载脂蛋白E基因多态性与初发急性缺血性脑卒中的相关性及其对近期预后的影响

杨春梅，刘圆圆

脑卒中具有高发病率、高致残率、高致死率和高复发率的特点，给世界各国，尤其是发展中国家带来很重的经济负担。75%以上的脑卒中为缺血性脑卒中(acute ischemic stroke, AIS)[1-2]，AIS的发生受高血压、吸烟、饮酒、基因多态性等多种危险因素的影响[3]。载脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)在富含三酰甘油的脂蛋白代谢过程中发挥重要的作用。ApoE基因多态性是由其编码基因19q13.2第4号外显子的碱基替换引起的，ApoE E3等位基因在人群中的频率为79%，称为“野生型”[4]。流行病学研究发现，ApoE基因多态性与脑血管疾病的发病率及预后密切相关[5]：与ApoE E3等位基因相比，E2等位基因增高机体三酰甘油和胆固醇水平；E4等位基因使血清中胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)和载脂蛋白B(ApoB)水平升高，导致动脉粥样硬化、高脂血症及其他心血管疾病[6，7]。血浆中ApoE水平升高可增加脑卒中的风险，然而关于ApoE等位基因多态性与AIS关系及其近期预后预测价值仍存在争议。本研究旨在阐明ApoE基因型多态性在预测中国AIS近期预后的作用。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2016-01至2018-01在我院住院治疗的急性AIS患者445例，作为初发AIS组。诊断标准参照中国急性缺血性脑卒中诊疗指南 (2014)，通过CT或MRI确诊。排除既往脑卒中病史、原发性蛛网膜下腔出血病史，以及痴呆病史的患者。同时选取健康体检者363名作为对照组，排除标准同上。

1.2 方法 急性AIS患者在入院时(24 h内)由经验丰富的医师使用改良Rankin量表(modified Rankin scale, mRS)进行评估。在患者出院6个月后对其进行电话随访，记录mRS评分。两组均进行以下操作：

从全血样品中提取基因组DNA(QIAGEN)，采用荧光定量PCR的方法检测ApoE基因分型。引物序列如下：上游引物5′-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC；下游引物5′-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA。

采用罗氏5800全自动生化分析仪，检测血清中的总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及空腹血糖水平。

2 结 果

2.1 两组ApoE基因型分布及一般临床资料比较 两组在年龄、性别、高血压病史、糖尿病史、冠心病史、吸烟比例、血脂，以及空腹血糖等方面比较，差异均无统计学意义(P>0.05，表1)。

2.2 两组ApoE基因型分布 ApoE基因经荧光定量PCR扩增后，可分为3种常见基因型：E2(E2/E2、E2/E3)，E3(E3/E3、E2/E4)，E4(E3/E4、E4/E4)，本研究仅在初发AIS组出现1例E2/E4患者，在基因型统计处理中，将其归于E3基因型。初发AIS组 ApoE基因型分布与对照组有统计学差异(χ2=13.31，P<0.01，表2)。

表1 初发AIS组与对照组的一般情况比较 (n;%)

表2 初发AIS组与对照组ApoE基因型的分布 (n;%)

注：两组ApoE基因型比较，χ2=13.31，P<0.01

2.3 初发AIS患者24 h内mRS评分与ApoE等位基因分布 初发AIS组患者入院后24 h内进行mRS评分，根据mRS评分将受试者分为两组，mRS≤2(n=248)组和mRS>2组(n=197)。两组均以E2型最少，E3基因型占优势。但mRS>2组患者ApoE基因型分布与mRS≤2组显著不同(χ2=7.70，P<0.01，表3)。

表3 入院24 h内初发AIS患者mRS评分与ApoE等位基因的分布 (n;%)

注：两组ApoE基因型比较，χ2=7.70，P<0.01

2.4 初发AIS患者6个月后mRS评分与ApoE基因型的分布 患者出院后6个月电话回访，并进行mRS评分，mRS≤2组患者由入院时的248例增加至367例，mRS>2组的患者由入院时的248例减少至78例。出院6个月后，mRS>2组患者ApoE基因分型与mRS≤2组显著不同(χ2=11.31，P<0.01，表4)。

表4 出院6个月后初发AIS患者mRS评分与ApoE基因型的分布 (n;%)

注：两组ApoE基因型比较，χ2=11.31，P<0.01

3 讨 论

ApoE是调节体内胆固醇和三酰甘油代谢中重要的载脂蛋白[8]。携带不同ApoE等位基因的人群，其LDL-C水平也不相同，通常携带E2等位基因的人群LDL-C水平最低, 携带E4等位基因的人群LDL-C水平最高，而携带E3等位基因者其LDL-C水平介于两者之间[9]。但是，在本研究中并未发现ApoE不同等位基因与血脂的上述相关性，主要与大多数高脂血症患者已经服用降脂药物治疗有关。

研究发现，携带ApoE E4等位基因是动脉粥样硬化的预测因素，并与AIS和出血性脑卒中的发生密切相关[10]。McCarron等[11]发现，ApoE E4等位基因增加脑卒中的风险。Alberts等[12]证实，脑出血患者中携带ApoE E4 等位基因的存活率低于非ApoE E4 等位基因携带者。然而，一部分研究并未发现ApoE基因多态性与缺血性脑卒中发生的相关性，并且认为其对AIS后的功能恢复没有重大影响[13]。因此，ApoE等位基因多态性是否能够作为AIS的风险因素及能否有助于预后判断仍然存在争议，导致争议的原因可能包括：(1)研究对象的种族差异；(2)不同检测方法得出的ApoE等位基因分型结果不完全一致；(3)样本量过小，存在统计学偏倚等。

本研究发现，初发AIS患者与对照组相比，ApoE基因型分布显著不同。在初发AIS患者，ApoE基因型的不同分布不仅与入院时mRS评分密切相关，而且与出院后6个月mRS评分相关。提示ApoE基因多态性不仅与AIS初次发病风险增加相关，而且与AIS的严重程度及短期预后有关。

总之，我们观察到在初发AIS患者中ApoE多态性与AIS初次发生及预后之间的关联。但是，由于样本量较小及种族的限制，本研究的结论需进一步大样本及多种族的研究结果来验证。