明胶胶囊的微生物限度检查方法研究

于金婷

【摘 要】明胶空心胶囊主要用于药物的包装，对药物质量有着直接的影响。为了保证明胶胶囊符合药典要求，需要我们进行相应的微生物限定检查。我们主要对微生物检查方法的可行性进行研究，通过实际的试验测试，对明胶空心微生物的限定检查方法的可行性进行研究。根据实际的实验操作得知，该检测方法可以用于明胶空心胶囊的微生物限定检查。

【关键词】明胶胶囊;微生物限定检查;方法研究

中图分类号： R927.1文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2019）13-0180-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.13.086

Study on Microbial Limit Test Method for Gelatin Capsules

YU Jin-ting

（Sino-US Shanghai Squibb Pharmaceutical Co.，Ltd.Shanghai 200240，China）

【Abstract】Gelatin hollow capsules are mainly used for drug packaging， which has a direct impact on the quality of drugs. In order to ensure that gelatin capsules meet the requirements of the Pharmacopoeia，we need to carry out the corresponding microbial limit test. We mainly study the feasibility of microbial examination methods. Through the actual test， we study the feasibility of the limited examination methods of gelatin hollow microorganisms. According to the actual experimental operation， the method can be used for the microbial limit test of gelatin hollow capsules.

【Key words】Gelatin capsules; Microbial limit test; Methodological study

0 引言

明胶胶囊主要用于包装药物，需要通过微生物限定检查，才能保证明胶胶囊没有受到微生物的污染。我们制定了相应的限定检验方法，进行明胶胶囊微生物限定的检查工作。为了避免检验结果出现假阴性，我们设置了相应的阴性对照组，可以对照有菌生长的情况。本文主要对明胶胶囊的微生物限定检查方法进行研究，并确定该限定检查方法是否具符合检查要求[1]，下面为具体的研究内容：

1 实验设备和材料

1.1 实验设备

我们在进行检验方法的研究前，需要进行合理的准备工作，首先要进行实验设备的准备。我们对实验分析以后，需要准备以下几种试验设备：第一，生物安全柜。主要用于保护实验者、试验环境及材料，避免出现感染性气溶胶和溅出物。第二，天平。主要用于实验称量，我们选择精准度为±0.1g天平用于本次实验测量。第三，培养箱。主要用于菌落的培养工作，根据实际的试验需要我们选择具有多个温度调节档位的培养箱。第四，冰箱。用于菌落的存放，温度调控在2-8℃之间。第五，水浴锅。主要用于实验中的蒸馏、干燥、浓缩等等需求。第六，恒温摇床。主要用于菌落的培养工作。第七，旋涡混合器。主要用于试验中的振荡和涡旋要求。

1.2 实验用品

接下来需要我们进行试验用品的准备工作，首先准备接种环，用于微生物的接种需求。根据实验需求，准备各种型号的无菌容器、无菌管、无菌移液管、90mm无菌培养皿。

1.3 稀释液和培养基

其次需要我们准备实验需要的培养名和稀释液，我们准备的稀释液为无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液和无菌磷酸缓冲液，前者PH值为7.0，后者PH值为7.2。根据实验需要我们准备了较多的培养基，分别为（TSB）胰酪大豆胨液体培养基、（TSA）胰酪大豆胨琼脂培养基、（SDA）沙氏葡萄糖琼脂培养基、（MCB）麦康凯液体培养基、（MCA）麦康凯琼脂培养基、（RVS）沙门菌增菌液体培养基、（XLD）木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、（CAB）溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基。

1.4 检测菌种

在完成实验用品的准备工作后，我们最后进行检测菌种的准备工作。根据实际的实验需求，我们选择了多种检验菌种，分别：ATCC9027铜绿假单胞菌、ATCC6538金黄色葡萄球菌、ATCC8739大肠埃希菌、ATCC6633枯草芽孢杆菌、ATCC10231白色念珠菌、ATCC16404巴西曲霉、ATCC14028乙型副伤寒沙门菌、现场菌[2]。

2 检查方法

2.1 氧菌总数计数/霉菌及酵母菌总数计数检测

2.1.1 供试液制备

在完成所有准备工作以后，我们就可以进行正式的实验，首先进行供试液的制备工作。先将90ml磷酸缓冲液存放在2-8℃环境下1h，在达到存放时间以后取10g样品放入预制的缓冲液中，放入以后需要进行人工振摇的操作，将样品胶囊的表明完全润湿在缓冲液中，在全部润湿以后，将胶囊放在刚才用于存放缓冲液的环境中，并等待1h。将样品取出放置在恒温摇床中，并将温度调节值45℃左右，并制成1：10均匀的供试液。在完成上述工作以后，需要进行供试液PH值的测量工作，正常情况下供試液的PH值应该在6-8之间，如果测量的PH值没有达到上述要求，需要我们使用NaOH或HCL进行PH值的合理调整，直到达到需要的PH值，这就得到了我们需要的检测供试液，用于TAMC和TYMC的检测实验。

2.1.2 试验组

我们先进行需氧菌总数计数操作，将制备出的供试液进行防治在无菌试管中，总共选择6份9.9ml的供试液，在每个试管加入供试液之后，分别加入试验菌悬液，加入的菌悬液为ATCC6538金黄色葡萄球菌，ATCC6633枯草芽孢杆菌，ATCC9027铜绿假单胞菌菌悬液，ATCC10231白色念珠菌菌悬液，ATCC16404巴西曲霉菌悬液，现场菌，总共可以得到六分含菌溶液，我们在含菌溶液的调配时，需要对含菌量进行和控制，将含菌量控制在100CFU/ml以内。得到需要的含菌容易以后，取1mml防治在无菌平皿中，最后加入胰酪大豆胨琼脂培养基。接下来进行霉菌及酵母菌总数的计数操作，跟上述实验步骤基本相同，但是采用的试验菌悬液不同，主要选择ATCC10231白色念珠菌菌悬液、ATCC16404巴西曲霉菌悬液，在制备含菌溶液以后，同样对含菌量进行合理的控制，要注意的是最后我们将制备的含菌溶液加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基[3]。

2.1.3 稀释剂对照组

稀释剂对照组使用的缓冲液为无菌磷酸缓冲液，PH值为7.2，菌悬液的添加方式参照实验组。如果在试验过程中，不需要使用中和剂，我们可以取消稀释剂对照组这一试验步骤。

2.1.4 菌液对照组

进行菌液对照组的操作时，与稀释剂对照组基本相同，只是选择的缓冲液类型不同，菌液对照组选择无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，PH值为7.0。

2.1.5 供试品对照组

按照上述试验组的操作方式，将菌液换成无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，使用供试液进行试验操作。

2.1.6 稀释剂阴性对照

先准备好4个无菌平皿，然后在两个平皿中放入1mlpH7.2无菌磷酸缓冲液，并放入胰酪大豆胨琼脂培养基，另外两个加入同样的缓冲液，加入沙氏葡萄糖琼脂培养基。

2.1.7 培养基阴性对照

跟稀释剂阴性对照操作基本一致，但是不需要加入缓冲剂，直接按照上述试验进行培养基的加入。

2.1.8 培养与观察

在完成上述实验操作以后，我们就可以进行菌落数量的计数工作，为了方便菌落数量的观察，我们需要对培养时间进行合理的把控。将TSA平皿控制在3天以内，温度控制在30-35℃，SDA平皿控制在5天以内，温度控制在20-25℃。在观察结束以后，将数据进行记录工作。

2.2 控制菌检查

2.2.1 大肠埃希菌检查

我们先进行大肠埃希菌的检查工作，将TSB放置在2-8℃环境下存放1h，将10g样品放置在准备好的TSB中，并进行胶囊表面的润湿操作，放置在2-8℃环境下存放1h。取出放入45℃左右的恒温摇床中，并加入大肠埃希菌，并进行摇匀处理，上述操作为实试验组操作。接下来去100mlTSB加入0.1ml大肠埃希菌，并进行合理的摇匀处理，得到阳性对照。按照试验组操作进行制备，但不添加大肠埃希菌，作为供试品对照组。将100TSB取出放置在指定的位置上，作为阴性对照。完成上述操作以后，我们就可以进行培养与观察，将TSB放置在30-35℃培养箱中进行培养，在18h后取出1mlTSB放置在麦康凯液体培养基中，并进行摇匀处理。将培养箱的温度调节值42-44℃，培养24h。在增殖肉汤中使用接种环挑出样品，并将样品涂匀在培养基上，将温度调节到30-35℃培养18h，进行数据结果的记录工作。将接种的菌落和试验组的菌落分别放置在平皿中，并加入TSA培养基，使用30-35℃进行培养，将培养时间控制在3天。

2.2.2 铜绿假单胞菌检查

在进行铜绿假单胞菌检查时，与大肠埃希菌的检查步骤基本一致，在试验组阶段，所有操作相同，将加入的菌落替换为铜绿假单胞菌即可。在进行阳性对照实验时，将加入的菌落替换为铜绿假单胞菌。供试品对照组和阴性对照与大肠埃希菌一致。最后进行培养和计数工作，与上述相同。

2.2.3 沙门氏菌检查

在进行沙门氏菌检查时，与大肠埃希菌的检查步骤基本一致，在试验组阶段，所有操作相同，将加入的菌落替换为沙门氏菌即可。在进行阳性对照实验时，将加入的菌落替换为沙门氏菌。供试品对照组和阴性对照与大肠埃希菌一致。最后进行培养和计数工作，与上述相同[4]。

3 方法适用性检查记录

3.1 TYMC方法适用性检查记录

3.2 控制菌方法适用性检查记录

根据表1和表2的检查记录可知，每次试验均符合要求，可以用于明胶空心胶囊的微生物限定检查工作。

4 结论

本文先进行了实验准备工作的研究，将实验中需要的设备、菌种、用品、稀释液及培养基，对每种实验用品的功能进行了大体的介绍。然后我们进行了氧菌总数计数/霉菌及酵母菌总数计数检测工作，按照设计的实验环节进行操作，保证实验的规范性。接下来我们对控制菌进行检查，主要选择三种控制菌，分别为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌检查。通过实验的方式进行三种菌种的观察和记录工作。最后根据上述试验数据绘制出检查表格。根据表格上的数据可知，三次试验结果均符合要求，说明该方法可以用于明胶空心胶囊的微生物限定检查，希望可以为明胶胶囊今后的限定检查提供参考[5]。

【参考文献】

[1]石晶萍，梁元太，徐开祥.明胶空心胶囊铬元素AAS法测定不确定度评定研究[J].中国药事，2017，31（1）：37-42.

[2]吕东岩，王莹，包懿，等.GC/MS测定明胶空心胶囊中17种塑化剂[J].吉林蔬菜，2017（9）：30-32.

[3]王发英，吴查青.明胶空心胶囊中7种元素含量测定方法的建立与应用[J].中国药房，2017，28（28）：3992-3995.

[4]陈丰农，陈浦兰，谢亚平，等.基于高光谱成像技术的药用胶囊铬含量快速检测方法研究[J].计量学报，2017（6）：769.

[5]宋薇，高俊海，宋桂雪， et al.石墨化碳黑凈化-分光光度法测定明胶空心胶囊中的六价铬[J].食品安全质量检测学报，2017，8（3）：761-766.