糖皮质激素受体基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎的关系探讨

池 毅， 李 辉， 毕 静

(深圳市职业病防治院皮肤性病科， 深圳 518001)

三氯乙烯是常用的工业原料，在金属脱脂、化工原料、医药中间体生产和农药生产等行业中均为重要的基础物质。三氯乙烯长期接触可导致严重的中毒事件，以三氯乙烯药疹样皮炎较为常见[1]。三氯乙烯药疹样皮炎多为职业原因所致，可出现全身性弥漫性暗红色肿胀、剥脱性皮炎、表皮坏死松解症等，常伴有眼、口、会阴部黏膜损害，甚至会导致内脏或神经系统损害，已成为人们重点关注的职业性疾病[2]。有研究报道，糖皮质激素受体(GR)对糖皮质激素药物的敏感性直接影响三氯乙烯药疹样皮炎的疗效及预后，且GR基因多态性与皮肤、黏膜变应性疾病的发生均存在紧密关系[3]，其中R477H、G679S位点是研究的热点。本研究旨在探讨GR基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎的关系，并分析后者的危险因素，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料对2012年1月-2018年10月深圳市职业病防治院收治的350例有三氯乙烯接触史的受检者的临床资料进行回顾性分析，其中有60例发生三氯乙烯药疹样皮炎，作为发生组，余290例作为未发生组。350例受检者中，男性286例，女性64例，年龄24～56岁，平均年龄(35.86±5.97)岁；三氯乙烯接触时长1周至13年，平均(4.52±1.08)年；行业：金属脱脂122例，化工原料85例，医药中间体生产65例，农业生产46例，其他32例。本次研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 纳入与排除标准纳入标准：均有三氯乙烯接触史，发生组均符合《职业病诊断与鉴定管理办法》诊断标准[4]且为初诊患者，所有受检者均接受GR基因R477H、G679S位点单核苷酸多态性检测，均有完整的临床资料,且患者本人均同意对其研究资料进行回顾性分析。排除标准：存在或合并其他原因导致的药疹样皮炎者，如失禁相关性皮炎、糖皮质激素依赖性皮炎、甲醛接触所致变应性接触性皮炎等，合并其他类型系统性疾病或脏器功能损伤者，存在先天性发育异常或功能障碍者，合并免疫缺陷者，存在沟通障碍者。

1.3 方法

1.3.1 试剂及仪器 真空采血抗凝管购自山东天爱医疗器械有限公司；全血基因组DNA快速提取试剂盒购自杭州昊鑫生物科技有限公司；甲酰胺、GeneScanTM120LIZ○RSize Standard、Snapshot Multiplex Kit购自美国ABI公司；引物委托上海生工科技有限公司合成；TP-96G型PCR扩增仪购自浙江托普仪器有限公司；3130XL型测序仪购自美国ABI。

1.3.2 DNA提取 所有受检者均于清晨空腹抽取肘静脉血，每位受试者抽取5 mL，置于真空采血抗凝管中，静置并将其放置于冰盒中，2 h内送至检验科进行检测。将待检测样本进行离心分离，取血浆并采用溶液型全血基因组DNA快速提取试剂盒对基因组的DNA进行提取。

1.3.3 GR基因R477H、G679S位点单核苷酸多态性检测 利用Snapshot多重单碱基延伸反应对等位基因进行检测，以Primer3软件在线设计聚合酶链反应(PCR)的引物，其中R477H位点引物：上游：TTCGCTAGCTAGCTCCTAGCTA；下游：TCTATCCTGGCTCTGCACTAGA；G679S位点引物：上游：TCGCTTTAAGCGCTTAGACTCC；下游：TTAGTTAGTCCCCTAGCTGCCA，引物长度均为248 bp。以PCR扩增仪实施扩增反应，反应体系：(1)Snapshot多重单碱基延伸反应：①延伸反应体系，共10 μL(其中Snapshot Multiplex Kit 5 μL+纯化后多重PCR产物2 μL+超纯水2 μL+延伸引物混合物1 μL)，循环条件：96℃持续1 min，(96℃持续10 s，50℃持续5 s，60℃持续30 s)×28，60℃持续1 min，4℃终止反应；(2)延伸产物检测：以测序仪纯化处理，取0.5 μL延伸产物，与甲酰胺9 μL+GeneScanTM120LIZ®Size Standard 0.5 μL与产物混合均匀，95℃变性5 min，以测序仪检测；在测序仪上收集原始数据，并利用GeneMapper 4.0软件对原始数据进行分析。

1.3.4 药疹样皮炎危险因素分析 总结可能影响药疹样皮炎发生的危险因素[5-6]，包括性别、年龄、行业、三氯乙烯接触时长、接触方式、GR基因R477H、G679S位点单核苷酸多态性等，将其作为自变量，将三氯乙烯药疹样皮炎是否发生作为因变量，进行危险因素分析，其中自变量赋值结果见表1。

表1 自变量赋值结果

1.4 观察指标(1)对比发生组和未发生组GR基因R477H、G679S位点基因型分布；(2)对比发生组和未发生组可能影响因素的构成比差异；(3)明确影响三氯乙烯药疹样皮炎发生的危险因素，统计其比值比(OR)，并探讨GR基因R477H、G679S位点等位基因与该病发生的关系。

1.5 统计学分析应用SPSS22.0软件对数据进行统计学分析，以“n/%”描述计数资料，组间对比采用χ2检验，若理论频数为1～5，则需校正；危险因素分析采用Logistic回归。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组GR基因R477H、G679S位点基因型分布比较发生组GR基因R477H位点、G679S位点CC基因型构成比与未发生组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，发生组上述位点CG基因型构成比均低于未发生组(P<0.05)，GG基因型构成比均高于未发生组(P<0.05)，见表2。

表2 2组GR基因R477H、G679S位点基因型分布对比(n/%)

2.2 2组可能影响因素的构成比比较发生组年龄>50岁、三氯乙烯接触时长>3年、直接接触构成比均高于未发生组(P<0.05)，且发生组GR基因R477H、G679S位点等位基因频率均高于未发生组(P<0.05)，2组性别、行业构成比差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。

2.3 三氯乙烯药疹样皮炎发生的危险因素Logistic回归分析年龄>50岁、三氯乙烯接触时长>3年、直接接触、GR基因R477H、G679S位点G等位基因均是三氯乙烯药疹样皮炎的危险因素(OR=5.966、5.129、7.221、4.272、7.121，P<0.05)，见表4。

表3 2组可能影响因素的构成比对比(n/%)

3 讨论

国际癌症研究署于1995年将三氯乙烯分类为“人类可能致癌”，可知三氯乙烯接触可对人们的健康造成极大的威胁。除此之外，三氯乙烯药疹性皮炎也是严重威胁我国居民健康的重要问题，对患者的身心健康、生活质量及家庭经济状况均可造成极大的打击[7-8]。但是目前关于三氯乙烯药疹性皮炎的发生机制认识尚浅。有研究报道，三氯乙烯药疹样皮炎的易感性与肿瘤坏死因子-α、代谢酶、白细胞介素-4等基因多态性均具有密切关系[9]，可知某些基因位点的单核苷酸突变可能会增加三氯乙烯药疹样皮炎的易感性，而唯有深入了解其发生机制才能制定有针对性的防治措施。

本研究结果显示，发生组GR基因R477H位点、G679S位点CG基因型构成比均低于未发生组(P<0.05)，GG基因型构成比均高于未发生组(P<0.05)，且发生组上述位点G等位基因频率均明显高于未发生组(P<0.05)，经Logistic回归分析证实其均为三氯乙烯药疹性皮炎发生的独立危险因素，可知GR基因R477H位点、G679S位点基因型分布和等位基因频率与该病的发生均存在紧密关系，且G等位基因频率可增加该病的发生风险。GR基因在多种皮肤、黏膜反应性疾病中均被证实发挥重要的作用。GR属于一种核激素受体蛋白超家族，具有转录活化调控基因表达的功能，在生物体中分布较为广泛，主要以可溶性结合蛋白形式存在于细胞液中[10-12]。以往有报道显示，GR基因R477H位点、G679S位点、rs41423247位点基因型和等位基因频率分布与机体正常生理代谢均存在密切的关系[13]。Hu等[14]研究报道，三氯乙烯药疹样皮炎是易感性和环境因素共同作用的结果，当机体受到三氯乙烯刺激后，体内应激反应活性增加，可促使肾上腺分泌大量的糖皮质激素，而糖皮质激素的合成则与GR的代谢紧密相关；另一方面，糖皮质激素的生成可动员机体适应环境，而部分反应严重者可引起免疫活化，过强的免疫应答可损伤局部皮肤和黏膜，从而诱发三氯乙烯药疹样皮炎[15]。据此可以推测，GR基因R477H位点和G679S位点基因型分布和等位基因频率异常均可能是通过上述途径诱发三氯乙烯药疹样皮炎，但具体机制仍需要深入研究。

表4 三氯乙烯药疹样皮炎发生的危险因素Logistic回归分析

本研究还发现，年龄>50岁、三氯乙烯接触时长>3年、直接接触均是三氯乙烯药疹样皮炎发生的危险因素，可知上述因素均可增加三氯乙烯药疹样皮炎的发生风险。华明等[16]研究指出，年龄>50岁是三氯乙烯药疹样皮炎患者死亡的危险因素。年龄>50岁、三氯乙烯接触时长>3年、直接接触均可增加三氯乙烯药疹样皮炎发生风险，分析原因可能是由于年龄>50岁的职工由于长期劳累大多身体素质较差，机体自我调节和适应能力不佳，对三氯乙烯产生的刺激反应大，容易发生三氯乙烯药疹样皮炎；三氯乙烯接触时长>3年者由于长期接触可增加皮肤、黏膜暴露的风险，从而增加该病的发生风险；直接接触可加重对机体产生的刺激性损伤，机体反应加重，三氯乙烯药疹性皮炎的发生风险升高。

综上，在三氯乙烯药疹性皮炎患者中，GR基因R477H位点、G679S位点基因型分布及等位基因频率均存在明显差异，且二者G等位基因频率均可增加该病的发生风险，年龄>50岁、三氯乙烯接触时长>3年、直接接触均为该病的危险因素，需针对存在上述危险因素者加强防控，一旦发生该病则应及时诊治，并将此类患者作为重点监控对象，以改善预后。