2009～2012年黑龙江省细菌性腹泻症候群病原菌检测结果分析

苏 怡，任启智，刘玉文，白 晶，苑洪菲

(1.黑龙江省疾病预防控制中心,哈尔滨 150030；2. 哈尔滨市南岗区疾病预防控制中心,哈尔滨 150008； 3.武警黑龙江省总队医院 妇产科,哈尔滨 150076)

细菌感染性腹泻是一种常见的肠道传染病，发病率高居全球传染病第三位，是我国急性传染病中发病数最多、流行面最广、影响群众生活最普遍的一组疾病。细菌感染性腹泻的致病菌种类复杂，人群普遍易感，增加了预防和控制细菌感染性腹泻的难度[1]。为了解黑龙江省细菌性腹泻病原谱构成，探讨主要病原体的变异和流行变迁规律，提高监测实验室腹泻病原实验室诊断、监测预警、突发腹泻疫情的处置能力，为进一步防治工作提供科学依据；结合国家科技重大项目“传染病监测技术平台项目”《腹泻病症候群监测技术方案》管理手册的要求，及时采集哨点医院肠道门诊的细菌感染性腹泻患者粪便，采用分离培养、生化鉴定和血清分型的方法，进行沙门氏菌、志贺氏菌、致泻大肠杆菌等肠道致病菌的检测工作，并对2009年1月～2012年6月病原菌检测及其结果进行了分析。

1 材料与方法

1.1 标本采集

标本来自黑龙江省腹泻症候群监测哨点医院肠道门诊，采集时间为2009年1月～2012年6月，选择每日腹泻≥3次，且有大便性状改变(呈稀便，水样便，粘脓便或脓血便等)的病例。监测点肠道门诊用5支棉签采集粪便标本置于Carry-Blair培养基中，4 ℃冷藏保存，24 h内送至实验室进行检测。

1.2 方法

按照国家科技重大项目《腹泻病症候群监测技术方案》[2]中的方法进行检测，包括致泻大肠杆菌DiarrheogenicEscherichiacoli、沙门氏菌Salmonella、志贺氏菌Shigella、小肠耶尔森氏菌Versiniaenterocolitica、弧菌Vibrio(霍乱弧菌Vibriocholerae、副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus)、气单胞菌Aeromonas、类志贺邻单胞菌Plesiomonasshigelloides等菌属。所有分离的阳性菌株均送到黑龙江省疾病预防控制中心进行复检确认。

1.2.1 增菌

在装有标本的Carry-Blair培养基中，取一棉签标本置于改良磷酸盐缓冲液中，4 ℃增菌20 d。另取棉签标本，分别放入碱性蛋白胨水(APW)，mEC和SBG增菌液中，37 ℃分别增菌培养6 h、14 h和16 h。取第五支棉签直接接种到Mac、SS、XLD培养基上，37 ℃培养16～24 h，以及接种到Karmali培养基上，42 ℃微需氧培养2～3 d观察菌落形态。

1.2.2 分离培养

将磷酸盐缓冲液接种到耶尔森氏菌选择性平板和Mac培养基中，25±1 ℃培养24 h。自APW增菌液，选择生长最茂盛的培养基表面或菌膜下表层，取2～3滴加入霍乱O1、O139胶体金试纸中，同时划线接种TCBS琼脂、庆大琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基，37 ℃培养12～18 h后，从庆大琼脂上选择5～10个可疑菌落做霍乱弧菌血清凝集实验；从TCBS琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基上选择5～10个单个菌落，做其他弧菌鉴定试验；从Mac、SS、XLD平板上选取单菌落做气单胞菌和类志贺邻单胞菌和其他弧菌鉴定试验；将mEC和SBG增菌液分别接种到O157显色培养基和沙门氏显色培养基，36±1 ℃培养24 h。

1.2.3 生化及血清学检测

自TCBS、科玛嘉弧菌显色培养基、Mac、SS、XLD和耶尔森氏菌选择性平板等分离平板上挑取可疑菌落接种于KIA/MIU，做氧化酶实验；用API20E进行生化初筛；志贺菌、沙门氏菌及致泻大肠杆菌做血清凝集试验进行分型；对Karmali培养基上的可疑菌落做氧化酶、触媒和马尿酸盐水解实验。

1.3 数据处理

所有符合病例定义要求的患者的个人信息及其便样检测结果，均由专人录入传染病监测技术平台信息系统，数据分析时直接由系统Excel中导出，计算各种检出率。对率进行用卡方显著性检验和方差分析，统计软件 SPSS19.0，检验水平为 α=0.05。

2 结果分析

2.1 不同性别患者病原菌的检出

537份腹泻样品中男性患者351人，女性患者186人，197株阳性菌株中男性有129例，女性有68例。病原菌检出率，男性为36.75%，女性为36.56%，差异无统计学意义(χ2=0.002，P=0.964 33，P>0.05)，男女患病的机率没有差别(见表1)。

表1 不同性别病原菌检出情况Table 1 Detection of pathogens of different genders

2.2 不同年龄组病原菌的检出

不同年龄组病原菌的检出率分别为：0～10岁为42.72%(182/426)，11～20岁为10.00%(2/20)，21～30岁为13.33%(2/15)，30～40岁为16.67%(2/12)，40～50岁为19.05%(4/21)，50～60岁为15.38%(2/13)，60～70岁为11.11%(1/9)，70岁以上为9.527%(2/21)，各年龄组病原菌检出率差异有统计学意义(χ2=17.776，P=0.01302，P<0.05 )，其中0～10岁年龄组患病人数和检出率均高于其他年龄组，可能与各个年龄组人群的感染机会和自身免疫力有关(见表2)。

表 2 不同年龄病原菌的检出情况Table 2 Detection of pathogens at different ages

2.3 不同月份病原菌的检出

细菌感染性腹泻患者全年均有发病，各月份病原菌检出率如下：1月份为11.11%(1/9)，2月份为0%(0/7),3月份为20%(1/5),4月份为10%(1/10),5月份为20.41%(10/19)，6月份为29.46%(33/112)，7月份为43.30%(42/97)，8月份为41.54%(54/130)，9月份为86.54%(45/52)，10月份为14.29%(4/28)，11月份为14.29%(4/28)，12月份为20%(2/10)；各月病原菌检出率差异有统计学意义(χ2=40.464，P=0.00001，P<0.05)，病原菌检出率存在季节性差异，高发月份为6～9月，低检出月份为12月至翌年1～4月(见表 3)。

2.4 病原菌的检出和构成

2009年1月～2012年6月检测细菌感染性腹泻群患者标本537份，检出率为36.69%(197/537)，其中致泻性大肠杆菌5株(9.31%)，志贺氏菌37株(6.89%)，副溶血弧菌7株(1.30%)，沙门氏菌18株(3.35%)，类志贺邻单胞菌3株(0.56%)，嗜水气单胞菌1株(0.19%)，小肠结肠炎耶尔森菌2株(0.37%)，霍乱弧菌4株(0.74%)，空肠弯曲菌29株(5.40%)，大肠埃希氏菌91株(16.95%)；各致病菌比例关系如图1所示，检出病原菌占前四位的是：大肠埃希氏菌、志贺氏菌、空肠弯曲菌和沙门氏菌。

表3 不同月份病原菌检出情况Table 3 Detection of pathogens in different months

图1 各致病菌比例关Fig.1 Propotion relations of each pathogenic bacteria

3 讨 论

3.1 人群分布

腹泻患者男女比例1.89∶1，男性病原菌检出率36.75%(129/351)，女性36.56%(68/186)，差异无统计学意义(P>0.05)，人群普遍易感，没有性别差异[3-4]。患病人数以少年儿童为多，说明儿童由于免疫系统发育不完善更易感染，病情较重。另外，成人腹泻症状轻，病程短，且采样配合度较低，故成人病例相对较少，与某市的报道相一致[5-7]。

3.2 时间分布

病例主要集中在5～9月的夏、秋两季，符合感染性腹泻的流行病学规律[8-11]。夏、秋季气温较高，有利于各种病原菌的繁殖、蝇虫的滋生，导致食物变质、水源污染，人群感染机会增多。黑龙江省冬季时间较长，气候寒冷，不适于细菌病原菌的繁殖和传播，感染机会下降。

3.3 病原菌分布

细菌感染性腹泻是由多种病原体引起的肠道传染病，本次实验结果显示检出的致病菌种类复杂，以大肠埃希氏菌为第一位，其次为志贺菌、空肠弯曲菌和沙门菌，致泻性弧菌检出的比例也较大，与相关的报道相一致[12-13]。水产品中常常携带大量的致泻性弧菌，夏秋季节大量水产品上市。如水产品生食或加工不当，易造成细菌性腹泻病的发生，故除加强监测外，应对市民进行相关知识的宣传和培训，以减少食源性疾病的发生，保障市民的身体健康。

3.4 进一步探索

随着科学的发展，检测技术的提升，目前分子生物学技术经历大胆的科学假说、经过大量的实验研究、建立该学科的理论基础，目前的应用已经覆盖到各个研究领域。我们今后有待于把经典的生物学方法与先进的分子生物学方法完美结合，把所分离的菌株进行分子生物学检测，进一步分析，为基因诊断和基因治疗提供更多科学依据。

3.5 防治和控制

腹泻病是迄今全球性重要的公共卫生问题之一，中国是一个发展中国家，幅员辽阔，人口众多，各地发展又极不平衡，这给腹泻病的预防和控制带来很大的困难。我们应针对本地区腹泻症候群的发病情况与流行特征，加强腹泻症候群病人、水源及水产品的监测是至关重要的；为进一步做好腹泻症候群的防治工作，必须控制传染源，以切断传播途径为主；大力加强腹泻病防治知识的宣传教育工作，改善卫生条件，提高群众卫生意识，养成良好的卫生习惯。切实降低本地区的腹泻发病率，为创建健康文明城区、促进社会和谐发展奠定基础。[14]