9种生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌的室内毒力测定

林霞 于晓丽 王群青 王培松 王英姿

摘要[目的]测定不同生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌的毒力。[方法]采用平皿法，分析3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦参碱AS、2%蛇床子素EC、4%宁南霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井冈霉素AS对樱桃茎腐病菌的抑菌效果。[结果]除多抗霉素外，其余8种供试杀菌剂均对樱桃茎腐病菌表现出一定的毒力效果，但不同杀菌剂间的毒力差别较大。丁子香酚、乙蒜素、蛇床子素、春雷霉素、香芹酚、宁南霉素、苦参碱和井冈霉素对樱桃茎腐病菌烟草疫霉的EC50分别为0.015 3、1.292 5、10.630 9、50.993 2、117.472 0、286.009 2、413.905 0和587.767 4 mg/L。丁子香酚对樱桃茎腐病菌的抑制效果最好，其次为乙蒜素和蛇床子素，春雷霉素、香芹酚、宁南霉素、苦参碱和井冈霉素的抑制效果较差，多抗霉素对樱桃茎腐病菌没有抑制效果。[结论]该研究为田间防治茎腐病和有效药剂的筛选提供理论依据。

关键词樱桃茎腐病;烟草疫霉;生物杀菌剂;毒力

中图分类号S482.2文献标识码A

文章编号0517-6611（2019）02-0129-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.02.038

烟台是我国甜樱桃的主要产区，种植最早、面积最大，种植面积约为1.2万hm2，年产最高约24万 t，分别占全国总量的70%、80%以上[1-3]。樱桃茎腐病是由烟草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的病害，主要危害叶片和新生枝条的茎部，导致叶片和新生枝条干枯死亡[4]。调查发现，夏季感染茎腐病菌的苗木出现大批死亡的现象，尤其是在多雨年份的夏季表现更为明显，发病严重的苗圃几乎毁园[4-5]。但目前未见报道防治樱桃茎腐病的相关药剂。对樱桃茎腐病流行规律和因素、抗性机理、品种资源抗性与评价等方面展开了一系列研究[6]。化学杀菌剂是防治植物病害的重要手段。早期针对烟草疫霉引起的烟草黑胫病进行防治的方法是使用铜制剂，但铜制剂长期使用会积累于土壤中，并污染环境[7]。随后又出现了以代森锰锌为代表的保护性杀菌剂，这类杀菌剂具有表面保护作用，可对病菌进行多位点抑制且不易产生抗药性，但这类杀菌剂在使用过程中用药量大、效果差，对环境污染极其严重，代森锰锌还被WHO、EPA、IARC等机构认定为易于致癌的一类化学物质[8-10]。20世纪70年代研制出了具有内吸活性的杀菌剂，如乙磷铝、甲霜灵、噁霉灵、烯酰吗啉等，为烟草疫霉引起的烟草黑胫病的防治提供了更多的选择[11]，但研究表明烟草疫霉对甲霜灵产生了抗药性[12-16]，且长期使用还会造成环境污染。为了使樱桃产业可持续发展需要寻找安全有效、可交替轮换使用、毒副作用小的杀菌剂。生物杀菌剂具有安全、高效、无污染的优点，对食品安全具有重要作用[17]。为了筛选更多防治樱桃茎腐病安全有效的生物杀菌剂，笔者研究3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦参碱AS、2%蛇床子素EC、4%南宁霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井冈霉素AS 9种生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌的抑菌效果。

1材料与方法

1.1试验药剂3%多抗霉素WP，广东省东莞市瑞德丰生物科技有限公司;0.3%丁子香酚SL，山东省亿嘉农化有限公司;1.5%苦参碱AS，成都新朝阳作物科学有限公司;2%蛇床子素EC，武汉天惠生物工程有限公司;4%南宁霉素AS，四川金珠生态农业科技有限公司;80%乙蒜素EC，天津市汉邦植物保护剂有限责任公司;6%春雷霉素WP，山西省临猗中晋化工有限公司;0.5%香芹酚AS，成都新朝阳作物科学有限公司;10%井冈霉素AS，浙江省桐庐汇丰生物科技有限公司。

1.2试验方法

1.2.1含药培养基配制。1 L 10% V8汁固体培养基：100 mL V8汁中加入CaCO3 1 g，与水1∶9稀释，加入15 g琼脂粉，121 ℃高压灭菌15 min。

用Eppendorf微量可调移液枪取1 mL 10 000 mg/L杀菌剂母液，用灭菌去离子水将供试药剂配成一定浓度的稀释液，取1 mL稀释液加入49 mL 10% V8汁固体培养基中，混合均匀后倒入培养皿中制成含药平板。

1.2.2平皿法。

在无菌环境下，用接种针挑取6 mm的菌丝块，放置于含药平板中央，以不加药平板作为对照，每个浓度重复3次。26 ℃恒温培养5 d，应用十字交叉法垂直测量平板菌落直径，计算药剂对樱桃茎腐病菌菌丝生长的抑制率[18]。

抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×100%

1.3数据分析回归分析各处理浓度的对数值（X）和菌丝生长抑制率几率值（Y），求毒力回归方程和相关系数，得出生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌的抑制中浓度值（EC50）。

2结果与分析

2.1 9种生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌菌丝生长的抑制作用

9种生物杀菌剂对樱桃茎腐病菌菌絲生长的抑制效果见表1。由表1可知，丁子香酚的抑制效果最好，在浓度0.007 812 5～1.000 000 0 mg/L时抑制率为50%～100%;乙蒜素的抑制率次之，浓度0.25～8.00 mg/L时抑制率为10.00%～93.75%;蛇床子素浓度在1.562 5～50.000 0 mg/L时抑制率为10%～90%;春雷霉素浓度在6.25～200.00 mg/L时抑制率为2.5%～95.0%;香芹酚浓度在12.5～400.0 mg/L时抑制率为2.5%～87.5%;宁南霉素浓度在31.25～1 000.00 mg/L时抑制率为3.75%～88.75%;苦参碱浓度在31.25～1 000.00 mg/L时抑制率为0～81.25%;井冈霉素浓度在31.25～1 000.00 mg/L时抑制率为0～57.5%;多抗霉素浓度在31.25%～1 000.00 mg/L时抑制率为1.25%～7.50%。

2.2毒力测定结果

室内毒力测定结果表明，除多抗霉素外，其余8种供试杀菌剂均对樱桃茎腐病菌表现出一定的毒力效果，但不同杀菌剂间的毒力差别较大（表2）。经EC50分析表明，丁子香酚对樱桃茎腐病菌具有很好的抑制作用，其EC50仅为0.015 3 mg/L，其次为乙蒜素和蛇床子素，EC50分别为1.292 5和10.630 9 mg/L，春雷霉素、香芹酚、宁南霉素、苦参碱和井冈霉素的抑制效果较差，EC50为50.993 2～587.767 4 mg/L。

3结论与讨论

该试验的9种生物杀菌剂中，除多抗霉素外，其余8种供试杀菌剂均对樱桃茎腐病菌烟草疫霉表现出一定的毒力效果，但不同杀菌剂间的毒力差别较大。其中，丁子香氛的抑菌效果最佳，其EC50仅为0.015 3 mg/L。丁子香酚是霜疫霉溶解剂，对霜霉、灰霉均有很好的治疗作用。乙蒜素和蛇床子素也有较好的防治效果，EC50分别为1.292 5和10.630 9 mg/L。乙蒜素和蛇床子素屬于植物仿生农药，来源于安全的天然物，具有低毒、低残留的优点。丁子香酚、乙蒜素和蛇床子素等生物药剂也是研配防治樱桃茎腐病复配药剂的最佳选择，能够减少化学农药用量，降低对化学药剂产生抗药性风险。春雷霉素、香芹酚、宁南霉素、苦参碱和井冈霉素对樱桃茎腐病菌的抑制效果较差，其EC50在50.993 2～587.767 4 mg/L。

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