无偿献血者ABO血型鉴定不一致的原因分析

刘德兴 虞莉（通讯作者）

（扬州市中心血站 江苏 扬州 22507）

正确鉴定ABO血型是输血前的最重要的一项检测，也是血和站最基本的一项业务技能，在对无偿献血者进行ABO血型鉴定时，经常会出现街头初筛和实验室复核血型不一致、实验室一检和二检血型不一致、正定型和反定型不一致的现象。如何联合使用多种检测方法，对无偿献血者的血型进行鉴定，找出血型鉴定不一致的原因，确保血液检测血型报告的准确性，也就成为血站检验科一个经常遇到但又必须正确解决的问题[1]。在血站ABO血型鉴定结果不一致中，大部分都是由于街头血液初筛工作人员的责任心问题而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技术性原因，如何保证街头初筛血型准确率及提高实验室血型鉴定的技术水平是解决血型鉴定不一致的两个主要方面。保证初筛血型的正确率和提高正反定型不一致时的技术分析水平，也就能够基本解决绝大部分的血型不符的情况，下面重点对这两个方面的问题如何解决进行设计和讨论研究。

1.资料与方法

1.1 一般资料

从2009年到2014年，血站检验科共检测249082人次，调查发现有157例血型鉴定不一致的情况。

1.2 试剂和材料

抗A抗B标准血清（单克隆抗体，上海血液生物医药）、标准红细胞（上海血液生物医药）、不规则抗体筛选细胞（上海血液中心）；全自动血型仪（汉泰HEMOtype）。

1.3 方法

严格按照我站实验室ABO血型鉴定的标准操作规程进行操作和汉泰全自动血型分析仪的SOP进行实验。

1.4 正反定型结果不一致的处置方法

如发现ABO正反定型不一致，首先要重复做试验一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和分析试验结果和临床症状，就可以解决问题[2]。对一些疑难问题必须进一步研究，初步检查步骤包括：

（1）首先用盐水试管法对血型不一致进行检测，如果检测结果一致则说明血型不一致由于全自动血型仪检测过程中出现判读失误；如果检测结果不一致，应将红细胞及血清试验在水浴箱中孵育（37℃）和然后用显微镜检查核实，以排除冷凝集素影响。

（2）如果检测结果仍然不一致，可以进行吸收放散试验，根据结果来判定是否为抗体或抗原减弱导致结果不一致。如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的TK受体；或产生机制不大明了的Tn受体所引起。

（3）如果仍然不一致，可以进一步采用筛选谱细胞或亚型试剂进行检测，检测出不同的血型亚型。

2.结果

2.1 2009年—2014年我站各种血型错误及具体原因一览，见表1。

表1 2009年—2014年我站血型不一致情况统计表

2.2 针对表1结果中正反定型不一致的42例标本进行进一步检测，查找不一致原因，具体见表2。

表2 42例标本正反定型不一致结果分析表

3.讨论

从表1中可以看出在血站ABO血型鉴定结果不一致中，大部分都是由于街头血液初筛工作人员的责任心问题而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技术性原因，如何保证街头初筛血型准确率及提高实验室血型鉴定的技术水平是解决血型鉴定不一致的两个主要方面。保证初筛血型的正确率和提高正反定型不一致时的技术分析水平，也就能够基本解决绝大部分的血型不符的情况[3]。

针对以上情况，我站为了提高街头血型初筛正确率设计了一套方案来规范街头的初筛工作。每日街头初筛后要求在全血提交前再次复核一次血型（同时核对电脑登记血型），并且详细规定日常工作中注意事项，包括试剂的储存和使用注意点，街头采血车的工作环境温度，初筛血型读结果的最少时间，红细胞的吸取量（保证抗原抗体反应比例），遇到可疑结果时应用试管法复查，遇有单位集体献血时合理配备人员的数量，加强工作人员的责任心教育。提高血站ABO血型鉴定的正确率，首先从源头和流程上对街头血型初筛进行质量控制，加强初筛工作人员的责任心教育，遵守规定的流程和操作规范，保证采血车的环境温度，严格控制好试剂的储存条件和使用时间，把握好抗原抗体比例，规范的进行血型鉴定操作，认证审核结果，出现可疑结果时不轻易下结论，及时进行复核，能够大大提高血型初筛的准确率。此套方案的实施，我站街头初筛血型错误由以前的平均每年26例下降到目前现在的每年13例。

对于正反定型不一致的情况，我们对42例ABO正反定型不符标本分别通过在不同温度条件下进行正反定型检测并结合吸收放散试验或筛选细胞试剂检测结果，ABO血型鉴定结果不一致结果显示：待检血球抗原效价降低12例；有冷凝集素11例；年龄因素导致抗体效价降低11例；人为判断原因2例经正反定型试管法重新鉴定正反定型符合；通过吸收放散试验鉴定出亚型2例；通过不规则抗体筛查出不规则抗体4例。提高实验室的血型鉴定技术水平，对疑难血型鉴定，特别是ABO血型正反定型不符合，切不可以正定型结果作为最后鉴定结果，会造成血型的误判，造成不必要的输血反应，引起严重后果。以ABO血型抗原效价减弱是ABO正反定型不符的最常见的原因，占28.57%。红细胞A或B抗原的弱化也是造成正反定型不符合的主要原因，抗原弱化是遗传基因所决定的弱表现型（即亚型），12例抗原效价降低中，9例为B抗原效价降低，3例为A抗原效价降低；1例表现为Am亚型，1例表现为Bm亚型。无论是弱A或是弱B，正定型都容易漏检出，A抗原和B抗原的弱化既可能是遗传基因导致的弱表现型，也可能是某些疾病导致的发生的，抗原减弱正定型中应加做抗A抗体、抗B抗体检测，必要情况可以进行抗H的检测，并观察红细胞凝集强度，以鉴别是抗原减弱引起的血型正反定型不符，同时通过吸收放散试验、唾液血型物质检测，以得到正确的血型结果[4]。冷凝集也是常见的原因，占26.19%，一般只要测定时，保持37℃，冷凝集即可消失。冷凝集素，使用不同温度条件的正反定型检测都能够得到确证。正常人血清中含有少量冷凝集素且效价很低，同时其只有在温度为4℃左右才具有活性，室温或37℃均不凝集，对ABO定型一般均无影响。但是由于个体差异，个别人有冷凝集素大量增高的特例，是室温环境下常见ABO血型正反定型不一致或交叉配血不相符的原因之一。当血清学反应特点考虑是冷凝集素时，同时将正、反定型管放置37℃水浴箱孵育30min后用显微镜观察结果，可以获得正确的定型结果。ABO血型系统的抗体丢失或减弱是正反鉴定不一致的原因之一，一般加大反定型管血清量（2倍或数倍）可出现红细胞凝集，表明血型抗体减弱降低，而不是完全缺失；如果是抗体完全缺失，ABO定型通过正定型确定的同时进一步通过吸收放散试验确证比较合理[5]。人为原因多为抗原抗体比例不当。ABO以外抗体的存在即不规则抗体的存在也是正反定型不符的原因。血清中有抗M等不规则抗体存在时使用不同温度条件下的正反定型结合谱细胞试剂检测可以得到满意的结果。此外，环境温度高对标准血清抗A、抗B效价影响较大，血型试剂应避免长时间高温环境放置，以确保血型出筛结果的准确性。血型鉴定错误还与检验人员责任心及专业素质相关，试剂反应时间不足、没有及时核对初筛血型或者马虎填写都可以导致差错的发生。把握好试剂反应时间、加强工作责任心和提高专业素质对减少人为差错发生，确保临床输血安全有重要意义。由于无偿献血的血液均经过初筛的健康人的血液，出现正反定型不符的情况较少，一般出现的正反定型不符合也容易解决。

综上所述，采供血机构应进一步加强对街头采血人员的培训，不断增强员工的责任心，减少因人为因素导致的血型鉴定或者录入错误；同时加强实验室建设，提升实验室技术，特别是相关疑难血型鉴定试剂的采购，从而提升实验室检测能力。如部分血型试剂使用较少，可以委托上一级采供血机构进行疑难血型鉴定，以降低成本。