CD15抗原、CD44v6蛋白及MMP-3在乳腺癌中的表达及相关性分析

戚利坤，刘长春，王巍

（青海省肿瘤医院 肿瘤外科，青海 西宁 810007）

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，严重威胁生命健康和生活质量。乳腺癌相关基因及蛋白可分为：①与侵袭和转移相关因子；②增殖与凋亡相关标志物；③原癌基因和抑癌基因；④激素受体；⑤特异性蛋白。CD15 抗原是一种具有中性金属内肽酶活性的细胞表面酶，具有降解基底膜及基质的作用，表达于间质细胞时参与多种肿瘤细胞的侵袭、转移。基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3,MMP-3）又称基质分解素，是基质金属蛋白酶家族中功能最活跃的成员之一，不仅与肿瘤生长有关，还可破坏周围正常组织的基质结构，便于肿瘤细胞增殖，导致周围纤维结缔组织结构松弛，使肿瘤细胞发生侵袭、转移。CD44 是一种跨膜糖蛋白，CD44v6 是最早发现的CD44 变异体，因此CD15、CD44v6 及MMP-3 在乳腺癌中具有特异性表达。本文旨在观察CD15、CD44v6 及MMP-3 在乳腺癌组织及乳腺癌旁组织中的相关性表达，为临床治疗乳腺癌提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年7月—2016年7月青海省肿瘤医院收治的乳腺癌患者80 例，采集患者的乳腺组织石蜡标本。患者年龄26～83 岁，中位年龄52 岁；绝经47 例，未绝经33 例；浸润性导管癌59 例，其他类别癌21 例；伴腋窝淋巴结转移62 例，不伴腋窝淋巴结转移18 例；按组织学分级Ⅰ级37 例，Ⅱ级23 例、Ⅲ级20 例；患者均无其他肿瘤病史，且术前均未进行化疗。取患者同样数量的癌旁正常组织作为对照。患者对研究内容知悉并签署知情同意书，研究方案经本院伦理学委员会批准。

1.2 试剂

鼠抗人CD15 单克隆抗体、鼠抗人CD44v6 单克隆抗体、鼠抗人MMP-3 单克隆抗体及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（streptavidin-perosidase,SP）相关检测试剂盒均购自美国MAXIM 公司。

1.3 方法

所有组织标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，采用免疫组织化学SP 法，具体操作过程严格按照说明书进行。其中阳性对照为已知阳性切片，阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗。

1.4 结果判定

CD15 抗原和CD44v6 蛋白在细胞膜、细胞质及腺腔边缘着棕黄色；MMP-3 为细胞核着棕黄色。均为同一名检验医师在相同的操作条件下采用盲法检测完成。每份病理切片计数1000 个肿瘤细胞，无阳性染色细胞为阴性（-）；阳性细胞率≤25%为弱阳性（+）；阳性细胞数在＞25%～＜50%为阳性（++）；阳性细胞数≥50%为强阳性（+++）。细胞的总阳性率= 弱阳性率+阳性率+强阳性率。

1.5 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0 统计学软件，计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验，相关分析用Spearman 法，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织及癌旁组织中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 的比较

患者乳腺癌组织中CD15 总阳性率为76.25%（61/80）、癌旁组织中CD15总阳性率为8.75%（7/80），两者比较，差异有统计学意义（χ2=74.578，P=0.000），乳腺癌癌组织高于癌旁组织。患者乳腺癌组织中CD44v6 总阳性率为73.75%（59/80）、癌旁组织中总阳性率为11.25%（9/80），两者比较，差异有统计学意义（χ2=63.939，P=0.000），乳腺癌癌组织高于癌旁组织。患者乳腺癌组织中MMP-3 总阳性率为78.75%（63/80）、癌旁组织中总阳性率为7.50%（6/80），两者比较，差异有统计学意义（χ2=82.790，P=0.000），乳腺癌癌组织高于癌旁组织。见图1。

2.2 CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 在不同临床特征乳腺癌组织中总阳性率的比较

不同岁数患者CD15、CD44v6 及MMP-3 总阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。是否绝经患者CD15、CD44v6 及MMP-3 阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。是否淋巴结转移患者CD15、CD44v6、MMP-3 阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），有淋巴结转移患者阳性率较高。不同组织分级患者的CD15、CD44v6 及MMP-3 阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ级阳性率高于Ⅰ级。见表1。

图1 乳腺组织CD15、CD44v6、MMP-3 阳性表达 （×400）

表1 不同临床特征乳腺癌组织中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 阳性率的比较 例（%）

2.3 CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 与临床病理指标的相关性

乳腺癌组织中CD15 抗原与淋巴结转移情况呈正相关（rs=0.487，P=0.000），与组织学分级呈正相关（rs=0.561，P=0.000），与患者的年龄无相关性（rs=0.187，P=0.189），与绝经无相关性（rs=0.207，P=0.134）。CD44v6 蛋白与淋巴结转移情况呈正相关（rs=0.417，P=0.000），与组织学分级呈正相关（rs=0.508，P=0.000），与患者的年龄无相关性（rs=0.203，P=0.135），与绝经无相关性（rs=0.156，P=0.231）。MMP-3 与淋巴结转移情况呈正相关（rs=0.412，P=0.000），与组织学分级呈正相关（rs=0.524，P=0.000），与患者的年龄无相关性（rs=0.203，P=0.114），与绝经无相关性（rs=0.179，P=0.264）。

2.4 乳腺癌组织中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 表达的相关性

2.4.1 CD15 抗原与CD44v6 蛋白表达的相关性 在61 例CD15 抗原阳性表达患者中，CD44v6 蛋白总阳性率为91.80%（56/61），阴性率为8.20%（5/61）；在19 例CD15 抗原阴性表达患者中，CD44v6 蛋白总阳性率为3.28%（2/19），阴性率为96.72%（17/19）。乳腺癌组织中CD15 与CD44v6呈正相关（rs=0.453，P=0.005）。

2.4.2 CD15 抗原与MMP-3 在表达的相关性 在61 例CD15 抗原阳性表达患者中，MMP-3 总阳性率为96.72%（59/61）5，阴性率为3.28%（2/61）；在19 例CD15 抗原阴性表达患者中，MMP-3 蛋白总阳性率为8.20%（5/19），阴性率为73.68%（14/19），乳腺癌组织中CD15 与MMP-3 呈正相关（rs=0.778，P=0.001）

2.4.3 CD44v6 蛋白与MMP-3 在乳腺癌组织中的表达的相关性 在59 例CD44v6 蛋白阳性表达患者中，MMP-3 总阳性率为94.92%（56/59），阴性率为5.08%（3/59）；在21 例CD44v6 蛋白阴性表达患者中MMP-3 总阳性率为10.17%（7/22），阴性率为71.42%（15/22），CD44v6 与MMP-3 在乳腺癌组织中呈正相关（rs=0.675，P=0.001）。

3 讨论

乳腺癌恶性肿瘤的浸润与转移是个多步骤且复杂的过程，涉及到肿瘤细胞与细胞间质及肿瘤细胞之间错综复杂的关系。而黏附分子及其配体在恶性肿瘤的浸润、转移过程发挥着重要作用[1-2]。目前黏附分子可分为5 类，其中CD15 属于选择素家族中重要的成员，又被称为粒细胞相关抗原，是上皮细胞更新分裂以及分化的重要标志物。CD15 不同程度的广泛表达于不同组织的上皮细胞中，当发生恶性肿瘤时，组织结构紊乱，正常组织中具有极性分布的CD15 随之发生明显的异质变化，在正常乳腺组织中CD15 则呈弱阳性表达，而在乳腺癌组织中则呈异常高表达[3-4]。 CD15 通常以混合形式存在于腺腔缘、细胞膜或者细胞浆，但其阳性物质主要分布在细胞浆内。ZHANG等[5]研究发现CD15 可做为脑瘤诊断鉴别的重要指标。JEEP[6]和NIU 等[7]对结肠癌中CD15 表达的研究亦支持上述结论。

CD44 分子又被称为Hermes 抗原，是一种广泛分布于细胞表面的跨膜蛋白，主要增强肿瘤细胞的黏附性和运动能力，影响肿瘤细胞的发生、发展，以及浸润、转移，近年来越来越受到人们的重视。CD44v6 是目前研究较多的变异体之一，其参与到激活淋巴细胞、信号传导及促进细胞间黏附等生物学过程[8]。国内外新近研究均显示CD44v6 参与乳腺癌细胞的迁徙与移动，加速病情的恶化[9-11]。基质金属蛋白酶家族的成员几乎能降解所有细胞外基质成分[12]。而其中MMP-3 主要在基因转录水平、酶原激活条及MMP 抑制剂的调节起活性作用[13-14]。在正常的乳腺组织中，MMP-3 的表达处于低水平，但受外界刺激或内环境改变后可引起其表达水平的变化。LOH 等[15]研究发现大鼠乳腺癌组织中MMP-3 表达量显著增加，给予蒙药乳腺-1号治疗后，MMP-3 表达量显著下降。

在本研究中乳腺癌患者的CD15 抗原、CD44v6蛋白及MMP-3 在肿瘤组织中的表达高于癌旁组织，表明检测CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 水平能反映乳腺癌病情的轻重程度，但与患者的年龄或者是否绝经无关；也有研究表明乳腺癌的发病率与是否生育、第一次生育年龄、生育次数及生育间隔都有密切的联系，后期研究可以从这些方面加以考虑[16-17]。从研究中还发现CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 在乳腺癌组织中的表达呈正相关。

综上所述，CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3在乳腺癌组织中的表达具有一定的相关性，临床上联合检测CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 的表达水平，对鉴别诊断乳腺肿瘤良恶性病变程度具有重要参考价值。