APP下载

鱼金注射液对大鼠的亚急性肝肾毒性研究

2019-06-27姜嫄张长海

中国民族民间医药·上半月 2019年3期
关键词:实验研究

姜嫄 张长海

【摘 要】目的:比较不同剂量鱼金注射液对大鼠的亚急性肝肾毒性。方法:清洁级SD大鼠60只随机分为3组,每组雌雄各10只,分别为正常组、鱼金注射液低剂量组(2mL/kg)、鱼金注射液高剂量组(4 mL/kg),分别每日灌胃给予生理盐水2mL/kg、鱼金注射液2mL/kg、4mL/kg,连续5周。于末次给药后摘眼球采集大鼠血液,处死,取完整肝脏及肾脏,称取肝脏、肾脏湿重,计算肝脏指数和肾脏指数,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量,HE染色观察大鼠肝肾组织病理变化。结果:与正常组比较,鱼金注射液低、高剂量组体重、肝脏指数、肾脏指数和血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr均未见显著变化(P>0.05);光镜下显示,鱼金注射液低、高剂量组肝肾病理损伤与正常组无明显差异。结论:给予大鼠鱼金注射液5周并未引发机体肝肾组织的明显毒性反应。

【关键词】鱼金注射液;亚急性肝肾毒性;实验研究

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2019)5-0007-07

鱼金注射液是一种纯中药注射剂,由鱼腥草、金银花提取制成,现有质量标准采用GC色谱法测定甲基正壬酮。鱼腥草始载于《名医别录》,为三白草科植物蕺菜(Houttuynia cordata Tunb)的鲜全草或干燥地上部分,性微寒、味辛,归肺经,具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功效,用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢、痈肿疮毒等症[1] 。其主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物,尚含生物碱、脂肪酸、有机酸、蕺菜碱、钾盐等。现代药理研究[2-7]表明,鱼腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗过敏、镇咳、增强机体免疫力等药理作用。现部分地区已对其进行人工培植,以四川、贵州、云南等地较为广泛。金银花(Lonicera Japonica Thunb)又名忍冬花,具有悠久的用药历史,是忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花[1]。“忍冬”始载于《名医别录》,初始以茎叶入药,李时珍所著《本草纲目》载:“茎叶及花,功用皆同”。自此,花与藤叶以“忍冬”或“金银花”为名,同作一药使用,当代主以花入药。金银花性寒,味甘,入肺、心、胃经,具有清热解毒、抗炎、补虚疗风的功效,主治胀满下疾、温病发热、热毒痈疡,丹毒和肿瘤等症[1,8]。从金银花中分离鉴定的化学成分类型较多,主要有挥发油类、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、环烯醚萜类等[9]。药理研究[10]表明,金银花具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利胆、降血糖、降血脂、增强免疫、抗氧化、抗生育、止血等作用。

鱼金注射液被广泛地应用于临床治疗呼吸、消化、泌尿生殖等系统的感染性疾病,取得了较好的效果[11]。有研究[12]选取128例支气管肺炎患者为研究对象,使用中药鱼金注射液联合抗生素治疗,临床疗效显著。另有学者研究发现山海丹牌鱼金注射液口腔雾化给药具有抗炎、解热及抗菌作用[13]。研究以小兒支气管肺炎为研究对象,发现鱼金注射液用于雾化吸入对发热、咳嗽、气急等症状疗效显著,具有起效快、退热作用好、且全身副作用小等特点[14]。目前,尚未出现专门针对鱼金注射液毒副作用、毒性物质基础和产生毒副作用的剂量范围的相关研究。本实验以大鼠为研究对象,观察2mL/kg、4mL/kg鱼金注射液较长时间应用对机体肝、肾功能的影响,为鱼金注射液临床使用剂量、时间等提供相应实验依据。

1 仪器与材料

1.1 动物 SD大鼠60只,雌雄各半,(200±20)g,清洁级,购自重庆腾鑫生物技术有限公司,动物许可证号SCXK(军)2012-0011。

1.2 药品 鱼金注射液(批号:17060621E,朗致集团万荣药业有限公司)。

1.3 试剂 采血针(批号:170905,南昌市赣达医疗器械有限公司);采血管(批号:180529,南昌市赣达医疗器械有限公司);高效切片石蜡(批号:20180118,上海华灵康复器械厂);多聚甲醛(批号:20180112,国药集团化学试剂有限公司);PBS磷酸盐缓冲液(批号:ZLI-9062,北京中杉金桥生物技术有限公司);无水乙醇(AR级,批号:GB678-90,江苏海兴化工有限公司);二甲苯(AR级,批号:20180110,天津致远化学试剂有限公司);苏木素染液(批号:BA-4097,珠海贝索生物技术有限公司);伊红染液(批号:BA-4099,珠海贝索生物技术有限公司);盐酸(AR级,批号:20180118,成都市科龙化工试剂厂);中性树胶(批号:20171009,国药集团化学试剂有限公司);重铬酸钾(AR级,批号:20180120,成都市科龙化工试剂厂);浓硫酸:(AR级,批号:20180119,成都市科龙化工试剂厂);组织包埋盒(批号:31050102W,江苏世泰实验器材有限公司)。

1.4 仪器 5800全自动生化仪(贝克曼);R35刀片(日本羽毛安全剃刀株式会社);转轮式切片机(德国徕卡-2016);TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机(常州市中威电子仪器有限公司);BMJ-Ⅲ型包埋机(常州郊区中威电子仪器厂);PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器有限公司);BA400Digital数码三目摄像显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司);Image-Pro Plus 6.0图像分析软件(美国Media Cybernetics公司)。

2 方法

2.1 动物分组和给药 60只清洁级SD大鼠随机分为3组,每组20只,雌雄各半。正常组、鱼金注射液低剂量组(2mL/kg)、鱼金注射液高剂量组(4mL/kg),分别灌胃给予生理盐水2mL/kg、鱼金注射液2mL/kg、鱼金注射液4mL/kg,每天灌胃给药1次,连续给药5周。

2.2 鼠肝脏指数和肾脏指数 取大鼠新鲜肝脏、肾脏,使用生理盐水将其冲洗干净,分别称取肝脏和肾脏湿重,计算肝脏指数和肾脏指数。肝脏指数=肝重(mg)/体重(g),肾脏指数=肾重(mg)/体重(g)。

2.3 大鼠肝、肾功能检测 摘眼球采集大鼠血液,以2500rpm/min,4 ℃离心15min后吸取血清,全自动生化仪检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。

2.4 大鼠肝脏和肾脏病理检测 取大鼠新鲜肝肾组织适当大小迅速放入4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋、切片,HE染色,采用麦克奥迪实业集团有限公司生产的BA200Digital数码三目摄像显微摄像系统对切片进行图像采集,每张切片先于40倍下观察全部组织,观察大体病变,选择要观察的区域采集100倍、400倍图片,观察具体病变。

2.5 统计学处理 实验结果以(x±s)表示,采用SPSS18.0统计软件t检验分析,P<0.05表示有统计学差异。

3 结果

3.1 大鼠肝、肾脏器指数检测结果 与正常组比较,鱼金注射液低、高剂量组雄性与雌性大鼠体重及肝脏指数、肾脏指数差异均无统计学意义(P>0.05)。見表1~2。

3.2 大鼠血清肝、肾功能检测结果 与正常组比较,鱼金注射液低高剂量组雄性与雌性大鼠肝肾功能检测指标ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3~5。

3.3 大鼠肝组织病理检测结果 正常组肝脏:肝脏被膜完整,肝细胞分叶不明显,肝索排列紊乱,少量肝细胞颗粒或空泡变性,胞质染色不均,可见数量不等的细小颗粒物质或大小不等的空泡;肝窦内未见明显的炎细胞浸润;门管区结构较为完整,未见明显的纤维组织增生及炎细胞浸润;其他亦未见明显病理变化。鱼金注射液低高剂量组肝脏组织镜下所见与正常组比较无明显差异。见图1、图2。

3.4 大鼠肾组织病理检测结果 正常组肾脏组织被膜完整,皮质和髓质分界清晰,肾小球结构完整清晰,未见毛细血管基底增厚及炎性渗出;部分肾小管可见上皮细胞变性,胞质染色不均;间质内未见炎细胞浸润及纤维组织增生;其他亦未见明显病理变化。鱼金注射液低高剂量组肾脏组织镜下所见与正常组比较无明显差异。见图3、图4。

4 讨论

鱼金注射液是一种新型中药注射剂,具有清热解毒、疏散风寒之功效,疗效可靠。临床应用中,其多采用静脉滴注、穴位注射或雾化吸入等方式,可用于治疗急性上呼吸道感染、急性支气管炎等,有“中药中的抗生素”之称。但由于中药制    剂药物纯度一直存在争议,因此目前在临床的推广运用上有一定阻碍。目前,尚未出现专门针对鱼金注射液毒副作用、毒性物质基础和产生毒副作用的剂量范围的相关研究。本实验分别对大鼠灌胃给予鱼金注射液低剂量(2mL/kg/d)、高剂量(4mL/kg/d),分别相当于人体推荐剂量的 50、100 倍,持续5周,就肝肾功能血清指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量,肝脏指数、肾脏指数及肝肾HE染色组织病理改变,探讨其对肝、肾组织的亚急性毒性。结果显示,鱼金注射液低剂量组、鱼金注射液高剂量组血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr水平,肝脏指数、肾脏指数及肝肾组织病理改变与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),表明连续较长时间(5周)应用大剂量鱼金注射液(临床等效剂量的50、100倍)无显著肝肾毒性,其安全性较佳。本研究部分填补了鱼金注射液药理毒理内容,为其在临床上的推广运用提供了理论基础。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京:中国医药科技出版社,2015.

[2]Kim GS, Kim DH, Lim JJ, et al. Biological and antibacterial activities of the natural herb Houttuynia cordata water extract against the intracellular bacterial pathogen salmonella within the RAW 264. 7 macrophage [J]. Biol Pharm Bull,2008,31(11):2012-2017.

[3]Kim D, Park D, Kyung J, et al. Anti-inflammatory effects of Houttuynia cordata supercritical extract in carrageenan-air pouch inflammation model [J]. Lab Anim Res,2012,28(2):137-140.

[4]Chen X, Wang Z, Yang Z, et al. Houttuynia cordata blocks HSV infection through inhibition of NF-κB activation [J]. Antiviral Res,2011,92(2):341-345.

[5]Zhou N N, Tang J, Chen W D, et al. Houttuyninum, an active constituent of Chinese herbal medicine, inhibits phosphorylation of HER2/neu receptor tyrosine kinase and the tumor growth of HER2/neu-overexpressing cancer cells [J]. Life Sci,2012,90(19/20):770-775.

[6]Toda S. Antioxidative effects of polyphenols in leaves of Houttuynia cordata on protein fragmentation by copper hydrogen peroxide in vitro [J]. J Med Food,2005,8(2):266-268.

[7]Lee JS, Kim IS, Kim JH, et al. Suppressive effects of Houttuynia cordata Thunb (Saururaceae) extract on Th2 immune response [J]. J Ethnopharmacol,2008,117(1):34-40.

[8]国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草(第七册第20卷)[M].上海:上海科学技术出版社,1999:529-536.

[9]宋亚玲,倪付勇,赵祎武,等. 金银花化学成分研究进展 [J]. 中草药,2014,45(24):3656-3664.

[10]刘玉峰,李鲁盼,马海燕,等. 金银花化学成分及药理作用的研究进展 [J]. 辽宁大学学报 (自然科学版),2018,45(3):255-262.

[11]刘杰,陈海金. 鱼金注射液的一般药理学研究 [J]. 中国药物与临床,2009,9(3):223-224.

[12]付强. 鱼金注射液联合抗生素治疗肺炎的临床疗效观察 [J]. 现代诊断与治疗,2014,25(12):2692.

[13]张艺芳,张文杉,任雷,等. 山海丹牌鱼金注射液口腔雾化给药药效学实验研究 [J]. 内蒙古中医药,2017,36(7):99-100.

[14]王平,焦旸. 鱼金注射液雾化吸入治疗支气管肺炎90例的临床观察 [J]. 中国卫生产业,2013,10 (28):64-66.

(收稿日期:2019-01-08 编辑:刘斌)

猜你喜欢

实验研究
考试成绩的评价方式对学生考试焦虑影响的实验研究
振动力量训练对技巧啦啦操运动员核心稳定性影响的实验研究
高校英语写作体验式教学法初探
论转化医学的当代成果和未来前景
词块教学法对高职学生英语写作影响的实验研究
高中英语习题分层设计研究