的重复性、稳定性和容忍度等都非常优异。同时爱德士非洲猪瘟PCR产品成功通过了非洲猪瘟欧盟参考实验室（西班牙马德里动物卫生中心）的验证，验证报告提到爱德士的非洲猪瘟产品能够得到可信的检测结果（性能表现优于参考方法国际兽医局[（Office International Des Epizooties，OIE）和通用探针库（Universal Probe Library，UPL）-PCR]。另外在中国非洲猪瘟防控中，爱德士的产品经历了实践的检验，获得了众多客户的认可与信赖。

问：对于PCR实验室的污染问题，爱德士有哪些好的建议？

徐先生：因为PCR方法尤其是荧光定量PCR的高敏感性，目前PCR实验室污染非常普遍。要想避免PCR污染，我们需要对PCR实验室的分区、人流、物流控制及操作过程等方面制定标准化流程;同时，我们要注意实验室环境的定期污染监测，查找实验室漏洞，避免环境污染累计效应给实验室带来的灾难性后果。如果实验室已经出现了污染，我们要及时排查污染源，进行有效的污染清除，避免干扰检测结果，导致结果的不准确。

问：在非洲猪瘟防控体系中，爱德士可以提供哪些服务？

徐先生：在实验室层面，前期我们可以帮助客户设计与规划实验室，制定仪器耗材选用标准，建立实验室质量管理与控制标准;协助建立标准操作流程（Standard Operating Procedure，SOP）并在实验室人员标准化操作、培训、考核等方面提供技术支持。在现场层面，我们可以根据猪场情况，有针对性地提供因地制宜的解决方案：如建立非洲猪瘟阴性猪场监测体系，为正在发生问题的猪场提供精准清除方案以及具体的复养方案等等。

问：面对非洲猪瘟的传播风险，在饲料环节如何进行整体评估？

李先生：饲料厂执行类似于猪场的非洲猪瘟生物安全策略有利于饲料的安全。具体来说，一是精简饲料配方，停用猪源性原料，可以通过膨化、预烘干和高温制粒等手段降低风险，同时对大宗原料的来源加以控制，减少使用高风险饲料。二是对原料和成品料定期评估，采样过程中要注意样本的交叉污染，同时为了监控整个实验过程，建议在检测饲料样本过程中增加内部阳性对照（Internal Positive Control，IPC）。三是监控成品料在包装、运输环节的污染问题。

问：猪场如何做到最早发现ASF感染风险？

李先生：首先，我们建议猪场建立实时监控体系：侧重监控猪场内外部环境、监控高风险区域并及时排查可疑病例，以便在病毒进入猪场的第一时间就能够发现;其次，根据病毒的传播特性，一般经口鼻感染的猪感染病毒出现在口鼻处的时间早于血液2 d～3 d，我们可以通过爱德士的非洲猪瘟荧光定量PCR方法最早发现感染，为猪场及时处置争取最宝贵的时间。

问：在精准清除的过程中如何做到“精准”？

李先生：首先需要正确采样：选择合适的样本，保证样本确实有效;如果采样过程中操作不正确（如鼻腔拭子采样出现漏采或交叉污染），就会失去最早发现感染和最早进行科学处置的时机。其次需要足够的样本数量：发病猪群所用的栋舍及相邻栋舍建议全部采样，其余猪群大比例采样筛查，及早确认发病范围和数量。再次是科学的混样：由于检测目的不一样，我们会选取不同的样本来进行检测，但ASF病毒在不同的样本中出现的时间和病毒载量差异性很大，这时需要根据所选试剂盒的敏感度和样本所含病毒拷贝数决定最佳的混样比例。

问：阴性猪场如何建立非洲猪瘟的风险监测体系？

李先生：在没有疫苗免疫前，我们需要提升针对非洲猪瘟的生物安全措施。同时，我们要建立一套行之有效的监控体系。猪场应该按照自身布局特点对整个区域进行划分，不同区域、不同风险等级应有不同的监测重点。猪场可以参照生产区、配套区、流通环节及外部环境建立监控体系，针对不同的环节，对人、车和物等加以控制及检测。并且，猪场应通过前期病原监测、信息搜集和场地条件等评估猪群的暴露风险等级，再基于暴露风险等级，制定不同的生物安全及管理策略，备齐物资，设定有目标、可执行的预案，并通过员工培训、设施改进和流程优化等方式，严格执行预设方案，设立合理的执行情况检查制度，根据现场执行情况、周边疫情发展情况和病原监测结果等汇总反馈，动态了解自身现状，不断提升自己，实现安全保障。□□

编后按：北京爱德士元亨生物科技有限公司成立15年以来，始终为客户提供最优质的产品、最专业的技术支持及最完善的售后服务。爱德士在动物健康领域、水质检测和牛奶检测等方面是全球翘楚（图2）。