蟠桃丸化裁方对自发性高血压大鼠主要安全性指标的影响

郭曼萍，施伟丽，赵俊男，徐凤芹，丛伟红，陈可冀

蟠桃丸是清代宫廷御医为乾隆皇帝特制的保健养生秘方，由人参、天冬、麦冬、枸杞子、地黄、当归、分心木等组成，20世纪80年代国医大师陈可冀院士主持挖掘清代宫廷医药档案时将其整理并用于大众，成药名为清宫寿桃丸。近代研究表明，蟠桃丸不仅有养生保健作用，在治疗老年认知障碍、高血压病、冠心病、糖尿病、脂代谢异常、慢性肾功能不全、前列腺增生等方面也有较好效果[1-6]。

中医药在临床中取得疗效的同时，其安全性也越来越引起关注。目前，临床上常借助常规血液学分析、血液生化检测、尿样分析和病理学检查等来判断中药的安全性[7]，血液相关检测中的溶血相关指标、肝肾功能相关指标、胆碱酯酶是常用的安全性评价指标。蟠桃丸化裁方是蟠桃丸的精简方，为陈可冀院士临床上治疗衰老、肾虚相关疾病的经验方。根据临床相关疾病的常见用药时长，本实验通过观察自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats，SHR)给予蟠桃丸化裁方11周后红细胞、血红蛋白、胆红素、肝肾功能、胆碱酯酶、碱性磷酸酶等指标的改变，探讨其安全性，以期为临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要耗材及仪器 2 mL EDTA K3采血管，生产批号D160433W；5 mL血清促凝管(Z)，生产批号A16013WC，由西苑医院提供；全自动血液分析仪(日本东亚SYSMEX株式会Sysmex XE-5000)、全自动生化分析仪(瑞士罗氏公司 Cobas8000)由西苑医院检验科提供。

1.2 实验动物 12周龄SPF级WKY大鼠12只，SPF级SHR 60只，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。SPF级动物房适应性饲养3 d后分为6组：对照组(WKY)、模型组(SHR)、厄贝沙坦+多奈哌齐组、多奈哌齐组、蟠桃丸化裁方低剂量组、蟠桃丸化裁方高剂量组，每组12只，雌雄各半。给予规律光照(昼夜各12 h)，自由饮食饮水，环境温度(20±2)℃，相对湿度45%～70%。

1.3 药物及给药方法 厄贝沙坦片(安博维)，每片0.15 g，由赛诺菲(杭州)制药有限公司提供，生产批号：J20130049；盐酸多奈哌齐(安理申)，每片5 mg，由卫材(中国)药业有限公司提供，生产批号：H20070181；蟠桃丸化裁方(组成：枸杞子、分心木等)，由中国中医科学院西苑医院制剂室提供。厄贝沙坦+多奈哌齐组按厄贝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+盐酸多奈哌齐0.52 mg/(kg·d)灌胃给药，多奈哌齐组按盐酸多奈哌齐0.52 mg/(kg·d)灌胃给药，蟠桃丸化裁方低、高剂量组分别按蟠桃丸化裁方3.07 g/(kg·d)、6.14 g/(kg·d)灌胃给药，模型组及正常对照组予等体积生理盐水灌胃，给药11周。

1.4 观察指标

1.4.1 大鼠体重及一般情况观察 各组大鼠每周测体重1次，观察各组大鼠体重变化，每天给药时观察大鼠精神状态、活动情况及毛色。

1.4.2 大鼠溶血相关指标检测 实验结束后腹主动脉采血，检测血浆红细胞数量、红细胞比容、平均红细胞体积、红细胞分布宽度；血红蛋白量、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度；血清直接、间接胆红素及总胆红素水平。

1.4.3 大鼠血清胆碱酯酶检测 实验结束后腹主动脉采血，检测血清胆碱酯酶。

1.4.4 大鼠肝肾功能指标检测 实验结束后腹主动脉采血，检测肝功能指标：天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)；检测肾功能指标：血肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 结 果

2.1 大鼠一般情况及体重观察 对照组大鼠比较安静，喜睡，胆小易惊，毛色发黄；模型组大鼠易受外界影响，活跃，毛色发白，给药组与模型组比较未见明显不同。分别统计雄性和雌性大鼠体重，发现雌鼠对照组体重较模型组显著升高(P<0.01)，蟠桃丸化裁方高、低剂量组大鼠体重较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)，详见表1。雄鼠对照组体重与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)；蟠桃丸化裁方高、低剂量组大鼠体重较模型组升高(P<0.05或P<0.01)。详见表2。

表1 蟠桃丸化裁方对SHR雌鼠体重的影响(±s) g

与对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.05，3)P<0.01

表2 蟠桃丸化裁方对SHR雄鼠体重的影响(±s) g

与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 蟠桃丸化裁方对溶血相关指标的影响 红细胞数量、形态变化及胆红素水平是间接反映溶血状态的常用指标。各组间红细胞计数、红细胞比容、红细胞平均比容、红细胞分布宽度比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。与SHR模型组相比，蟠桃丸化裁方低剂量组平均血红蛋白浓度明显降低(P<0.05)，蟠桃丸化裁方高剂量组血红蛋白、平均血红蛋白浓度均明显降低(P<0.05或P<0.01)，西药组血红蛋白相关指标差异无统计学意义(P>0.05)。详见表4。与SHR模型组相比，蟠桃丸化裁方低剂量组间接胆红素、直接胆红素水平明显降低(P<0.05或P<0.01)，蟠桃丸化裁方高剂量组、西药组直接胆红素水平差异无统计学意义(P>0.05)。详见表5。

组别只数红细胞计数(×1012/L)红细胞比容(L/L)红细胞平均体积(fL)红细胞分布宽度(%)对照组129.34±0.140.44±0.0147.55±1.5217.17±0.43模型组129.32±0.490.42±0.0145.98±0.7816.99±0.65厄贝沙坦+多奈哌齐组129.10±0.630.41±0.0245.39±1.6216.91±0.84多奈哌齐组128.96±0.600.42±0.0146.47±1.6517.08±1.04蟠桃丸化裁方低剂量组129.10±0.510.42±0.0146.16±1.6216.78±0.67蟠桃丸化裁方高剂量组128.92±0.550.42±0.0246.12±1.7016.55±1.05

组别只数血红蛋白(g/L)平均血红蛋白含量(pg)平均血红蛋白浓度(g/L)对照组12154.67±4.2716.55±0.46348.67±4.63模型组12149.42±6.7216.04±0.19349.00±4.05厄贝沙坦+多奈哌齐组12144.18±7.2415.85±0.54349.45±4.52多奈哌齐组12144.82±6.6816.17±0.41348.18±4.92蟠桃丸化裁方低剂量组12144.64±3.2015.93±0.75344.73±5.371)蟠桃丸化裁方高剂量组12141.64±6.732)15.90±0.43344.73±5.641)

与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

表5 蟠桃丸化裁方对大鼠胆红素的影响(±s) μmol/L

与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.3 蟠桃丸化裁方对SHR血清胆碱酯酶水平的影响 与对照组比较，SHR模型组血清胆碱酯酶水平明显升高(P<0.01)。与SHR模型组相比，多奈哌齐组及蟠桃丸化裁方高、低剂量组血清胆碱酯酶水平明显升高(P<0.01)；厄贝沙坦+多奈哌齐组血清胆碱酯酶水平差异无统计学意义(P>0.05)。详见表6。

2.4 蟠桃丸化裁方对SHR 肝功能的影响 与WKY对照组比较，SHR模型组AST、γ-GT水平明显升高(P<0.01)；与SHR模型组相比，各给药组ALT、AST、γ-GT水平差异无统计学意义(P>0.05)。详见表7。

2.5 蟠桃丸化裁方对SHR肾功能的影响 与对照组相比，SHR模型组尿酸水平明显升高(P<0.05)；与SHR模型组比较，各用药组尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平差异无统计学意义(P>0.05)，肌酐、尿酸水平有下降趋势。详见表8。

表6 蟠桃丸化裁方对SHR血清胆碱酯酶的影响(±s)U/L

与对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.01

表7 蟠桃丸化裁方对SHR肝功能的影响(±s) U/L

与对照组比较，1)P<0.01

组别只数尿素(mmol/L)尿素氮(mg/dL)肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)对照组126.61±1.2618.52±3.5226.63±5.0761.50±23.96模型组127.18±1.3720.10±3.8227.08±3.4597.08±21.011)厄贝沙坦+多奈哌齐组126.25±0.5317.50±1.4927.67±2.1589.42±14.27多奈哌齐组126.78±0.8018.97±2.2626.00±2.0095.08±20.27蟠桃丸化裁方低剂量组127.86±0.6322.00±1.7826.82±2.1489.45±19.53蟠桃丸化裁方高剂量组126.94±0.8919.44±2.5026.17±4.0493.58±17.13

与对照组比较，1)P<0.05

3 讨 论

中医药在当今世界的医疗卫生保健事业中扮演着不可或缺的角色，但是中药的安全性问题是客观存在的，需要科学地进行评价。蟠桃丸有补肾生精、益元强壮的功效，在高血压病、老年性痴呆等心脑血管疾病的治疗中取得较好的疗效，其精简方——蟠桃丸化裁方是陈可冀院士的临床经验用方。研究表明，SHR可以作为筛选认知功能紊乱治疗药物的动物模型[8-11]。本实验以SHR为高血压合并认知障碍的动物模型，给药11周，观察了蟠桃丸化裁方对SHR红细胞、血红蛋白、血清胆红素3个溶血指标的影响，同时检测肝肾功能相关指标及血清胆碱酯酶。

红细胞完整性的损害，定义为溶血。红细胞功能障碍与心血管疾病的严重并发症相关，如高血压、出血、中风、心律失常和炎症[12]。最近的实验证据表明，红细胞是具有额外功能的重要的组织间通信系统，红细胞功能障碍与心血管疾病的一系列严重并发症有关，如难以控制的高血压[13]、出血并发症[14]、室上性和室性心律失常以及炎症反应[15]。血红蛋白对红细胞的功能至关重要，其在血管内溶血期间从细胞释放到血浆中时，会产生一氧化氮的消耗、氧化应激和血管功能障碍[12]。血清胆红素主要是由体内衰老的红细胞发生裂解释放出的血红蛋白所产生，包括直接胆红素和间接胆红素两种。红细胞遭受较大破坏造成的溶血主要以间接胆红素升高为主要特征[16-17]。肝脏受损时机体的总胆红素及直接胆红素浓度会出现明显升高症状，常常能够反映出较严重的肝细胞损害情况[18-20]。本实验中各组间红细胞计数、红细胞比容、红细胞平均体积、红细胞分布宽度等差异无统计学意义。与SHR模型组相比，蟠桃丸化裁方低剂量组平均血红蛋白浓度、间接胆红素、直接胆红素显著降低，高剂量组血红蛋白、平均血红蛋白浓度均显著降低，西药组胆红素、血红蛋白等指标无明显差异。提示服用蟠桃丸化裁方未导致明显的溶血反应，血红蛋白下降可能是蟠桃丸化裁方的药效作用。

血清胆碱酯酶主要由肝细胞产生，是肝脏合成功能的灵敏指标。凡是能够引起肝脏合成功能下降的疾病，均可导致血清胆碱酯酶活力降低，其下降幅度与功能呈正相关[21]。研究表明，许多疾病中血清胆碱酯酶活性均有不同程度的下降[22]，如肾功能不全[23]、阿尔兹海默病[24]、血管性痴呆[25]、心力衰竭[26]、脓毒血症[27]。在危重症病人中，血清胆碱酯酶水平对判断危重症病人病情严重程度及预后有一定的意义[28]，可作为安全性评价指标之一。本实验中蟠桃丸化裁方组血清胆碱酯酶水平与SHR模型组比较显著升高。提示服用蟠桃丸化裁方可上调血清胆碱酯酶水平。

另外，本实验中SHR雌鼠体重明显低于其对照品系WKY组，雄鼠体重与WKY对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，而蟠桃丸化裁方高、低剂量组雌雄大鼠体重较SHR对照组均明显升高，这可能与服用蟠桃丸化裁方降低了SHR的自发性活动水平有关[29]。药物常见的不良反应是对肝肾功能的影响。本实验中模型组AST、γ-GT、尿酸水平较对照组明显升高，提示随着血压的升高，模型组肝肾功能出现损伤，而蟠桃丸化裁方组ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平与模型组比较均无统计学差异，且肌酐、尿酸水平有下降趋势，提示常规服用蟠桃丸化裁方不会加重SHR的肝肾损害。

本实验数据提示，经过11周的蟠桃丸化裁方灌胃给药，SHR的肝肾功能未见明显异常，未发生明显溶血反应，且血清胆碱酯酶水平上调，说明蟠桃丸化裁方具有一定的安全性。本实验中使用蟠桃丸化裁方未发现明显的不良反应事件，以上结果仅为蟠桃丸化裁方在高血压合并认知障碍的临床应用中提供参考。