免疫比浊法测定抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用研究

张超强　赖春苗　张力球

[摘要]目的 研究免疫比浊法（LATEX）测定抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）对类风湿关节炎（RA）的临床诊断价值。方法选择2016年9月～2018年4月于我院就诊的疑似RA患者182例为研究对象，采集所有人员血清，分别采用LATEX和酶联免疫吸附法（ELISA）检测Anti-CCP水平，并比较结果。结果 LATEX对RA诊断准确率为93.96%（171/182），与金标准结果一致性较好（Kappa=0.837），灵敏度为98.50%，特异度为81.25%，阳性预测值93.62%;ELISA对RA诊断准确率为91.21%（166/182），与金标准结果一致性较好（Kappa=0.761），灵敏度为97.01%，特异度为75.00%，阳性预测值91.55%;LATEX检测高水平总变异系数（2.01%）低于ELISA法总变异系数（2.51%）;LATEX检测低水平总变异系数（2.11%）低于ELISA法总变异系数（2.66%）。结论 LATEX检测Anti-CCP准确率高，敏感度和特异度好，有利于RA早期诊断。

[关键词]风湿关节炎;免疫比浊法;抗环瓜氨酸肽抗体;酶联免疫吸附法

[中图分类号]R446.6

[文献标识码]A

[文章编号]2095-0616（2019）03-82-03

类风湿关节炎（RA）是一种病因不明的慢性自身免疫系统疾病，女性发病率显著高于男性[1]，其特征是手、足、腕、踝等关节呈对称性受累，并伴有关节疼痛、僵硬、肿胀、畸形等临床表现，可通过实验室检查、影像学检查确诊[2]。RA早期临床表现不明显易被忽略，后期致残致畸率高，给患者造成极大痛苦，严重影响患者生活质量[3]。因此RA早期诊断、早期治疗尤为关键。目前基层临床多以ELISA测定类风湿因子（RF）为诊断RA的指标，但RF特异性不高，早期检出率较低[4]。近年来抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）的发现是RA诊断领域新的里程碑[5]。LATEX与ELISA相比可通过全自动生化分析仪自动取样、分析结果，具有方便快捷的优势[6]。本次研究采用LATEX测定Anti-CCP并与ELISA法比较，评价其在RA中诊断价值及优势。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年9月～2018年4月于我院就诊的疑似RA患者182例为研究对象，所有患者均有骨痛、晨僵等临床表现，且排除合并其他免疫系统疾病者。其中男73例，女109例，年龄41～64岁，平均（51.4±6.6）岁。患者血清均进行LATEX和ELISA检验，并以胶体金法结果为RA诊断金标准，将两种检验结果与金标准进行比较。

1.2 方法

（1）LATEX法检测：采用BECKMANAU2700全自动生化分析仪，试剂和校准品均使用宁波美康生物科技股份有限公司试剂。应用干燥真空采血管采集所有研究对象空腹静脉血2.5mL，待血液凝固后分离出血清，2～8°C保存，开机前准备好试剂，检查仪器管路并清理废液;仪器完成自检后采用试剂配套校准品进行多点校准，并进行质控检测。将血清放置在生化仪上自动采样、检测、分析。（2）ELISA检验：采用上海科新生物技术公司出品试剂盒，试剂与样本在室温（20～25°C）平衡30min后进行酶反应试验。

1.3 观察指标

（1）LATEX法检验结果>35U/mL为阳性，≤35U/mL为阴性。ELISA法≤50U/mL临界质控为阴性;>50U/mL临界质控为阳性。（2）依据CLSIEP15-A文件标准LATEX法试剂分别测定高、低2个水平的混合血清，连续检测5d，第5天测4次。计算各水平的批内及总变异系数（CV），并确认其精密度范围是否与厂商标注的相符合。（3）比较两种检查方法批内精密度（同一次测量的精密度）和批间精密度（不同次测量的精密度），以相对标准差

（RSD）和CV表示。

1.4 統计学分析

数据采用SPSS19.0软件进行分析，方法一致性分析采用Kappa检验，Kappa>0.7表示一致性好;Kappa<0.4表示一致性差。计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以百分数（%）表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测Anti-CCP结果比较

LATEX法在对RA的诊断中诊断准确率为93.96%（171/182），与金标准结果一致性较好（Kappa=0.837），灵敏度为98.50%，特异度为81.25%，阳性预测值93.62%;ELISA法对RA诊断准确率为91.21%（166/182），与金标准结果一致性较好（Kappa=0.761），灵敏度为97.01%，特异度为75.00%，阳性预测值91.55%。见表1。

2.2 两种方法检测Anti-CCP精密度比较

LATEX法检测高水平总CV为（2.01%）低于ELISA法总CV（2.51%）;LATEX法检测低水平总CV为（2.11%）低于ELISA法总CV（2.66%）。见表2。

3 讨论

RA早期临床表现隐蔽性强且与骨性关节炎、痛风等疾病症状相似[7]，因此极易被忽视而耽误病情，使患者错过最佳治疗时间，其后期治疗效果往往不佳，导致患者关节强直畸形并发严重功能障碍，严重者甚至丧失劳动力或终身残疾，给患者带来极大痛苦，也给社会造成沉重负担[8]。尽早发现RA并给予治疗，对控制病情、提高患者生活质量至关重要。RF在类风湿性关节炎患者中检出率很高，但RF并不是RA独有的特异性抗体，常造成临床误诊或漏诊[9]。Anti-CCP是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，由RA患者B淋巴细胞分泌，其他疾病和正常人群B淋巴细胞不分泌CCP抗体，特异性高，有利于RA早期诊断[10]。同时张文兰等[11]指出抗CCP抗体检测是提高早期RA诊断效率的关键，因此，本次研究选择Anti-CCP作为检测指标。ELISA法利用抗原（Ag）与抗体（Ab）的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，根据颜色反应的深浅定性或定量分析检测物，是目前临床检测RA相关指标的常用方法[12]。LATEX法是Ag、Ab结合动态测定方法，通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原含量[13]，Ab与可溶性Ag反应，形成一定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒，具有特殊光学性质，可以定量分析[14]。

本次研究显示，ELISA法和LATEX法两种检测方法准确率较高，均在90%以上，且与金标准一致性较好（P<0.05），但LATEX法特异度高于ELISA法（P<0.05），表明LATEX法对RA诊断具有高准确率、高特异性优势，有利于RA的早期诊断。此外，本次研究中LATEX法检测高水平总CV

（2.01%）低于ELISA法总CV（2.51%）;LATEX法检测低水平总CV（2.11%）低于ELISA法总CV（2.66%），说明LATEX法检测精密度小，变异系数小，可提高结果的真实性与准确性。ELISA法操作步骤复杂，Ag结合到固相载体表面时需注意保持其免疫活性，测定时需把受检标本和酶标抗体按不同步骤与固相载体表面抗原反应，洗涤时也有颇多注意事项，人工操作步骤过程中易出现误差;且该检测需要用到酶标仪，试剂厂家众多，产品质量不一，不利于检测结果质量控制[15]。而LATEX法通过全自动生化分析仪自动取样、分析结果，最大限

度地减少人工操作而带来的误差[16]。综上所述，使用LATEX测定Anti-CCP，可减小误差，有效提升RA早期诊断率，且操作简单、省时省力，值得临床推广。

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